Интерфероны и их роль в клинической медицине. От лечения гриппа до терапии сложных вирусных и бактериальных инфекций. Все о лекарствах Препараты содержащие интерферон альфа 2b

Состав препаратов интерферона зависит от их формы выпуска.

Форма выпуска

Препараты интерферона имеют следующие формы выпуска:

• лиофилизированный порошок для приготовления глазных и назальных капель, инъекционного раствора;
• инъекционный раствор;
• глазные капли;
• глазные пленки;
• назальные капли и спрей;
• мазь;
• дерматологический гель;
• липосомы;
• аэрозоль;
• пероральный раствор;
• ректальные суппозитории;
• вагинальные суппозитории;
• имплантаты;
• микроклизмы;
• таблетки (в таблетках интерферон выпускается под торговой маркой Энтальферон).

Фармакологическое действие

Препараты IFN относятся к группе лекарственных средств противовирусного и иммуномодулирующего действия.

Все IFN обладают противовирусным и противоопухолевым действием. Не менее важным считается и их свойство стимулировать к действию макрофаги — клетки, играющие важную роль в инициации .

IFN способствуют повышению резистентности организма к проникновению вирусов , а также блокируют репродукцию вирусов при их проникновении в клетку. Последнее обусловливается способностью IFN подавлять трансляцию матричной (информационной) РНК вируса .

При этом противовирусное действие IFN не направлено против определенных вирусов , то есть IFN не характеризуются вирусоспецифичностью. Именно этим и объясняется их универсальность и широкий спектр противовирусной активности.

Интерферон — что это такое?

Интерфероны — это класс обладающих сходными свойствами гликопротеинов , которые вырабатываются клетками позвоночных в ответ на воздействие различного рода индукторов как вирусной, так и не вирусной природы.

Согласно Википедии, чтобы биологически активное вещество было квалифицировано в качестве интерферона, оно должно иметь белковую природу, обладать выраженной противовирусной активностью по отношению к различным вирусам , как минимум, в гомологичных (подобных) клетках, «опосредованных клеточными метаболическими процессами, включающими синтез РНК и белка».

Классификация IFN, предложенная ВОЗ и интерфероновым комитетом, основывается на отличиях в их антигенных, физических, химических и биологических свойствах. Кроме того, она учитывает их видовую принадлежность и клеточное происхождение.

По антигенности (антигенной специфичности) IFN принято делить на кислотоустойчивые и кислотолабильные. К кислотоустойчивым относятся альфа и бета интерфероны (их еще называют IFN I типа). Кислотолабильным является интерферон гамма (γ-IFN).

α-IFN продуцируют лейкоциты периферической крови (лейкоциты В- и Т-типа), поэтому ранее он обозначался как лейкоцитарый интерферон . В настоящее время насчитывается по крайней мере 14 его разновидностей.

β-IFN вырабатывают фибробласты , поэтому его также называют фибробластным .

Прежнее обозначение γ-IFN — иммунный интерферон , вырабатывают же его стимулированные лимфоциты Т-типа , NK-клетки (нормальные (натуральные) киллеры; от английского “natural killer”) и (предположительно) макрофаги .

Основные свойства и механизм действия IFN

Все без исключения IFN характеризуются полифункциональной активностью в отношении клеток-мишеней. Наиболее общим их свойством является способность индуцировать в них противовирусное состояние .

Интерферон используется как лечебно-профилактическое средство при различных вирусных инфекциях . Особенностью препаратов IFN является то, что их действие ослабевает при повторных инъекциях.

Механизм действия IFN связан с его способностью сдерживать вирусные инфекции . В результате лечения препаратами интерферона в организме пациента вокруг очага инфекции образуется своеобразный барьер из устойчивых к вирусу неинфицированных клеток, который препятствует дальнейшему распространению инфекции.

Взаимодействуя с еще неповрежденными (интактными) клетками, он препятствует реализации репродуктивного цикла вирусов за счет активации определенных клеточных ферментов (протеинкиназ ).

Наиболее важными функциями интерферонов считают способность подавлять гемопоэз ; модулировать иммунный ответ организма и реакцию воспаления; регулировать процессы пролиферации и дифференциации клеток; подавлять рост и препятствовать размножению вирусных клеток ; стимулировать экспрессию поверхностных антигенов ; подавлять отдельные функции лейкоцитов В- и Т-типа , стимулировать активность NK-клеток и т.д..

Использование IFN в биотехнологии

Разработка методов синтеза и высокоэффективной очистки лейкоцитарного и рекомбинантного интерферонов в количествах, достаточных для производства лекарственных препаратов, позволили открыть возможность применения препаратов IFN для лечения пациентов, у которых диагностирован вирусный гепатит .

Отличительной особенностью рекомбинантных IFN является то, что их получают вне человеческого организма.

Так, например, рекомбинантный интерферон бета-1а (IFN β-1а) получают из клеток млекопитающих (в частности, из клеток яичников китайского хомячка), а сходный с ним по своим свойства интерферон бета-1b (IFN β-1b) вырабатывается принадлежащей к семейству энтеробактерий кишечной палочкой (Escherichia coli ).

Препараты-индукторы интерферона — что это такое?

Индукторами IFN являются препараты, которые сами не содержат интерферон, но при этом стимулируют его выработку.

Фармакодинамика и фармакокинетика

Основным биологическим эффектом α-IFN является ингибирование синтеза вирусных белков . Противовирусное состояние клетки развивается в течение нескольких часов после применения препарата или индукции выработки IFN в организме.

При этом IFN не оказывает влияния на ранние стадии репликативного цикла, то есть на стадии адсорбции, проникновения вируса в клетку (пенетрацию) и высвобождения внутреннего компонента вируса в процессе его «раздевания».

Антивирусное действие α-IFN проявляется даже в случае заражения клеток инфекционными РНК . IFN не проникает в клетку, а только вступает во взаимодействие со специфическими рецепторами на мембранах клеток (ганглиозидами или сходными с ними структурами, в которых содержатся олигосахара ).

Механизм активности IFN альфа напоминает действие отдельных гликопептидных гормонов . Он стимулирует активность генов , часть из которых участвует в кодировании образования продуктов с прямым противовирусным действием .

β интерфероны также обладают противовирусным действием , которое связано сразу с несколькими механизмами действия. Бета интерферон активирует N0-синтетазу, что в свою очередь способствует повышению концентрации оксида азота внутри клетки. Последний играет ключевую роль в подавлении размножения вирусов .

β-IFN активирует вторичные, эффекторные функции атуральных киллеро в , лимфоцитов В-типа , моноцитов крови , тканевых макрофагов (мононуклеарных фагоцитов) и нейтрофильных , которые характеризуются антителозависимой и антителонезависимой цитотоксичностью.

Помимо этого β-IFN блокирует высвобождение внутреннего компонента вируса и нарушает процессы метилирования РНК вируса .

γ-IFN участвует в регуляции иммунного ответа и регулирует выраженность воспалительных реакций. Несмотря на то, что он обладает самостоятельным антивирусным и противоопухолевым эффектом , гамма интерферон очень слаб. При этом он в значительной степени усиливает активность α- и β-IFN.

После парентерального введения максимальная концентрация IFN в отмечается через 3-12 ч. Показатель биодоступности — 100% (причем как после введения под кожу, так и после введения в мышцу).

Длительность периода полувыведения Т½ составляет от 2 до 7 часов. Следовые концентрации IFN в плазме крови не обнаруживаются через 16–24 часа.

Показания к применению

IFN предназначен для лечения вирусных заболеваний , поражающих респираторный тракт .

Кроме того, препараты интерферона назначают пациентам с хроническими формами гепатитов , и Дельта .

Для лечения вирусных заболеваний и, в частности, используется преимущественно IFN-α (причем обе его формы — IFN-альфа 2b и IFN-альфа 2а). “Золотым стандартом” лечения гепатита С принято считать пегилированные интерфероны альфа-2b и альфа-2а. В сравнении с ними обычные интерфероны менее эффективны.

Генетический полиморфизм, отмечающийся в гене IL28B, который отвечает за кодирование IFN лямбда-3, вызывает существенные отличия в эффекте лечения.

Пациенты с генотипом 1 гепатита С с обычными аллелями указанного гена, имеют больше шансов достичь более длительных и более выраженных результатов лечения в сравнении с другими пациентами.

IFN также нередко назначают пациентам с онкологическими заболеваниями : злокачественной , панкреатическими эндокринными опухолями , неходжкинской лимфомой , карциноидными опухолями ; саркомой Капоши , обусловленной ; волосатоклеточным лейкозом , множественной миеломой , раком почки и т.д..

Противопоказания

Интерферон не назначают пациентам с повышенной чувствительностью к нему, а также детям и подросткам, страдающим от тяжелых психических расстройств и расстройств нервной системы , которые сопровождаются мыслями о самоубийстве и попытками самоубийства, тяжелыми и затяжными .

В комбинации с противовирусным препаратом Рибавирином IFN противопоказан пациентам, у которых диагностированы серьезные нарушения в работе почек (состояния, при которых КК менее 50 мл/мин).

Препараты интерферона противопоказаны при (в тех случаях, когда соответствующая терапия не дает ожидаемого клинического эффекта).

Побочные действия

Интерферон относится к категории препаратов, способных вызвать большое количество побочных реакций со стороны различных систем и органов. В большинстве случаев они являются следствием введения интерферона в/в, п/к или в/м, однако спровоцировать их могут и другие фармацевтические формы препарата.

Наиболее частыми побочными реакциями на прием IFN являются:

• анорексия;
• тошнота;
• озноб;
• дрожь в теле.

Несколько реже отмечаются рвота, повышенная , чувство сухости во рту, выпадение волос (), астения ; неспецифические симптомы, напоминающие симптомы гриппа ; боль в спине, депрессивные состояния , скелетно-мышечные боли , мысли о суициде и попытке суицида, общее недомогание, нарушение вкуса и концентрации внимания, повышенная раздражительность, расстройства сна (часто ), артериальная гипотензия , спутанность сознания.

К редким побочным эффектам относятся: боли справа в верхней части живота, высыпания на теле (эритематозные и макулопапулезные), повышенная нервозность, болезненность и выраженное воспаление в месте введения препарата в инъекционной форме, вторичная вирусная инфекция (в том числе инфицирование вирусом простого герпеса ), повышенная сухость кожного покрова, , резь в глазах , конъюнктивит , помутнение зрения, нарушение функции слезных желез , тревожность, лабильность настроения; психотические расстройства , включая , повышенную агрессию и т.д.; гипертермия , диспепсические симптомы , респираторные нарушения, потеря веса, неоформленный стул, гипер- или гипотиреоз , нарушения слуха (вплоть до полной его потери), образование инфильтратов в легких, повышение аппетита, кровоточивость десен, в конечностях, диспноэ , нарушение функции почек и развитие почечной недостаточности , периферическая ишемия , гиперурикемия , нейропатии и т.д..

Лечение препаратами IFN может спровоцировать нарушение репродуктивной функции . Исследования на приматах показали, что интерферон нарушает менструальный цикл у женщин . Кроме того, у женщин, проходивших курс лечения препаратами IFN-α, снижался уровень и в .

По этой причине в случае назначения интерферона женщинам детородного возраста следует использовать барьерные средства контрацепции . Мужчин репродуктивного возраста также рекомендуется информировать о потенциальных побочных эффектах.

В редких случаях лечение интерфероном может сопровождаться офтальмологическими расстройствами, которые выражаются в виде кровоизлияний в сетчатку глаза , ретинопатии (включая в том числе отек макулы ), очаговые изменения сетчатки, снижения остроты зрения и/или ограничения полей зрения, отек дисков зрительных нервов , неврит глазного (второго черепномозгового) нерва , обструкция артерий или вен сетчатки .

Иногда на фоне приема интерферона могут развиваться гипергликемия , симптомы нефротического синдрома , . У пациентов с сахарным диабетом может ухудшаться клиническая картина заболевания.

Не исключается вероятность возникновения , цереброваскулярной геморрагии , мультиформной эритемы , некроза тканей в месте инъекции, кардиальной и цереброваскулярной ишемии , гипертриглицеридермии , саркоидоза (или же обострения его течения), синдромов Лайелла и Стивенса-Джонсона .

Использование интерферона в монотерапии или в сочетании с Рибавирином в единичных случаях может спровоцировать апластическую анемию (АА) или даже ПАККМ (полную аплазию красного костного мозга ).

Зафиксированы также случаи, когда на на фоне лечения препаратами интерферона у пациента развивались различные аутоиммунные и иммуноопосредованные расстройства (в том числе болезнь Верльгофа и болезнь Мошковица ).

Интерферон, инструкция по применению (Способ и дозировка)

Инструкция по применению интерферонов альфа, бета и гамма указывает, что перед тем, как назначить пациенту препарат, рекомендуется определить, насколько чувствительна к нему , ставшая причиной заболевания.

Способ введения интерферона лейкоцитарного человеческого определяется в зависимости от поставленного пациенту диагноза. В большинстве случаев его назначают в виде подкожных инъекций, но в ряде случаев препарат допускается вводить в мышцу или вену.

Дозу для лечения, поддерживающую дозу и продолжительность лечения определяют в зависимости от клинической ситуации и ответа организма пациента на назначенную ему терапию.

Под «детским» интерфероном подразумевается препарат в виде свечей, капель и мази.

Инструкция по применению интерферона для детей рекомендует использовать этот препарат как лечебное, так и как профилактическое средство. Дозу для грудничков и детей более старшего возраста подбирает лечащий врач.

В профилактических целях INF применяют в виде раствора, для приготовления которого используют дистиллированную или кипяченую воду комнатной температуры. Готовый раствор окрашен в красный цвет и опалесцирует. Хранить его следует в холоде не более 24-48 часов. Препарат закапывают в нос детям и взрослым.

При вирусных офтальмологических заболеваниях препарат назначают в форме капель для глаз.

Как только выраженность симптомов заболевания уменьшается, объем инстилляций следует уменьшить до одной капли. Курс лечения — от 7 до 10 дней.

Для лечения поражений, вызванных герпесвирусами , мазь тонким слоем наносят на пораженные участки кожи и слизистых два раза в сутки, выдерживая 12-тичасовые интервалы. Курс лечения — от 3 до 5 дней (пока полностью не восстановится целостность нарушенного кожного покрова и слизистых).

Для профилактики ОРЗ и необходимо смазывать мазью носовые ходы . Кратность процедур в течение 1-й и 3-й недели курса — 2 раза в сутки. В период 2-й недели рекомендуется сделать перерыв. В профилактических целях интерферон следует использовать в течение всего периода эпидемии респираторных заболеваний .

Длительность реабилитационного курса у детей, у которых часто возникают рецидивирующие вирусно-бактериальные инфекции респираторного тракта , ЛОР-органов , рецидивирующая инфекция , вызванная вирусом простого герпеса , составляет два месяца.

Как разводить и как применять интерферон в ампулах?

Инструкция по применению интерферона в ампулах указывает, что перед употреблением ампулу необходимо вскрыть, влить в нее воду (дистиллированную или кипяченую) комнатной температуры до отметки на ампуле, соответствующей 2-м мл.

Содержимое осторожно встряхивают до полного растворения. Раствор вводят в каждый носовой ход дважды в сутки по пять капель, выдерживая между введениями интервалы не менее шести часов.

В лечебных целях IFN начинают принимать при появлении первых симптомов гриппа . Эффективность препарата тем выше, чем раньше пациент начнет его прием.

Наиболее эффективным считается ингаляционный способ (через нос или рот). Для одной ингаляции рекомендуется брать содержимое трех ампул препарата, растворенное в 10-ти мл воды.

Воду предварительно подогревают до температуры не более +37 °С. Процедуры ингаляции проводят дважды в сутки, выдерживая между ними интервал не менее одного-двух часов.

При распылении или закапывании содержимое ампулы растворяют в двух миллилитрах воды и вводят по 0,25 мл (или по пять капель) в каждый носовой ход от трех до шести раз в день. Длительность лечения — 2-3 дня.

Капли в нос для детей в профилактических целях закапывают (по 5 капель) два раза в день, на начальной стадии развития заболевания частоту инстилляций увеличивают: препарат следует вводить не менее пяти-шести раз в сутки через каждые час или два.

Многих интересует можно ли капать в глаза раствор интерферона. Ответ на этот вопрос утвердительный.

Передозировка

Случаи передозировки интерфероном не описаны.

Взаимодействие

β-IFN совместим с кортикостероидными препаратами и АКТГ. Не следует принимать его в период лечения миелосупрессивными лекарственными средствами , в т.ч. цитостатиками (это может спровоцировать аддитивный эффект ).

С осторожностью β-IFN назначают со средствами, клиренс которых в значительной степени зависит от системы цитохрома Р450 (противоэпилептические препараты , некоторые антидепрессанты и др.).

Не следует одновременно принимать α-IFN и Телбивудин . Одновременное применение α-IFN провоцирует взаимное усиление действия в отношении . При совместном применении с фосфазидом может взаимно повышаться миелотоксичность обоих препаратов (рекомендуется тщательно следить за изменениями количества гранулоцитов и;

при сепсисе ;

для лечения детских вирусных инфекций (например, или );

для лечения хронических вирусных гепатитов .

Также IFN используют в терапии, целью которой является реабилитация часто болеющих респираторными инфекциями детей.

Наиболее оптимальный вариант приема для детей- капли в нос: интерферон при таком использовании не проникает в ЖКТ (перед тем как развести препарат для носа, воду следует подогреть до температуры 37°С).

Для грудничков интерферон назначают в форме суппозиториев (150 тысяч МЕ). Свечи для детей следует вводить по одной 2 раза в сутки, выдерживая между введениями 12-часовые интервалы. Курс лечения — 5 дней. Чтобы полностью вылечить у ребенка ОРВИ , как правило, достаточно одного курса.

Для лечения следует брать по 0,5 г мази два раза в сутки. Лечение длится в среднем 2 недели. На протяжении следующих 2-4 недель мазь применяют 3 раза в неделю.

Многочисленные положительные отзывы о препарате свидетельствуют о том, что в этой лекарственной форме он также зарекомендовал себя как эффективное средство для лечения стоматита и воспалившихся миндалин . Не менее эффективными являются и ингаляции с интерфероном для детей.

Эффект от применения препарата в разы увеличивается, если для его введения используется небулайзер (необходимо использовать прибор, распыляющий частички с диаметром более 5 мкм). Ингаляции через небулайзер имеют свою специфику.

Во-первых, интерферон необходимо вдыхать через нос. Во-вторых, перед использованием прибора в нем необходимо отключить функцию подогрева (IFN — это белок, при температуре более 37°С он разрушается).

Для ингаляций в небулайзере содержимое одной ампулы разводят в 2-3 мл дистиллированной или минеральной воды (можно также использовать для этих целей физраствор). Полученного объема хватает на одну процедуру. Кратность процедур в течение суток — от 2 до 4.

Важно помнить, что длительное лечение детей интерфероном не рекомендовано, поскольку к нему развивается привыкание и, следовательно, не развивается ожидаемый эффект.

Интерферон при беременности

Исключение могут составлять случаи, когда ожидаемая польза терапии для будущей матери будет превышать риск возникновения побочных реакций и вредное воздействие на развитие плода.

Не исключена возможность выделения компонентов рекомбинантного IFN с грудным молоком. В связи с тем, что не исключается вероятность воздействия на плод через молоко, IFN не назначают кормящим женщинам.

В крайнем случае, когда избежать назначения IFN нельзя, во время терапии женщине рекомендуется отказаться от кормления грудью. Чтобы смягчить побочное действие препарата (возникновение симптомов, сходных с симптомами гриппа), рекомендуется одновременное назначение с IFN .

Входит в состав препаратов

Входит в перечень (Распоряжение Правительства РФ № 2782-р от 30.12.2014):

ЖНВЛП

ОНЛС

АТХ:

L.03.A.B.05 Интерферон альфа-2b

Фармакодинамика:

Интерферон. Представляет собой высокоочищенный рекомбинантный с молекулярной массой 19 300 дальтон. Получен из клона Escherichia coli путем гибридизации плазмид бактерий с геном человеческих лейкоцитов, кодирующим синтез интерферона. В отличие от интерферона альфа-2а имеет в положении 23.

Оказывает противовирусное действие, которое обусловлено взаимодействием со специфическими мембранными рецепторами и индукцией синтеза РНК и, в конечном счете, белков. Последние, в свою очередь, препятствуют нормальной репродукции вируса или его высвобождению.

Обладает иммуномодулирующей активностью, которая связана с активацией фагоцитоза, стимуляцией образования антител и лимфокинов.

Оказывает антипролиферативное действие на опухолевые клетки.

Препарат увеличивает фагоцитарную активность макрофагов, потенцирует цитотоксическое действие лимфоцитов.

Фармакокинетика:

Проникает в системный кровоток через слизистую оболочку респираторного тракта, в организме подвергается распаду, частично выводится в неизменном виде, главным образом, через почки. Местное применение для терапии вирусных инфекций обеспечивает высокую концентрацию интерферона в очаге воспаления. Метаболизируется печенью, период полувыведения составляет 2-6 часов.

Показания:

Хронический гепатит B;

Волосатоклеточный лейкоз;

Почечноклеточная карцинома;

Кожная T -клеточная лимфома (грибовидный микоз и синдром Сезари);

В ирусный гепатит B;

В ирусный активный гепатит С;

Хронический миелолейкоз;

Саркома Капоши на фоне СПИД;

Злокачественная меланома;

- первичный (эссенциальный) и вторичный тромбоцитоз;

- переходная форма хронического гранулоцитарного лейкоза и миелофиброза;

- множественная миелома;

Р ак почки;

- ретикулосаркома;

- рассеянный склероз;

- профилактика и лечение гриппа и острой респираторной вирусной инфекции.

I.B15-B19.B16 Острый гепатит B

I.B15-B19.B18.1 Хронический вирусный гепатит В без дельта-агента

I.B15-B19.B18.2 Хронический вирусный гепатит С

I.B20-B24.B21.0 Болезнь, вызванная ВИЧ, с проявлениями саркомы Капоши

II.C43-C44.C43 Злокачественная мелонома кожи

II.C64-C68.C64 Злокачественное новообразование почки, кроме почечной лоханки

II.C81-C96.C84 Периферические и кожные Т-клеточные лимфомы

II.C81-C96.C84.0 Грибовидный микоз

II.C81-C96.C84.1 Болезнь Сезари

II.C81-C96.C91.4 Волосатоклеточный лейкоз (Лейкемический ретикулоэндотелиоз)

II.C81-C96.C92.1 Хронический миелоидный лейкоз

Противопоказания:

Д екомпенсированный цирроз печени;

П сихоз;

-повышенная чувствительность к интерферону альфа-2 b;

- тяжелые сердечно-сосудистые заболевания;

Т яжелая депрессия;

А лкогольная или наркотическая зависимость;

- аутоиммунные заболевания;

- о стрый инфаркт миокарда;

- выраженные нарушения системы кроветворения;

-эпилепсия и/или другие нарушения функций ЦНС;

-хронический гепатит у больных, получающих или незадолго до этого получавших терапию иммунодепрессантами (за исключением кратковременного предварительного лечения стероидами).

С осторожностью:

-заболевания печени;

-заболевания почек;

-нарушение костномозгового кроветворения;

-склонность к аутоиммунным заболеваниям;

-склонность к суицидальным попыткам.

Беременность и лактация:

Рекомендации FDA категории С. Сведений о безопасности нет. Не применять! Применение во время беременности возможно только в случае, когда потенциальная польза для матери превышает потенциальный вред для ребенка.

Во время применения препарата следует использовать методы контрацепции.

Сведений о проникновении в грудное молоко нет. Не применять во время кормления грудью.

Способ применения и дозы:

Вводят внутривенно или подкожно. Доза устанавливается индивидуально в зависимости от диагноза и индивидуальных показателей больного.

Подкожное введение в дозе 0,5-1 мкг/кг 1 раз в неделю в течение 6 месяцев. Дозу подбирают с учетом предполагаемой эффективности и безопасности. Если через 6 месяцев происходит элиминация РНК вируса из сыворотки, то лечение продолжают до одного года. Если во время лечения возникают нежелательные реакции, то дозу снижают в 2 раза. При сохранении нежелательных эффектов или их повторном возникновении после изменения дозы лечение прекращают. Снижать дозу также рекомендуют при уменьшении числа нейтрофилов менее 0,75×10 9 /л или количества тромбоцитов менее 50×10 9 /л. Терапию прекращают при снижении числа нейтрофилов менее 0,5×10 9 /л или тромбоцитов - менее 25×10 9 /л. При выраженном нарушении функций почек (клиренс менее 50 мл/мин) больные должны находиться под постоянным наблюдением. При необходимости недельную дозу препарата снижают. Изменение дозы с учетом возраста не требуется. Приготовление раствора: порошкообразное содержимое флакона растворяют в 0,7 мл воды для инъекций, флакон осторожно встряхивают до полного растворения порошка. Готовый раствор следует осмотреть перед введением; в случае изменения цвета использовать его не следует. Для введения используют до 0,5 мл раствора, остатки утилизируют.

Для лечения гриппа и ОРВИ - аэрозоль для местного применения 100 000 ME, вводят 7 раз в день, через каждые 2 часа (суточная доза - до 20 000 ME) в первые два дня заболевания, затем 3 раза в день (суточная доза- до 10 000 ME) в течение пяти дней или до полного исчезновения симптомов заболевания.

Интерферонотерапия проводится на фоне традиционной симптоматической терапии, включающей применение нестероидных противовоспалительных препаратов ( , ) при повышении температуры выше 38,5 °С, антигистаминных препаратов (диазолин, супрастин, тавегил), противокашлевых средств (коделак), муколитических препаратов (микстура от кашля, ), общеукрепляющих средств (глюконат кальция, витамины).

Побочные эффекты:

Со стороны желудочно-кишечного тракта: уменьшение аппетита, рвота, запор, сухость во рту, слабо выраженные боли в животе, тошнота, диарея, нарушение вкусовых ощущений, уменьшение массы тела, небольшие изменения показателей функции печени.

Со стороны нервной системы: головокружение, нарушение сна, беспокойство, агрессивность, депрессия, невропатия, склонность к самоубийству, ухудшение умственной деятельности, нарушения памяти, нервозность, эйфория, парестезии, тремор, сонливость.

Со стороны кровеносной системы: артериальная гипотензия или гипертензия, нарушения деятельности сердечно-сосудистой системы, инфаркт миокарда, тромбоцитопения, тахикардия, аритмия, ишемическая болезнь сердца, лейкопения, гранулоцитопения.

Со стороны дыхательной системы: кашель, пневмония, боли в груди, небольшая одышка, отек легкого.

Со стороны кожных покровов: обратимая алопеция, зуд.

Прочие: антитела к природным или рекомбинантным интерферонам, мышечная скованность, гриппоподобные симптомы.

Передозировка:

Нет данных.

Взаимодействие:

Препарат ингибирует метаболизм теофиллина.

Особые указания:

В период применения препарата необходимо контролировать психический и неврологический статус пациента.

У пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы возможна аритмия. Если аритмия не уменьшается или усиливается, дозу следует уменьшить в 2 раза, либо прекратить лечение.

При выраженном угнетении костномозгового кроветворения необходимо регулярное исследование состава периферической крови.

Влияние на способность управления автотранспортом и другими техническими устройствами

Препарат в виде аэрозоля не влияет на способность к управлению транспортными средствами и обслуживанию движущихся механизмов.

Инструкции

Форма выпуска, состав и упаковка

Раствор для инъекций прозрачный, бесцветный.

Вспомогательные вещества:

0.5 мл - ампулы (5) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
0.5 мл - ампулы (5) - упаковки ячейковые контурные (2) - пачки картонные.
0.5 мл - флаконы (1) - пачки картонные.
0.5 мл - флаконы (5) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
0.5 мл - шприцы стеклянные (1) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
0.5 мл - шприцы стеклянные (1) - упаковки ячейковые контурные (3) - пачки картонные.
0.5 мл - шприцы стеклянные (3) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
0.5 мл - шприцы стеклянные (3) - упаковки ячейковые контурные (3) - пачки картонные.

Раствор для инъекций прозрачный, бесцветный.

Вспомогательные вещества: натрия ацетат, натрия хлорид, этилендиамин тетрауксусной кислоты динатриевая соль, твин-80, декстран 40, вода д/и.

1 мл - ампулы (5) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
1 мл - ампулы (5) - упаковки ячейковые контурные (2) - пачки картонные.
1 мл - флаконы (1) - пачки картонные.
1 мл - флаконы (5) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
1 мл - шприцы стеклянные (1) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
1 мл - шприцы стеклянные (1) - упаковки ячейковые контурные (3) - пачки картонные.
1 мл - шприцы стеклянные (3) - упаковки ячейковые контурные (1) - пачки картонные.
1 мл - шприцы стеклянные (3) - упаковки ячейковые контурные (3) - пачки картонные.

Клинико-фармакологическая группа

Интерферон. Противоопухолевый, противовирусный и иммуномодулирующий препарат

Фармакологическое действие

Интерферон. Альтевир ® оказывает противовирусное, иммуномодулирующее антипролиферативное и противоопухолевое действие.

Интерферон альфа-2b, взаимодействуя со специфическими рецепторами на поверхности клетки, инициирует сложную цепь изменений внутри клетки, включающую в себя индукцию синтеза ряда специфических цитокинов и ферментов, нарушает синтез вирусной РНК и белков вируса в клетке. Результатом этих изменений является неспецифическая противовирусная и антипролиферативная активность, связанная с предотвращением репликации вируса в клетке, торможением пролиферации клеток и иммуномодулирующим действием интерферона. Интерферон альфа-2b стимулирует процесс презентации антигена иммунокомпетентным клеткам, обладает способностью стимулировать фагоцитарную активность макрофагов, а также цитотоксическую активность Т-клеток и ""натуральных киллеров"", участвующих в противовирусном иммунитете.

Предотвращает пролиферацию клеток, особенно опухолевых. Оказывает угнетающее влияние на синтез некоторых онкогенов, приводящее к ингибированию опухолевого роста.

Фармакокинетика

Всасывание

При п/к или в/м введении интерферона альфа-2b его биодоступность составляет от 80% до 100%. После введения интерферона альфа-2b Т max в плазме крови составляет 4-12 ч, T 1/2 - 2-6 ч. Через 16-24 ч после введения рекомбинантный интерферон в сыворотке крови не определяется.

Метаболизм

Метаболизм осуществляется в печени.

Интерфероны альфа способны нарушать окислительные метаболические процессы, снижая активность микросомальных ферментов печени системы цитохрома Р450.

Выведение

Выводится в основном почками путем клубочковой фильтрации.

Показания к применению препарата

В составе комплексной терапии у взрослых:

— при хроническом вирусном гепатите В без признаков цирроза печени;

— при хроническом вирусном гепатите С в отсутствии симптомов печеночной недостаточности (монотерапия или комбинированная терапия с рибавирином);

— при папилломатозе гортани;

— при остроконечных кондиломах;

— при волосатоклеточном лейкозе, хроническом миелолейкозе, неходжкинской лимфоме, меланоме, множественной миеломе, саркоме Капоши на фоне СПИД, прогрессирующем раке почки.

Режим дозирования

Применяют п/к, в/м и в/в. Лечение должно быть начато врачом. Далее с разрешения врача пациент может вводить себе поддерживающую дозу самостоятельно (в случаях, когда препарат назначен п/к или в/м).

Хронический гепатит В: Альтевир ® вводят п/к или в/м в дозе 5-10 млн. ME 3 раза в неделю в течение 16-24 недель. Лечение прекращают после 3-4 месяцев применения при отсутствии положительной динамики (по данным исследования ДНК вируса гепатита В).

Хронический гепатит С: Альтевир ® вводят п/к или в/м в дозе 3 млн. ME 3 раза в неделю в течение 24-48 недель. У пациентов с рецидивирующим течением заболевания и больных, ранее не получавших лечение интерфероном альфа-2b, эффективность лечения увеличивается при комбинированной терапии с рибавирином. Продолжительность комбинированной терапии составляет не менее 24 недель. Терапию Альтевиром следует проводить 48 недель больным хроническим гепатитом С и 1-м генотипом вируса с высокой вирусной нагрузкой, у которых к концу первых 24 недель лечения в сыворотке крови не определяется РНК вируса гепатита С.

Папилломатоз гортани: Альтевир ® вводят п/к в дозе 3 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю. Лечение начинают после хирургического (или лазерного) удаления опухолевой ткани. Дозу подбирают с учетом переносимости препарата. Достижение положительного ответа может потребовать проведения лечения в течение 6 месяцев.

Волосатоклеточный лейкоз: рекомендуемая доза Альтевира для п/к введения пациентам после спленэктомии или без нее составляет 2 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю. В большинстве случаев нормализация одного и более гематологических показателей наступает через 1-2 месяца лечения, возможно увеличение сроков лечения до 6 месяцев. Этого режима дозирования следует придерживаться постоянно, если при этом не происходит быстрого прогрессирования заболевания или возникновения симптомов тяжелой непереносимости препарата.

Хронический миелолейкоз: рекомендуемая доза Альтевира в качестве монотерапии - 4-5 млн. МЕ/м 2 в день п/к ежедневно. Для поддержания числа лейкоцитов может потребоваться применение в дозе 0.5-10 млн. МЕ/м 2 . Если лечение позволяет добиться контроля числа лейкоцитов, то для поддержания гематологической ремиссии препарат следует применять в максимальной переносимой дозе (4-10 млн. МЕ/м 2 ежедневно). Препарат необходимо отменить через 8-12 недель, если терапия не привела к частичной гематологической ремиссии или клинически значимому снижению числа лейкоцитов.

Неходжкинская лимфома: Альтевир ® применяют в качестве адъювантной терапии в комбинации со стандартными схемами химиотерапии. Препарат вводят п/к в дозе 5 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю в течение 2-3 месяцев. Дозу необходимо корректировать в зависимости от переносимости препарата.

Меланома: Альтевир ® применяют в качестве адъювантной терапии при имеющемся высоком риске рецидива у взрослых после удаления опухоли. Альтевир ® вводят в/в в дозе 15 млн. МЕ/м 2 5 раз в неделю в течение 4 недель, затем п/к в дозе 10 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю в течение 48 недель. Дозу необходимо корректировать в зависимости от переносимости препарата.

Множественная миелома : Альтевир ® назначают в период достижения устойчивой ремиссии в дозе 3 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю п/к.

Саркома Капоши на фоне СПИД: оптимальная доза не установлена. Препарат можно применять в дозах 10-12 млн. МЕ/м 2 /сут п/к или в/м. В случае стабилизации заболевания или ответа на лечение, терапию продолжают до тех пор, пока не произойдет регресс опухоли или не потребуется отмена препарата.

Рак почки: оптимальная доза и схема применения не установлены. Рекомендуется применять препарат п/к в дозах от 3 до 10 млн. МЕ/м 2 3 раза в неделю.

Приготовление раствора для в/в введения

Набирают объем раствора Альтевира, необходимый для приготовления требуемой дозы, добавляют к 100 мл стерильного 0.9% раствора натрия хлорида и вводят в течение 20 мин.

Побочное действие

Общие реакции: очень часто - лихорадка, слабость (являются дозозависимыми и обратимыми реакциями, исчезают в течение 72 ч после перерыва в лечении или его прекращения), озноб; менее часто - недомогание.

Со стороны ЦНС: очень часто - головная боль; менее часто - астения, сонливость, головокружение, раздражительность, бессонница, депрессия, суицидальные мысли и попытки; редко - нервозность, тревожность.

Со стороны костно-мышечной системы: очень часто - миалгия; менее часто - артралгия.

Со стороны пищеварительной системы: очень часто - снижение аппетита, тошнота; менее часто - рвота, диарея, сухость во рту, изменение вкуса; редко - боль в животе, диспепсия; возможно обратимое повышение активности печеночных ферментов.

Со стороны сердечно-сосудистой системы: часто - снижение АД; редко - тахикардия.

Дерматологические реакции: менее часто - алопеция, повышенное потоотделение; редко - кожная сыпь, кожный зуд.

Со стороны системы кроветворения : возможны обратимые лейкопения, гранулоцитопения, снижение уровня гемоглобина, тромбоцитопения.

Прочие: редко - снижение массы тела, аутоиммунный тиреоидит.

Противопоказания к применению препарата

— тяжелые сердечно-сосудистые заболевания в анамнезе (неконтролируемая хроническая сердечная недостаточность, недавно перенесенный инфаркт миокарда, выраженные нарушения сердечного ритма);

— тяжелая почечная и/или печеночная недостаточность (в т.ч. вызванная наличием метастазов);

— эпилепсия, а также тяжелые нарушения функций ЦНС, особенно выражающиеся депрессией, суицидальными мыслями и попытками (в т.ч. в анамнезе);

— хронический гепатит с декомпенсированным циррозом печени и у больных, получающих или получавших недавно лечение иммунодепрессантами (за исключением завершенного кратковременного курса лечения ГКС);

— аутоиммунный гепатит или иное аутоиммунное заболевание;

— лечение иммунодепрессантами после трансплантации;

— заболевание щитовидной железы, не поддающееся контролю общепринятыми терапевтическими методами;

— декомпенсированные заболевания легких (в т.ч. ХОБЛ);

— декомпенсированный сахарный диабет;

— гиперкоагуляция (в т.ч. тромбофлебит, тромбоэмболия легочной артерии);

— выраженная миелодепрессия;

— беременность;

— период лактации (грудного вскармливания);

— повышенная чувствительность к компонентам препарата.

Применение препарата при беременности и кормлении грудью

Препарат противопоказан при беременности и в период лактации (грудного вскармливания).

Применение при нарушениях функции печени

Применение при нарушениях функции почек

Препарат противопоказан при тяжелой почечной и/или печеночной недостаточности (в т.ч. вызванными наличием метастазов).

Особые указания

До лечения Альтевиром хронического вирусного гепатита В и С рекомендуется провести биопсию печени, чтобы оценить степень повреждения печени (признаки активного воспалительного процесса и/или фиброза). Эффективность лечения хронического гепатита С увеличивается при комбинированной терапии Альтевиром и рибавирином. Применение Альтевира не эффективно при развитии декомпенсированного цирроза печени или печеночной комы.

В случае возникновения побочных эффектов во время лечения Альтевиром дозу препарата следует снизить на 50% или временно отменить препарат до их исчезновения. Если побочные эффекты сохраняются или возникают вновь после снижения дозы, или наблюдается прогрессирование заболевания, то лечение Альтевиром следует прекратить.

При снижении уровня тромбоцитов ниже 50x10 9 /л или уровня гранулоцитов ниже 0.75x10 9 /л рекомендуется уменьшение дозы Альтевира в 2 раза с контролем анализа крови через 1 неделю. Если указанные изменения сохраняются, то препарат следует отменить.

При снижении уровня тромбоцитов ниже 25x10 9 /л или уровня гранулоцитов ниже 0.5 х10 9 /л рекомендуется отмена препарата Альтевир ® с контролем анализа крови через 1 неделю.

У пациентов, получающих препараты интерферона альфа-2b, в сыворотке крови могут определяться антитела, нейтрализующие его противовирусную активность. Практически во всех случаях титры антител невысоки, их появление не приводит к снижению эффективности лечения или возникновению других аутоиммунных нарушений.

Передозировка

Данные по передозировке препарата Альтевир ® не предоставлены.

Лекарственное взаимодействие

Лекарственное взаимодействие между Альтевиром и другими лекарственными средствами полностью не изучено. С осторожностью следует применять Альтевир ® одновременно со снотворными и седативными средствами, наркотическими анальгетиками и препаратами, потенциально оказывающими миелодепрессивный эффект.

При одновременном назначении Альтевира и теофиллина следует контролировать концентрацию последнего в сыворотке крови и при необходимости изменять режим его дозирования.

При применении Альтевира в комбинации с химиотерапевтическими препаратами (цитарабин, циклофосфамид, доксорубицин, тенипозид) повышается риск развития токсических эффектов.

Условия отпуска из аптек

Препарат отпускается по рецепту.

Условия и сроки хранения

Препарат следует хранить в недоступном для детей месте, в соответствии с СП 3.3.2-1248-03 при температуре от 2° до 8°С; не замораживать. Срок годности - 18 месяцев.

Транспортировать при температуре от 2° до 8°С; не замораживать.

"

Изобретение относится к генной инженерии, биотехнологии, медицине, фармакологии. Новая рекомбинантная мультикопийная плазмидная ДНК pSX50, кодирующая синтез лейкоцитарного альфа-2b интерферона человека, экспрессия которого находится под контролем лактозного и триптофанового промоторов и терминатора транскрипции. В результате трансформации клеток реципиентного штамма Е. coli BL21 рекомбинантной плазмидной ДНК pSX50 получен штамм Е. coli SX50 - продуцент рекомбинантного лейкоцитарного альфа-2b интерферона человека с продуктивностью до 0.9-1.0 г альфа-2b интерферона с 1 л культуральной среды. Способ получения рекомбинантного альфа-2b интерферона основан на использовании созданного рекомбинантного штамма Е. coli SX50 и предусматривающий его глубинное культивирование на питательной среде с пониженным содержанием триптофана при непрерывном добавлении питательных субстратов в процессе биосинтеза, механическое разрушение клеток микроорганизма при высоком давлении, растворение агрегированного белка в концентрированном растворе гуанидин гидрохлорида с последующей ренатурацией интерферона в физиологических буферных растворах в присутствии хаотропных агентов и его очисткой с использованием трехстадийной хроматографической очистки интерферона на смолах типа Chelating Sepharose Fast Flow иммобилизованной ионами Cu +2 , ионообменной хроматографии на ионообменных смолах типа СМ Sephsrose Fast Flow и гель фильтрационной хроматографии на смолах типа Superdex 75. Способ позволяет получать субстанцию интерферона более 99% чистоты по данным электрофореза в редуцирующих и нередуцирующих условиях при окрашивании гелей серебром и более 98% по данным RF HPLC и не содержащую пирогенов (LAL-тест) в количествах не менее 400-800 мг с 1 л культуральной среды. 3 н. и 3 з.п ф-лы, 6 ил.

Рисунки к патенту РФ 2242516

Изобретение относится к генно-инженерным лекарственным препаратам, получаемым биотехнологическим путем, а именно к способам промышленного получения рекомбинантного лейкоцитарного интерферона альфа-2b человека медицинского назначения (далее интерферон), а также к рекомбинантньм штаммам продуцентам Escherichia coli (E.coli) и плазмидным ДНК, кодирующим синтез интерферона.

Интерфероны представляют собой белковые молекулы с молекулярной массой от 15000 до 21000 дальтон, продуцируемые и секретируемые клетками в ответ на вирусную инфекцию или другие возбудители. Выделяют три основные группы интерферонов: альфа, бета и гамма. Сами по себе эти группы не являются однородными и могут содержать несколько различных молекулярных разновидностей интерферона. Так, выделено более 14 генетических разновидностей интерферона альфа, которые представляют интерес и находят широкое применение в медицине в качестве противовирусных, антипролиферативных и иммуномодулирующих средств.

Известны способы получения лейкоцитарного интерферона человека из лейкоцитов донорской крови человека, индуцированных вирусами и другими индукторами (SU1713591, RU 2066188 , RU 2080873).

Основным недостатком этих способов получения интерферонов являются вероятность контаминации конечного продукта вирусами человека, такими как вирус гепатитов В и С, вируса иммунодефицита и др.

В настоящее время более перспективным признан способ получения интерферона микробиологическим синтезом, который обеспечивает возможность получения целевого продукта со значительно более высоким выходом из сравнительно недорогого исходного сырья. Используемые при этом подходы позволяют создать оптимальные для бактериальной экспрессии варианты структурного гена, а также регуляторных элементов, контролирующих его экспрессию.

В качестве исходных микроорганизмов используют различные конструкции штаммов Pichia pastoris, Pseudomonas putida и Escherichia coli.

Недостатком использования P. pastoris в качестве продуцента интерферона (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //High level expression of human IFN-2b in Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995), является крайне сложные условия ферментации этого типа дрожжей, необходимость строго поддерживать концентрацию индуктора, в частности метанола, в процессе биосинтеза. Недостатком использования штаммов Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) является сложность процесса ферментации при низком уровне экспрессии (10 мг интерферона на 1 л культуральной среды). Более продуктивным является использование штаммов Escherichia coli (Semin. Oncol.,1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9):S9-41-S9-51).

Известно большое количество плазмид и созданных на их основе штаммов Е. coli, экспрессирующих интерферон: штаммы Е. coli ATCC 31633 и 31644 с плазмидами Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 или Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35-AHL6 (SU 1764515), штамм Е. coli pINF- AP2 (SU 1312961), штамм Е. coli pINF- F-Pa (AU 1312962), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой p280/21FN (Кравченко В.В. и др. Биоорганическая химия, 1987, т.13, №9, с.1186-1193), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой pINF14 (SU 1703691), штамм E.coli SG 20050 с плазмидой pINF16 ( RU 2054041) и др. Недостатком технологий, основанных на использовании этих штаммов, является их нестабильность, а также недостаточный уровень экспрессии интерферона.

Наряду с особенностями используемых штаммов эффективность процесса во многом зависит от используемой технологии выделения и очистки интерферона.

Известен способ получения интерферона, включающий в себя культивирование клеток Ps. putida, разрушение биомассы, обработку полиэтиленимином, фракционирование сернокислым аммонием, гидрофобную хроматографию на фенилсилохроме С-80, рН-фракционирование лизата, его концентрирование и диафильтрацию, ионообменную хроматографию на целлюлозе DE-52, элюирование в градиенте рН, ионообменную хроматографию полученного элюента на целлюлозе СМ-52, концентрирование пропусканием через кассету фильтров и гель-фильтрацию на Сефадексе G-100 (SU 1640996). Недостатком этого способа кроме сложной многостадийной ферментации является многостадийность при получении конечного продукта.

Известен также способ получения интерферона, включающий в себя культивирование штамма E.coli SG 20050/pIF16, в LB-бульоне в колбах в термостатированном шейкере, центрифугирование биомассы, ее промывку буферным раствором и обработку ультразвуком для разрушения клеток. Полученный лизат центрифугируют, промывают 3М раствором мочевины в буфере, растворяют в растворе гуанидин хлорида в буфере, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют, проводят окислительный сульфитолиз, диализ против 8 М мочевины, ренатурацию и окончательную двухстадийную хроматографию на СМ-52 целлюлозе и сефадексе G-50 ( RU 2054041). Недостатками этого способа является его относительно невысокая производительность основных этапов процесса выделения и очистки. В особенности это относится к ультразвуковой обработке продукта, диализу и окислительному сульфитолизу, что приводит к нестабильности выхода интерферона, а также к невозможности использования этого метода для промышленного производства интерферона.

В качестве наиболее близкого аналога (прототипа) может быть указан способ получения лейкоцитарного интерферона человека, заключающийся в культивировании рекомбинантного штамма E.coli, замораживании полученной биомассы при температуре не выше -70°С, размораживании, разрушении клеток микроорганизма лизоцимом, удалении ДНК и РНК введением в лизат ДНК-азы и очисткой выделенной нерастворимой формы интерферона отмывкой буферным раствором с детергентами, растворении осадка интерферона в растворе гуанидин гидрохлорида, ренатурации и одностадийной очистке ионообменной хроматографией. В качестве продуцента используют штамм E.coli SS5, полученный с помощью рекомбинантной плазмиды pSS5, содержащей три промотора: P lac , P t7 и P trp , и ген альфа -интерферона с введенными нуклеотидными заменами.

Экспрессия интерферона штаммом E.coli SS5, содержащим эту плазмиду, контролируется тремя промоторами: P lac , P t7 и P trp . Уровень экспрессии интерферона составляет около 800 мг на 1 л клеточной суспензии (RU 2165455).

Недостатком способа является низкая технологичность использования ферментативного разрушения клеток, ДНК и РНК микроорганизма и одностадийная хроматографическая очистка интерферона. Это обуславливает нестабильность процесса выделения интерферона, приводит к снижению его качества и ограничивает возможность использования приведенной схемы для промышленного производства интерферона. Недостатками данной плазмиды и штамма на ее основе являются использование в плазмиде сильного нерегулируемого промотора фага Т7 в штамме Е. coli BL21 (DE3), в котором ген Т7 РНК полимеразы находится под промотором lac оперона и который всегда "течет". Следовательно, в клетке непрерывно происходит синтез интерферона, что приводит к диссоциации плазмиды и снижению жизнеспособности клеток штамма, и в результате - снижение выхода интерферона.

Задачей данного изобретения является конструирование рекомбинантого промышленного штамма продуцента Е. coli с помощью новой рекомбинантной плазмидной ДНК, обладающего высоким уровнем биосинтеза интерферона, и разработка эффективной промышленной технологии получения субстанции интерферона медицинского назначения, соответствующей по качеству "European Pharmacopoeia " для субстанции интерферона альфа-2b.

Указанная задача решалась созданием рекомбинантной плазмидной ДНК pSX50 и штамма Escherichia coli SX50, депонированный во Всероссийской коллекции промышленных штаммов ФГУП ГосНИИ генетики, номер ВКПМ В-8550,

а также способом получения рекомбинантного альфа-2b интерферона, основанным на использовании рекомбинантного штамма Е. coli SX50 и предусматривающим его глубинное культивирование на питательной среде с пониженным содержанием триптофана при непрерывном добавлении питательных субстратов в процессе биосинтеза, механическое разрушение клеток микроорганизма при высоком давлении, растворение агрегированного белка в концентрированном растворе гуанидин гидрохлорида с последующей ренатурацией интерферона в физиологических буферных растворах в присутствии хаотропных агентов и трехстадийной хроматографической очисткой интерферона на смолах типа Chelating Sepharose Fast Flow, иммобилизованной ионами Сu +2 , ионообменной хроматографии на ионообменных смолах типа CM Sepharose Fast Flow и гель фильтрационной хроматографии на смолах типа Superdex 75.

Согласно изобретению предлагается новая рекомбинантная мультикопийная плазмидная ДНК pSX50, кодирующая синтез лейкоцитарного альфа-2b интерферона человека, экспрессия которого находится под контролем лактозного и триптофанового промоторов и терминатора транскрипции. Плазмида pSX50 имеет 3218 пар оснований (п.о.) и характеризуется наличием следующих фрагментов:

Последовательность с 1 нуклеотида по 176 нуклеотид (н.) включает фрагмент ДНК размером 176 п.о., содержащий триптофановый промотор (P trp);

Последовательность с 177 н. по 194 н. включает синтетический фрагмент ДНК размером 18 п.о., содержащий последовательность Шайн Дельгарно, ответственный за инициацию трансляции;

Последовательность с 195 н. по 695 н. включает фрагмент ДНК размером 501 п.о., содержащий последовательность гена интерферона со следующими нуклеотидными заменами: в положении 37 замена А на С, в положении 39 замена G на Т, в положении 40 замена А на С, в положении 42 замена G на Т, в положении 67 замена А на С, в положении 69 замена G на Т, в положении 70 замена А на С, в положении 72 замена А на Т, в положении 96 замена G на А, в положении 100 замена А на С, в положении 102 замена А на Т, в положении 114 замена А на С, в положении 120 замена С на G, в положении 126 замена G на А, в положении 129 замена G на А, в положении 330 замена С на G, в положении 339 замена G на А, в положении 342 замена G на А, в положении 487 замена А на С, в положении 489 замена А на Т, в положении 495 замена G на А;

Последовательность с 696 н. по 713 н. включает синтетический фрагмент ДНК размером 18 п.о., содержащий синтетический полилинкер;

Последовательность с 714 н. по 1138 н. включает фрагмент ДНК плазмиды рКК223-3 с 4129 н. по 4553 н. размером 425 п.о., содержащий последовательность строгого терминатора транскрипции rrnBT 1 T 2 ;

Последовательность с 1139 н. по 1229 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC19 с 2487 н. по 2577 н. размером 91 п.о., содержащий промотор гена -лактомазы (ген устойчивости к ампициллину - Аmр R);

Последовательность с 1230 н. по 2045 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC4K с 720 н. по 1535 н. размером 816 п.о., содержащий структурную область гена kan;

Последовательность с 2046 н. по 3218 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC19 с 1625 по 453 н. размером 1173 п.н., содержащий последовательность, ответственную за репликацию плазмиды (ori) и lac промотора (P lac).

На фиг.1-5 изображены схемы конструирования и физическая карта плазмиды рSХ50.

На фиг.6 представлена установленная для плазмиды pSX50 полная последовательность нуклеотидов.

Штамм Escherichia coli SX50 получен трансформацией клеток Escherichia coli BL21 плазмидой pSX50 с использованием традиционной генно-инженерной технологии. Штамм E.Coli SX50 характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки

Клетки мелкие, прямые, утолщенной палочковидной формы, грамотрицательные, неспороносные. Клетки хорошо растут на простых питательных средах. При росте на агаре "Дифко" образуются круглые, гладкие, выпуклые, мутные, блестящие, серые колонии, с ровными краями. При росте в жидких средах (в минимальной среде с глюкозой или в LB-бульоне) образуют интенсивную ровную муть.

Физико-биологические признаки

Аэроб. Температурный диапазон роста 4-42°С при оптимуме рН 6,5-7,5.

В качестве источника азота используют как минеральные соли в аммонийной и нитратной формах, так и органические соединения в виде аминокислот, пептона, триптона, дрожжевого экстракта и т.д.

В качестве источника углерода используют аминокислоты, глицерин, углеводы. Устойчивость к антибиотикам. Клетки проявляют устойчивость к канамицину (до 100 мкг/мл).

Штамм Escherichia coli 8Х50 - продуцент интерферона.

Способ, условия и состав среды для хранения штамма

В L-arape с добавлением канамицина до концентрации 20 мкг/мл под маслом, в L-бульоне, содержащем 15% глицерина и соответствующими антибиотиками в ампулах при температуре минус 70°С, в лиофилизированном состоянии в ампулах при температуре плюс 4°С.

Штамм Escherichia coli SX50 идентифицирован по Определителю Берги (1974) как штамм вида Escherichia coli.

Способ промышленного получения альфа-2b интерферона

Особенностью заявляемого способа является разработка технологии, позволяющая выделять интерферон из нерастворимой формы, накапливающейся в течение ферментации, что позволяет существенно упростить технологическую схему процесса выделения и повысить выход целевого продукта.

Способ заключается в культивировании штамма Escherichia coli SХ50 в питательной среде, с постоянным добавлением питательных субстратов, предпочтительно глюкозы и дрожжевого экстракта, в процессе биосинтеза, предпочтительно с пониженным содержанием триптофана, механическом разрушении клеток микроорганизма при высоком давлении 700-900 bar, растворении интерферона в буферном растворе гуанидин гидрохлорида, ренатурации интерферона в физиологических буферных растворах в присутствии хаотропных агентов, с последующей трехстадийной хроматографической очистке интерферона на смолах типа Chelating Sepharose Fast Flow, иммобилизованных ионами Сu +2 , ионообменную хроматографию на ионообменных смолах типа CM Sepharose Fast Flow и гель фильтрационную хроматографию на смолах типа Superdex 75.

Оптимальными условиями проведения отдельных стадий получения интерферона являются следующие:

Ферментацию проводят при непрерывном добавлении субстратов в течение всего процесса, что обуславливает высокий уровень экспрессии интерферона;

Разрушение клеток осуществляют в дезинтеграторе типа Гаулин при давлении 900 bar;

Удаление растворимых клеточных компонентов (ДНК, РНК, белков, липополисахаридов и т.д.) производят промыванием нерастворимой формы интерферона буферными растворами, содержащими детергенты (Тритон XI00, мочевина и т.д.);

Образовавшийся осадок, содержащий интерферон, растворяют в буферном растворе 6 М гуанидина гидрохлорида;

Ренатурацию интерферона проводят в физиологическом буферном растворе, содержащем хаотропные агенты;

Трехстадийную хроматографическую очистку интерферона проводят на Chelating Sepharose Fast Flow, иммобилизованной ионами Сu +2 , на катионообменной смоле СМ Sepharose Fast Flow и гель фильтрационную хроматографию на смоле типа Superdex 75;

После каждой хроматографической очистки проводят стерилизующую фильтрацию через апирогенные фильтры с размерами пор 0.22 мкм.

Выход интерферона в результате применения описанного способа составляет примерно 400-800 мг интерферона с 1 л культуральной среды. Качество получаемого продукта соответствует нормам и требованиям "European Pharmacopoeia" для субстанции альфа-2b интерферона.

Существенными отличиями заявляемого способа от прототипа являются:

Использование конструкции штамма, с более высокой производительностью, что позволяет получать при биосинтезе большее количество интерферона с 1 л культуральной среды;

Использование эффективного механического разрушения клеточной биомассы, что позволяет получать более чистый экстракт нерастворимой формы интерферона за более короткое время, с меньшими потерями;

Использование физиологических буферных растворов при ренатурации в присутствии хаотропных агентов позволяет повысить выход корректно ренатурированной формы интерферона;

Трехстадийная хроматографическая очистка интерферона позволяет получать субстанцию интерферона более 99% чистоты по данным электрофореза в редуцирующих и нередуцирующих условиях при окрашивании гелей серебром и более 98% по данным RF HPLC и практически не содержащую пирогенов (LAL-тест).

Сущность и преимущества заявляемой группы изобретений иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Конструирование рекомбинантной плазмиды рSХ50

Способ конструирования плазмиды pSX50 включает следующие этапы:

Конструирование векторной плазмиды pSX10;

1. конструирование плазмиды pSX3 (2641 п.о.)

2. конструирование векторной плазмиды pSX10 (2553 п.о.)

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX41 (3218 п.о.);

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX43 (3218 п.о.);

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX45 (3218 п.о.);

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX50 (3218 п.о.).

Конструирование векторной плазмиды pSX10

Векторная плазмида pSX10 представляет собой вектор pUC19, в котором кодирующая последовательность гена бета лактомазы, обеспечивающая устойчивость к ампициллину, заменяется кодирующей последовательностью гена kаn и содержит терминатор транскрипции из плазмиды рКК223-3.

Конструирование векторной плазмиды pSS10 проводят в две стадии:

Получение плазмиды pSX3 (2641 п.о.), представляющей собой плазмиду pUC19, в которой кодирующая область аmp гена заменяется на кодирующую область гена kan;

Получение веторной плазмиды pSX10 (2553 п.о.), представляющей собой плазмиду pSX3, в которой за BamHI сайтом вставлен фрагмент ДНК, кодирующий терминатор транскрипции ггBT 1 T 2 .

Для получения плазмиды pSX3 проводят пять раундов амплификации ДНК методом ПЦР (полимеразная цепная реакция). В ходе первого раунда, используя ДНК плазмиды pUC19 в качестве матрицы, проводят амплификацию фрагмента ДНК размером 1828 п.о. (фрагмент PU1-PU2) с помощью праймеров:

Данную и последующие ПЦР реакции проводят в следующих условиях: 20 mМ Tis-HCl, рН 8.8, 10 mM (NH 4) 2 SO 4 ,10 mМ КСl, 2 тМ MgCl 2 , 0.1% Triton Х100,0.1 mg/ml BSA, 0.2 mM каждого dNTP, 1.25 ед. Pfu ДНК полимеразы, 100 нг ДНК. Процесс амплификации состоит из следующих стадий: прогревание при 95°С 5 мин, 35 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 2 мин 72°С) и инкубация 10 мин при 72°С. После амплификации (и после последующих амплификаций) фрагмент ДНК очищают электрофоретически в 1% агарозном геле. В ходе второго и третьего раундов, используя ДНК плазмиды pUC4K в качестве матрицы, проводят амплификацию фрагмента ДНК размером 555 п.о. (фрагмент КМ1-КМ2) с помощью праймеров:

и амплификацию фрагмента ДНК размером 258 п.о. (КМЗ-КМ4) с праймеров

В пятом раунде ПЦР проводят объединение фрагментов (PU1-PU2) и (КМ1-КМ4) в следующих условиях: прогревание при 95°С 5 мин, 5 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 10 мин 72°С) и инкубация 10 мин при 72°С. ДНК, полученную после последней ПЦР, прямо трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК и проводят рестрикционный анализ. В результате получают плазмиду рSХ3 размером 2641 п.о.

Для получения векторной плазмиды pSX10 проводят три раунда амплификации ДНК методом ПЦР. В ходе первого раунда, используя ДНК плазмиды pSX3 в качестве матрицы, проводят амплификацию фрагмента ДНК размером 2025 п.о. (фрагмент 10.1-10.2) с помощью праймеров:

В ходе второго раунда, используя ДНК плазмиды рКК223-3 в качестве матрицы, проводят амплификацию фрагмента ДНК размером 528 п.о. (фрагмент КК1-КК2) с помощью праймеров:

В третьем раунде ПЦР проводят объединение фрагментов (10.1-10.2) и (КК1-КК2) в следующих условиях: прогревание при 95°С 5 мин, 5 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 10 мин 72°С) и инкубация 10 мин при 72°С. ДНК, полученную после последней ПЦР, прямо трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК и проводят рестрикционный анализ. В результате получают плазмиду pSX10 размером 2553 п.о.

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX41

Рекомбинантная плазмида pSX41 представляет собой Hind III - BamHI фрагмент ДНК векторной плазмиды pSX3 (2529 п.о.), Hind III - EcoRI фрагмент ДНК размером 168 п.о., кодирующий промотор триптофанового оперона Е. coli (P trp), EcoRI-XbaI синтетический фрагмент ДНК размером 20 п.о., кодирующий SD последовательность (Шайн-Дельгарно) и XbaI-BamHI фрагмент ДНК размером 501 п.о., кодирующий ген альфа 2b интеферона человека.

Для получения Hind III - ВаmHI фрагмент ДНК векторной плазмиды pSX3 (2529 п.о.) ДНК плазмиды pSX3 обрабатывают ферментами рестрикции HindIII и BamHI с последующей электрофоретической очисткой в 1% агарозном геле. Hind III EcoRI фрагмент ДНК размером 168 п.о., кодирующий промотор триптофанового оперона (P trp) получают методом ПЦР, используя тотальную ДНК Е. coli в качестве матрицы и праймеры TRP1 и PRP2 с последующей обработкой амплифицированного фрагмента рестриктазами Hindlll и EcoRI:

Для получения EcoRI-Xbal синтетический фрагмент ДНК размером 20 п.о., кодирующий SD последовательность (Шайн-Дельгарно), синтезируются следующие комплементарные олигонуклеотиды:

XbaI-ВаmIII фрагмент ДНК размером 501 п.о., кодирующий ген альфа 2b интеферона человека, получают методом ПЦР, используя тотальную ДНК человека в качестве матрицы и праймеры IFN1 и IFN2 с последующей обработкой амплифицированного фрагмента рестриктазами Xbal и ВаmIII:

Далее электрофоретически очищенные фрагменты объединяют, лигируют ферментом лигаза фага Т4, ДНК трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК, проводят рестрикционный анализ и определяют первичную структуру ДНК. В результате получают плазмиду pSX41 размером 3218 п.о. Далее проводят поэтапный мутагенез гена интерферона для увеличения уровня экспрессии целевого продукта. Мутагенез гена интерферона заключается в замене редко встречающихся в Е. coli триплетов, кодирующих соответствующие аминокислоты на часто встречающиеся в Е. coli триплеты, кодирующие эти же аминокислоты. Мутагенез ДНК гена интерферона проводят методом ПЦР.

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX43

Для получения рекомбинантной плазмиды pSX43 проводят один раунд амплификации ДНК методом ПЦР, используя ДНК плазмиды pSX41 в качестве матрицы и праймеры IFN3 и IFN4:

ПЦР проводят в следующих условиях: прогревание при 95°С 5 мин, 20 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 10 мин 72°С) и инкубация 20 мин при 72°С. ДНК, полученную после ПЦР, прямо трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК, проводят рестрикционный анализ и определяют первичную структуру ДНК. В результате получают плазмиду рSХ43 размером 3218 п.о.

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX45

Для получения рекомбинантной плазмиды pSX45 проводят один раунд амплификации ДНК методом ПЦР, используя ДНК плазмиды pSX43 в качестве матрицы и праймеры IFN5 и IFN6:

ПЦР проводят в следующих условиях: прогревание при 95°С 5 мин, 20 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 10 мин 72°С) и инкубация 20 мин при 72°С. ДНК, полученную после ПЦР, прямо трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК, проводят рестрикционный анализ и определяют первичную структуру ДНК. В результате получают плазмиду pSX45 размером 3218 п.о.

Конструирование рекомбинантной плазмиды pSX50.

Для получения рекомбинантной плазмиды pSX50 проводят один раунд амплификации ДНК методом ПЦР, используя ДНК плазмиды pSX45 в качестве матрицы и праймеры IFN7 и IFN8:

ПЦР проводят в следующих условиях: прогревание при 95°С 5 мин, 20 циклов ПЦР (30 сек 95°С, 30 сек 56°С, 10 мин 72°С) и инкубация 20 мин при 72°С. ДНК, полученную после ПЦР, прямо трансформируют в клетки штамма E.coli DH5 и высевают на среду LA, содержащую 20 мкг/мл канамицина. После инкубирования в течение 12 час при 37°С клоны отсевают, выделяют плазмидную ДНК, проводят рестрикционный анализ и определяют первичную структуру ДНК. В результате получают плазмиду pSX50 размером 3218 п.о.

Пример 2. Получение штамма Е. coli SX50 - продуцента интерферона

Штамм продуцент интерферона Е. coli SX50 получают путем трансформации клеток штамма Е. coli BL21 рекомбинантной плазмидой рSХ50. Штамм продуцент интерферона выращивают в 30 л ферментере до оптической плотности 25.0-30.0 о.е. в среде М9, содержащей 1% кислотного гидролизата казеина (Difco), 1% глюкозы, 40 мкг/мл канамицина, при температуре 38-39°С. В процессе ферментации проводят непрерывное добавление питательного субстрата, используя гравитометрический контроллер.

Пример 3. Способ выделения интерферона из штамма Е. coli SX50

Получение интерферона проводили в 4 этапа:

1 этап. Культивирование штамма Е. coli SX50.

2 этап. Выделение и очистка нерастворимой формы интерферона.

3 этап. Растворение и ренатурация интерферона.

4 этап. Хроматографическая очистка интерферона.

1 этап. Культивирование штамма Е. coli SX50

Выращенный посевной материал штамма Е. coli SX50 в объеме 3 л богатой среде LB в течение 12 ч при 26°С асептически вносят в ферментер, содержащий 27 л стерильной среды, содержащей М9, 1% кислотного гидролизата казеина, 1% глюкозы, 1 мМ MgCl 2 , 0.1 mM CaCl 2 , 40 мг/мл канамицина. Культивирование в ферментере проводят при температуре 38-39°С, поддерживая рН 7±0,15 путем автоматической подтитровки 40%-ным раствором гидроокиси натрия. Концентрацию растворенного кислорода в диапазоне (50±10)% от насыщения поддерживают путем изменения скорости оборотов мешалки от 100 до 800 об/мин и подачи воздуха от 1 до 15 л/мин. Концентрацию субстратов, в частности глюкозы и дрожжевого экстракта, измеряют в течение ферментации и поддерживают их концентрацию путем изменения скорости подачи концентрированных растворов, через перистальтические насосы, используя гравиметрический контроллер.

Накопление интерферона в виде нерастворимой формы контролируют с помощью фазово-контрастной микроскопии, методом электрофореза в 15% полиакриламидном геле (SDS-PAAG) и методом обратнофазной высокоэффективной хроматографии (RF HPLC). Ферментацию останавливают по достижении максимальной оптической плотности (~ 25-30 о.е.) и остановки синтеза интерферона. По окончании ферментации культуральную жидкость сепарируют центрифугированием в проточном роторе при скорости вращения 5000-10000 об/мин. Биомассу фасуют в полиэтиленовые пакеты и замораживают при температуре минус 70°С.

2 этап. Выделение и очистка нерастворимой формы интерферона

300-400 г замороженной биомассы штамма Е. coli SX50 суспедируют в 3000 мл буфера 1 (20 мМ Tris-HCl, pH 8.0, 10 мМ ЭДТА, 0,1% Triton X100). Суспензию пропускают через проточный гомогенизатор типа Гаулин, поддерживают давление 900 бар и центрифугируют в проточном роторе при 15 000 об/мин. Полученный осадок промывают в аналогичных условиях последовательно буферами 2 (20 мМ Tris-HCl, pH 8.0, 1 мМ ЭДТА, 3 М мочевины) и буфером 3 (20 мМ Tris-HCl pH 8.0, 1 мМ ЭДТА) и окончательно осадок интерферона суспедируют в 200 мл буфера 3. При этом время выделения и очистки нерастворимой формы интерферона составляет не более 5 час.

3 этап. Растворение и ренатурация интерферона

К полученной на предыдущем этапе суспензии нерастворимой формы интерферона добавляют сухой гуанидин гидрохлорид до концентрации 6 М, добавляют дитиотреитол до концентрации 50 мМ, Tris-HCl pH 8.0 до концентрации 50 мМ, NaCl до концентрации 150 мМ и Triton X100 до концентрации 0.1%, инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч. Нерастворившийся материал отделяют при стерилизующей фильтрации через мембраны с диаметрами пор 0.22 микрона.

Ренатурацию интерферона проводят путем медленного разбавления полученного раствора в 100-200 раз буфером 4 (20 мМ Tris-HCl pH 8.0, 100 мМ NaCl, 0.1 мМ ЕДТА). После чего ренатурационную смесь инкубируют при постоянном перемешивании в течение 12-15 час при температуре 4-8°С. Далее добавляют сульфат магния до концентрации 1 мМ и агрегированный материал удаляют стерилизующей фильтрацией через мембранный фильтр с диаметром пор 0.22 микрона.

4 этап. Хроматографическая очистка интерферона

Хроматографическую очистку интерферона осуществляют в три стадии.

1. Полученный ренатурированный интерферон на первом этапе подвергают очистке с помощью аффинной хроматографии на смоле типа Chelating Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences), иммобилизованной ионами Cu +2 . Для этого раствор интерферона наносят на колонну с Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow и интерферон элюируют буфером 0.1 М лимонной кислоты pH 2.2.

2. На второй стадии хроматографической очистки раствор интерферона наносят на катионообменную смолу типа CM Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) и интерферон элюируют градиентом растворов (0.0-0.5 М NaCl) в буфере 50 мМ Nа(СН 3 СОО), рН 5.5.

3. Очистка мономерной формы интерферона от остатков полимерных форм интерферона проводят на третьей стадии очистки интерферона гель-фильтрацией на смоле типа Superdex 75 (Amersham Biosciences). Хроматографию проводят в буфере 50 мМ Na(CH 3 COO), рН 5.0, содержащем 0.15М NaCl.

Описанный способ выделения и очистки интерферона позволяет получить 4-8 г высокоочищенного интерферона за один цикл выделения в течение 7-10 дней из биомассы, полученной с 10 л культуральной среды. Качество получаемого интерферона в полной мере соответствует требованиям "European Pharmacopoeia" для субстанции интерферона альфа-2b, а именно:

Концентрация интерферона не менее 2×10 8 МЕ/мл;

Удельная активность интерферона не менее 2.0×10 8 МЕ/мг;

Электофоретическая чистота препарата не менее 99% в редуцирующих и не редуцирующих условиях при окрашивании гелей серебром;

Изоэлектрическая точка выделенного интерферона находится в районе рН 5.8-6.3;

Пептидная карта выделенного интерферона принципиально не отличается от пептидной карты для Европейского стандарта интерферона альфа 2b CRS;

Как следует из приведенных примеров, заявляемая группа изобретений позволяет получать интерферон альфа-2b с высоким выходом при относительно простой и надежной технологии.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pSX50, кодирующая синтез рекомбинантного человеческого альфа-2b интерферона, характеризующаяся тем, что она имеет размер 3218 пар оснований (п.о.) и состоит из следующих фрагментов: последовательность с 1 по 176 нуклеотида (н.) включает фрагмент ДНК размером 176 п.о., содержащий триптофановый промотор (Р trp), последовательность с 177 по 194 н. включает синтетический фрагмент ДНК размером 18 п.о., содержащий последовательность Шайн Дельгарно, ответственный за инициацию трансляции, последовательность с 195 по 695 н. включает фрагмент ДНК размером 501 п.о., содержащий ген интерферона альфа-2b с нуклеотидными заменами: 37 (А>С), 39 (G>T), 40 (А>С), 42 (G>T), 67 (А>С), 69 (G>T), 70 (А>С), 72 (А>Т), 96 (G>A), 100 (А>С), 102 (А>Т), 114 (А>С), 120 (C>G),126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A>C), 489 (А>Т), 495 (G>A), последовательность с 696 по 713 н. включает синтетический фрагмент ДНК размером 18 п.о., содержащий синтетический полилинкер, последовательность с 714 по 1138 н. включает фрагмент ДНК плазмиды рКК223-3 с 4129 по 4553 н. размером 425 п.о., содержащий последовательность строгого терминатора транскрипции rrnBT 1 T 2 , последовательность с 1139 по 1229 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC19 с 2487 по 2577 н. размером 91 п.о., содержащий промотор гена -лактомазы (ген устойчивости к ампициллину -Amp R), последовательность с 1230 по 2045 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC4K с 720 н. по 1535 н. размером 816 п.о., содержащий структурную область гена kan, последовательность с 2046 н. по 3218 н. включает фрагмент ДНК плазмиды pUC19 с 1625 по 453 н. размером 1173 п.н., содержащий последовательность, ответственную за репликацию плазмиды (ori) и lac промотора (P lac).

2. Штамм бактерий Eschcerichia coli SX50 трансформированный рекомбинантной плазмидой по п.1 - продуцент рекомбинантного лейкоцитарного интерферона альфа-2b человека.

3. Способ получения интерферона альфа-2b человека, включающий культивирование штамма Escherichia coli SX5 по п.2 в питательной среде с постоянным добавлением питательных субстратов в процессе биосинтеза, механическое разрушение клеток микроорганизма при давлении 700-900 bar, растворение интерферона в буферном растворе гуанидин гидрохлорида, ренатурацию интерферона в физиологических буферных растворах в присутствии хаотропных агентов, трехстадийную хроматографическую очистку интерферона на смолах типа Chelating Sepharose Fast Flow, иммобилизованных ионами Сu +2 , ионообменную хроматографию на ионообменных смолах типа CM Sepharose Fast Flow и гель-фильтрационную хроматографию на смолах типа Superdex 75.

4. Способ по п.3, в котором культивирование проводят на питательной среде с пониженным содержанием триптофана при непрерывном добавлении питательных субстратов, предпочтительно глюкозы и дрожжевого экстракта.

5. Способ по п.3, в котором перед растворением интерферона его очищают удалением растворимых клеточных компонентов, включающих ДНК, РНК, белки, липополисахариды, промыванием буферными растворами, содержащими детергенты типа Тритон XI 00, мочевин.

6. Способ по п.3, в котором после каждой хроматографической очистки проводят стерилизующую фильтрацию через фильтры с размерами пор 0.22 мкм.

МНН: Интерферон альфа 2b

Производитель: Сикор Биотех ЗАО

Анатомо-терапевтическо-химическая классификация: Interferon alfa-2b

Номер регистрации в РК: № РК-БП-5№012842

Период регистрации: 18.06.2014 - 18.06.2019

КНФ (ЛС включено в Казахстанский национальный формуляр лекарственных средств)

АЛО (Включено в Список бесплатного амбулаторного лекарственного обеспечения)

ЕД (Включено в Список ЛС в рамках ГОБМП, подлежащих закупу у Единого дистрибьютора)

Предельная цена закупа в РК: 33 116.64 KZT

Инструкция

Торговое название

Реальдирон

Международное непатентованное название

Интерферон альфа

Лекарственная форма

Лиофилизированный порошок для приготовления раствора для иньекций, 1000 000 МЕ, 3000 000 МЕ, 6000 000МЕ, 9000 000МЕ и 18000 000 МЕ

Состав

Один флакон содержит

активное вещество : интерферона альфа-2b человеческого рекомби-

нантного 1 млн МЕ, 3 млн МЕ, 6 млн МЕ, 18 млн МЕ

вспомогательные вещества : декстран 60, натрия хлорид, динатрия гидрофосфата додекагидрат, натрия дигидрофосфата дигидрат

Описание

Порошок или пористая масса белого цвета

Ф армакотерапевтическая группа

Иммуномодуляторы. Интерфероны. Интерферон альфа

Код АТХ L03АВ05

Фармакологические свойства

Фармакокинетика

Время наступления максимальной концентрации интерферона-альфа 2b после внутримышечного введения - 2 ч и сохраняется до 12 часов, после подкожного введения - 7,3 ч, через 20 ч препарат не определяется.

T1/2 (время полувыведения) при внутримышечном введении составляет около 2-3 часов. Биодоступность - 80%.

Препарат равномерно распределяется по органам и тканям. Биотрансформируется в почках и в незначительной степени в печени. Частично выводится в неизмененном виде, главным образом через почки.

Фармакодинамика

Интерферон альфа-2b — высокоочищенный белок, полученный посредством рекомбинантной ДНК. Полипептидная структура молекулы, биологическая активность и фармакологические свойства идентичны человеческому лейкоцитарному интерферону альфа-2b. Обладает противовирусным, антипролиферативным, противоопухолевым и иммуномодулирующим действием.

Препарат, взаимодействуя с родственными рецепторами на поверхности клетки, инициирует сложную цепь изменений внутри клетки. Предполагают, что эти процессы связаны с предотвращением репликации вирусов в клетке, торможением пролиферации клеток и иммуномодулирующим действием интерферона. Интерферона альфа-2b обладает способностью стимулировать фагоцитарную активность макрофагов, а также цитотоксическую активность T-клеток и NK (Natural Killers). Этими свойствами интерферона и обусловлено лечебное действие препарата.

Показания к применению

В составе комбинированной терапии у взрослых. Вирусные заболевания

— хронический активный гепатит B при невозможности использования

пегилированных интерферонов

— хронический гепатит С при невозможности использования

пегилированных интерферонов

Онкологические заболевания — волосатоклеточный лейкоз — хронический миелолейкоз — рак почки — злокачественная меланома.

Способ применения и дозы

Раствор Реальдирона вводят внутримышечно или подкожно. Перед применением содержимое флакона растворяют в 1 мл воды для инъекций. Раствор препарата должен быть прозрачным, без посторонних включений. При хроническом активном гепатите B Реальдирон вводят по 3 млн.МЕ три раза в неделю в течение 6-и месяцев. Если после терапии в течение 3-х месяцев не наблюдается клинического, биохимического улучшения и/или исчезновения HBsAg, препарат отменяют.

При хроническом гепатите С Реальдирон назначают по 3 млн.МЕ 3 раза в неделю в течение 6-и месяцев. Если после введения препарата в течение месяца терапии не наблюдается снижения на 50% активности АЛТ в плазме крови, дозу препарата увеличивают до 6 млн.МЕ 3 раза в неделю. Если после 3-х месяцев терапии не отмечается клинического, биохимического улучшения, препарат следует отменить.

При волосатоклеточном лейкозе вводят ежедневно по 3 млн.МЕ в течение 2-х месяцев; при достижении гематологической ремиссии — по 3 млн. МЕ 3 раза в неделю.

При хроническом миелолейкозе начальная доза препарата 3 млн. МЕ в день вводится внутримышечно или подкожно. При хорошей переносимости дозу препарата увеличивают каждую неделю до максимальной дозы 9 млн. МЕ в день. После стабилизации количества лейкоцитов эту дозу можно вводить три раза в неделю. Курс лечения проводят неограниченно долго за исключением тех случаев, когда терапию следует прекратить (например, при быстром прогрессировании заболевания или непереносимости препарата).

При раке почки Реальдирон применяют по 3 млн МЕ ежедневно в течение 10 дней. При хорошей переносимости дозу препарата увеличивают каждую неделю до максимальной дозы 18 млн. МЕ в день. После 3 месяцев лечения начинают поддерживающую терапию, вводя 18 млн. МЕ три раза в неделю в течение 6 месяцев.

При злокачественной меланоме начальная доза препарата 3 млн. МЕ в день вводится внутримышечно или подкожно. При хорошей переносимости дозу препарата увеличивают каждую неделю до максимальной дозы 9-18 млн.МЕ ежедневно. После достижения клинического эффекта переходят на поддерживающую терапию по 9-18 млн.МЕ 3 раза в неделю. Адъювантная терапия Реальдироном после хирургического удаления злокачественной меланомы I-II стадии может удлинить время до рецидива.

Побочные действия

часто

Лихорадка, усталость, недомогание, головная боль, миалгии, озноб, дрожь, гриппоподобный симптом

Анорексия, тошнота

менее часто

Изменение вкуса, стоматит, сухость во рту, повреждение поверхности зубов и слизистой оболочки рта, рвота, диарея, запор, неоформленный стул, боль в животе

Алопеция, зуд, сухость кожи, сыпь

Боль в спине, мышечно-скелетные боли, боль в грудной клетке, миозит, артралгии

Депрессия, суицидальные мысли и действия, суицид

Повышенная потливость, особенно в ночное время

Раздражительность, бессонница, сонливость, беспокойство, снижение концентрации внимания, эмоциональная лабильность, головокружение

Артериальная гипотензия, гипертензия

редко

Воспаление, покраснение, раздражение в месте инъекции

Возбуждение, нервозность, психозы, включая галлюцинации, агрессивное поведение, ажитации, нарушение сознания, нейропатии, полинейропатии, периферические нейропатии, парестезии, гипостезии, судороги, потеря сознания

Вирусная инфекция, в том числе простой герпес

Эритема

Конъюнктивит, боль в глазах, затуманенность зрения, геморрагии сетчатки, ретинопатии, очаговые изменения сетчатки, обструкция артерии или вены сетчатки, снижение остроты зрения или ограничение полей зрения, неврит зрительного нерва, отек дисков зрительных нервов

Дисфункции слезных желез

Носовые кровотечения, заложенность носа, синусит, ринит

Мигрень

Кашель, фарингит, легочные инфильтраты, пневмония, диспноэ, респираторные нарушения

Снижение массы тела

Тахикардия, сердцебиение

Снижение либидо, нарушение менструального цикла (аменорея, меноррагия)

Повышение аппетита, глоссит, кровоточивость десен

Рабдомиолиз (иногда тяжелый)

Нарушение или потеря слуха

Отек лица, нарушение функции почек, нефротический синдром, почечная

недостаточность, гиперурикемия

Гипер- и гипотиреоз, гепатотоксичность (в том числе с летальным исходом)

Лейкопения

Дентальные и периодонтальные нарушения (в том числе приводящие к потере зубов)

очень редко

Повышение аппетита, сахарный диабет, гипергликемия, гипертриглицериде-мия, колит, гепатомегалия, панкреатит

Цереброваскулярная ишемия, цереброваскулярные геморрагии

Саркоидоз или обострение саркоидоза

Аллергические реакции, мультиформная эритема, синдром Стивенса-Джонсона, токсический эпидермальный некролиз

Тромбоцитопения, лимфоцитопения, апластическая анемия

Лимфаденопатия

Сонливость

Некроз в месте инъекции

Аутоиммунные и иммуноопосредованные расстройства, в т.ч. идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, ревматоидный артрит, системная красная волчанка, васкулит и синдром Фогта-Каянаги-Харада

Шум в ушах

Инфаркт миокарда, аритмия (обычно у пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы в анамнезе или с предшествующей терапией кардиотоксическими препаратами), обратимая преходящая кардиомиопатия (отмечена у пациентов без отягощенного анамнеза со стороны сердечно-сосудистой системы)

Пневмония

очень редко (при монотерапии или в комбинации с рибавирином)

Полная аплазия красного костного мозга

Изменения лабораторных показателей (чаще отмечались при назначении

препарата в дозах более 10 млн. МЕ в сутки): снижение числа гранулоцитов,

снижение уровня гемоглобина, повышение активности АЛТ, АСТ (отмечается при применении по всем показаниям, кроме хронических вирусных гепатитов), ЩФ, ЛДГ, уровня креатинина и азота мочевины сыворотки крови

У детей, включая комбинированную терапию с рибавирином (≥ 1 % от количества пациентов, получавших комбинированную терапию с рибавирином)

очень часто

Анемия, нейтропения

Гипотиреоз

Депрессия, эмоциональная лабильность, инсомния, раздражительность, головная боль, головокружение

Анорексия, тошнота, рвота, боль в животе, диарея

Алопеция, сыпь

Артралгии, миалгии

Воспалительные реакции в месте инъекции: боль, гиперемия

Слабость, лихорадка, озноб, гриппоподобные симптомы, недомогание, вирусная инфекция, фарингит

Задержка физического развития (задержка в росте и/или массе тела по сравнению с возрастными показателями)

часто

Бледность

Носовое кровотечение

Бактериальная инфекция, пневмония, грибковая инфекция, простой герпес

Новообразования неклассифицированные

Тромбоцитопения, лимфаденопатия

Гипертиреоз, вирилизм

Гипертриглицеридемия, гиперурикемия

Ажитация, тремор, сонливость, агрессивная реакция, тревожность, апатия, нервозность, нарушение поведения, сомнамбулизм, суицидальные мысли, спутанность сознания, анормальные сновидения, нарушение засыпания, гиперкинезии, дисфония, парестезии, гиперестезии, гипостезии, снижение концентрации внимания

Конъюнктивит, боль в глазах, нарушение зрения, дисфункция слезных желез

Болезнь Рейно

Кашель, диспноэ, средний отит, заложенность носа, раздражение слизистой оболочки носа, ринорея, чихание, тахипноэ

Желудочно-кишечные расстройства, повышение аппетита, запор, неоформ-ленный стул, ректальные расстройства, диспепсия, гастроэзофагеальный рефлюкс, гастроэнтерит, глоссит, стоматит в т.ч. язвенный, зубная боль, нарушение функций печени

Боль в грудной клетке, в правом верхнем квадранте живота

Акне, экзема, изменения со стороны ногтей, сухость кожи, трещины кожи, реакции фоточувствительности, макулопапулезная сыпь, изменение пигментации кожи, эритема, потливость, гематома, зуд

Инфекции мочевого тракта, расстройства со стороны мочеиспускания, энурез

Нарушение менструального цикла, аменорея, меноррагия, вагинальные нарушения, вагинит, боль в области яичек (у мальчиков)

Противопоказания

Гиперчувствительность к активному или любому из вспомогательных веществ

Тяжелые кардиологические заболевания, в том числе в анамнезе (неконтролируемые нарушения в работе сердца, недавний инфаркт миокарда, тяжелые нарушения сердечного ритма)

Тяжелые заболевания почек или печени,включая метастазы опухолей в них, почеченая недостаточность с клиренсом креатинина ниже 50 мл/мин, при назначении в комбинации с рибавирином

Декомпенсированный цирроз печени

Хронический гепатит в сочетании с тяжелыми формами цирроза или печеночной недостаточностью

Хронический гепатит, леченный в прошлом иммуносупрессантами или глюкокортикостероидами

Аутоиммунные заболевания, в т.ч. аутоиммунный гепатит в настоящее время или в анамнезе

Заболевания щитовидной железы, не контролируемые с помощью стандартных методов лечения

Существующие психические нарушения или нарушения в анамнезе у детей и подростков

Детский возраст до 3 лет при хроническом гепатите С

Беременность и период лактации при назначении в комбинации с рибавирином

При назначении в комбинации с рибавирином следует также учитывать противопоказания, указанные в инструкции по применению рибавирина.

Лекарственные взаимодействия

Интерферон альфа ингибирует микросомальные ферменты печени (цитохром Р-450), поэтому может нарушать метаболизм многих препаратов (теофиллина и др.), повышая их концентрацию в крови.

В связи с риском возникновения нежелательных реакций со стороны ЦНС следует с особой осторожностью применять одновременно с интерфероном альфа наркотические, снотворные и седативные препараты.

Лекарственное взаимодействие между Реальдироном и другими лекарственными средствами полностью не изучено. Следует с осторожностью применять Реальдирон в комбинации с препаратами, которые потенциально оказывают миелосупрессивный эффект.

При одновременном применении Реальдирона и зидовудина может наблюдаться синергическое влияние на снижение количества лейкоцитов. У пациентов, получавших такую терапию, наблюдались более частые дозозависимые случаи нейтропении, чем ожидалось при монотерапии зидовудином. У пациентов, которые получают Реальдирон в составе комбинированной терапии с рибавирином или зидовудином, повышается риск развития анемии.

Неизвестны эффекты от применения Реальдирона в комбинации с антиретровирусными препаратами.

Интерфероны могут влиять на окислительные метаболические процессы. Это следует учитывать при одновременном применении с препаратами, метаболизирующимися путем окисления (в т.ч. с производными ксантина - аминофиллином и теофиллином). При одновременном применении Реальдирона с теофиллином необходимо контролировать концентрацию последнего в сыворотке крови и при необходимости корректировать режим дозирования.

Фармацевтическое взаимодействие

Реальдирон нельзя смешивать с другими лекарственными веществами кроме 0.9 % раствора натрия хлорида.

Особые указания

Гепатит В

Перед началом лечения больных гепатитом В рекомендовано провести биопсию печени для подтверждения хронического гепатита и выяснения степени поражения, а также убедиться в отсутствии в настоящее время и в анамнезе энцефалопатии, кровотечения из варикозно расширенных вен пищевода, асцита или других клинических признаков декомпенсации.

Перед началом терапии Реальдироном необходимо ориентироваться на следующие показатели:

билирубин норма

протромбиновое время взрослые - удлинение не более чем на 3 секунды

дети - удлинение не более чем на 2 секунды

лейкоциты ≥ 4 000/мм3

тромбоциты взрослые ≥ 100 000/мм3

дети ≥ 150 000/мм3

Гепатит С

Оптимальный путь лечения - комбинированная терапия с рибавирином. Монотерапию Реальдироном проводят, главным образом, в случае непереносимости или при наличии противопоказаний к применению рибавирина.

При применении Реальдирона в составе комбинированной терапии с рибавирином хронического гепатита С ознакомьтесь также с инструкцией для медицинского применения рибавирина.

Всем пациентам с хроническим гепатитом С рекомендуется проводить биопсию печени, но в определенных случаях (например, пациенты с вирусным генотипом 2 и 3) лечение возможно и без гистологического подтверждения.

Взрослые. Перед началом терапии Реальдироном необходимо убедиться в отсутствии в настоящее время и в анамнезе энцефалопатии, кровотечения из варикозно расширенных вен пищевода, асцита или других клинических признаков декомпенсации, при этом ориентироваться на следующие показатели:

билирубин ≤ 2 мг/дл

альбумин стабильный и в пределах нормы

протромбиновое время удлинение не больше чем на 3 секунды у взрослых, на 2 секунды у детей

лейкоциты ≥ 3 000/мм3

тромбоциты ≥ 70 000/мм3

сывороточный креатинин в норме или близко к норме

При применении Реальдирона в комбинации с рибавирином у пациентов с нарушением почечной функции (клиренс креатинина > 50 мл/мин) следует проводить мониторинг общего анализа крови, уровень креатинина в крови и моче, учитывая возможность развития анемии. У пациентов старше 50 лет данный мониторинг следует проводить 1 раз в неделю.

Монотерапия.

Во время лечения Реальдирон возможно нарушение функции щитовидной железы - гипотиреоз или гипертиреоз. Перед началом применения Реальдирона следует определить уровень тиреотропного гормона (ТТГ) в сыворотке крови и провести УЗИ щитовидной железы. При выявлении каких-либо отклонений следует провести соответствующую терапию.

Применение при совместном инфицировании ВИЧ и вирусом гепатита С

У пациентов, которые дополнительно инфицированы ВИЧ и получают высокоактивную антиретровирусную терапию (ВААРТ), может возрастать риск возникновения лактоацидоза. С осторожностью следует добавлять лечение Реальдироном и рибавирином к ВААРТ.

У пациентов с циррозом, дополнительно инфицированных ВИЧ и вирусом гепатита С, получающих ВААРТ, может возрастать риск возникновения печеночной декомпенсации и смерти.

Дополнительное применение альфа-интерферонов отдельно или в комбинации с рибавирином повышает вышеупомянутый риск у данной категории больных.

Дентальные и периодонтальные нарушения

Лабораторные исследования

Перед началом лечения Реальдироном и периодически в процессе терапии у всех пациентов проводят контроль картины периферической крови (с определением лейкоцитарной формулы и количества тромбоцитов), биохимических показателей крови (определение уровня электролитов, печеночных ферментов, в т.ч. АЛТ, билирубина, общего белка и фракций, в т.ч. альбумина, и креатинина). Перед и на протяжении лечения Реальдироном уровень показателей крови должен быть в пределах нормальных значений.

Во время терапии пациентов с хроническим гепатитом рекомендуется такая схема проведения контроля лабораторных показателей: 1, 2, 4, 8, 12, 16-я недели и потом 1 раз в месяц, в течение всего курса лечения. Если АЛТ повышается до величины, которая вдвое или больше превышает то значение, которое было до начала терапии, лечение Реальдироном можно продолжить за исключением случаев появления признаков печеночной недостаточности. В этом случае определение АЛТ, протромбинового времени, щелочной фосфатазы, альбумина и билирубина необходимо проводить каждые 2 недели.

У пациентов со злокачественной меланомой функцию печени и количество лейкоцитов (с формулой) следует контролировать каждую неделю во время индукции ремиссии и ежемесячно при проведении поддерживающей терапии.

Гиперчувствительность немедленного типа

Появление транзиторной кожной сыпи не требует прекращения лечения.

Сопутствующие заболевания

Реальдирон с осторожностью назначают пациентам с тяжелыми хроническими заболеваниями в анамнезе: хроническое обструктивное заболевание легких, сахарный диабет со склонностью к кетоацидозу. Особая осторожность нужна при применении препарата у пациентов с нарушением свертываемости крови

(тромбофлебит, легочная эмболия) или при выраженной миелосупрессии.

Одновременное проведение химиотерапии

Применение Реальдирона в комбинации с другими химиотерапевтическими препаратами (например, цитарабин, циклофосфамид, доксорубицин, тенипозид) повышает риск развития токсических эффектов (их тяжести и продолжительности), которые вследствие совместного применения могут угрожать жизни или стать причиной смерти. Вследствие риска повышения токсичности необходимо тщательно подбирать дозы Реальдирона и сопутствующих химиотерапевтических средств.

Аутоантитела и аутоиммунные заболевания

Лечение Реальдироном может привести к появлению аутоантител и развитию аутоиммунных заболеваний. Пациенты с наследственной предрасположенностью или подозрением на развитие симптомов аутоиммунных заболеваний должны постоянно наблюдаться с целью их ранней диагностики. В случае подозрения на синдром Фогт-Коянаги-Харада у пациентов с хроническим гепатитом С должна быть отменена антивирусная терапия и обсуждена необходимость кортикостероидной терапии.

Лихорадка

Лихорадка может быть проявлением гриппоподобного синдрома, который часто встречается при терапии интерферонами, однако следует исключить другие причины ее возникновения.

Для снижения температуры тела и уменьшения головной боли при гриппоподобном синдроме, который может возникать на фоне терапии Реальдироном, рекомендовано применение жаропонижающей терапии.

Применение при нарушении функции печени

Редко наблюдались летальные случаи вследствие токсического гепатита. В случае появления на фоне применения Реальдирона признаков нарушения функции печени больной нуждается в тщательном наблюдении и при прогрессировании симптомов - отмене препарата.

Пациенты с хроническим гепатитом В в случае снижения синтетической функции печени (например, снижение альбумина или удлинение протромбинового времени), но которые отвечают критериям отбора для начала лечения, могут иметь повышенный риск развития клинической декомпенсации в случае подъема уровней аминотрансфераз в ходе лечения. Перед лечением таких больных, следует определить преимущества применения Реальдирона перед возможным риском.

Отторжение аллотрансплантатов

Предварительные данные свидетельствуют о том, что терапия интерфероном альфа может повысить риск отторжения почечного трансплантата. Также сообщалось об отторжении печеночного трансплантата, хотя причинная связь с терапией альфа интерфероном не была установлена.

Гидратация

При лечении Реальдироном необходимо обеспечить адекватную гидратацию организма, так как в некоторых случаях наблюдалась артериальная гипотензия, вызванная обезвоживанием (что может требовать дополнительного введения жидкости).

Сердечно-сосудистая система

Пациентам с сердечно-сосудистыми заболеваниями в анамнезе (хроническая сердечная недостаточность, инфаркт миокарда и/или аритмии) необходимо тщательное медицинское наблюдение при назначении Реальдирона. Сообщалось о единичных случаях развития кардиомиопатии, иногда с обратимым развитием после прекращения лечения Реальдироном. Пациентам с заболеваниями сердца в анамнезе рекомендуется проведение

ЭКГ до и во время терапии Реальдироном. Аритмии, в основном суправентрикулярные, возникали редко и преимущественно у пациентов с заболеваниями сердечно-сосудистой системы в анамнезе или при предварительном лечении кардиотоксическими препаратами. Такие нарушения ритма, как правило, поддаются стандартной терапии, но могут нуждаться в модификации дозы или прекращении применения Реальдирона.

Дыхательная система

Любому пациенту с лихорадкой, кашлем, одышкой или другими симптомами со стороны дыхательной системы необходимо провести рентгенологическое исследование грудной клетки. При обнаружении инфильтратов или наличии нарушения функции легких необходимо тщательное наблюдение за пациентом, а при необходимости - отмена терапии Реальдироном. Такие изменения чаще возникали у пациентов с хроническим гепатитом С, которые получали терапию альфа интерфероном, однако были сообщения о случаях их развития у пациентов с онкологическими заболеваниями, которые также получали терапию альфа интерфероном. Своевременная отмена терапии интерфероном альфа и применение кортикостероидов приводит к исчезновению побочных легочных реакций. Кроме того, сообщалось о более частом возникновении данных симптомов на фоне применения Шосайкото (китайского травяного лекарственного средства) одновременно с альфа интерфероном.

Психические нарушения и центральная нервная система (ЦНС). Серьезные нарушения со стороны ЦНС, в частности депрессии, суицидальные мысли и попытки к суициду наблюдались у некоторых пациентов во время лечения препаратом Реальдирон и даже после окончания лечения, главным образом, в течение 6 месяцев. Среди детей и подростков, принимавших Реальдирон в комбинации с рибавирином, суицидальные мысли и попытки к суициду наблюдались чаще по сравнению со взрослыми пациентами (2.4 % против 1 %). У взрослых пациентов, детей и подростков наблюдались также и другие психические нарушения, например, депрессия, эмоциональная лабильность, сонливость. При появлении таких симптомов следует учитывать потенциальную серьезность подобных нежелательных явлений. При сохранении или нарастании симптомов, или при выявлении суицидальных мыслей, или агрессивного поведения рекомендуется прекратить лечение и оказать пациенту соответствующую психиатрическую помощь.

Пациенты с существующими психическими нарушениями или нарушениями в анамнезе. Использование интерферона альфа-2b у детей и подростков с существующими психическими нарушениями или нарушениями в анамнезе противопоказано (см. раздел «Противопоказания»).

Если было принято решение о том, что терапия Реальдироном является необходимой для взрослых пациентов с существующими психическими нарушениями или нарушениями в анамнезе, а также с алкогольной и наркотической зависимостью, ее следует начинать только после проведения соответствующей индивидуальной диагностики и под постоянным контролем психического состояния.

Лечение интерфероном может способствовать обострению симптомов психических нарушений у пациентов, инфицированных вирусом гепатита С, с существующими психическими нарушениями или имеющимися в анамнезе, а также с алкогольной и наркотической зависимостью. Если лечение интерфероном является необходимым для пациентов с такими нарушениями, то для достижения успешного лечения интерфероном проводят соответствующее лечение психических симптомов. Кроме того, обязательным является требование индивидуального скрининга поведения пациентов и частоты симптомов психических нарушений. Рекомендуется предварительная терапия для таких пациентов до появления или развития психических симптомов.

Офтальмологические нарушения

Все пациенты до начала терапии должны пройти офтальмологическое обследование. Следует прекратить терапию Реальдироном при появлении новых или ухудшении существующих офтальмологических нарушений.

Изменения щитовидной железы

При наличии нарушения функции щитовидной железы лечение Реальдироном можно начинать или продолжать, если содержание ТТГ удается поддерживать медикаментозной терапией на нормальном уровне. Прекращение применения Реальдирона не приводит к нормализации функции щитовидной железы, нарушенной во время лечения.

Метаболические расстройства

В связи со случаями развития или прогрессирования гипертриглицеридемии до тяжелых форм рекомендуется контролировать уровень липидов крови.

Другие

Учитывая описанные случаи обострения псориаза и саркоидоза на фоне лечения интерфероном альфа, применять Реальдирон у таких больных следует только в том случае, если ожидаемая польза превышает возможный риск.

Применение в педиатрии

Решение о начале комбинированной терапии у детей следует принимать индивидуально, учитывая как признаки прогрессирования болезни (активность воспалительного процесса в печени и фиброз), так и прогностические факторы развития вирусологического ответа, HCV-генотип и вирусную нагрузку. Важно иметь в виду, что комбинированная терапия может вызывать задержку роста, прибавку массы тела у некоторых детей, получавших лечение в течение года, обратимость которых до конца не ясна. В связи с этим рекомендуется наблюдать за физическим развитием детей во время терапии и в течение 6 месяцев после завершения лечения.

Чтобы снизить риск задержки роста, ребенка следует по-возможности лечить после быстрого роста в пубертатный период. Отсутствуют данные о влиянии длительного лечения на половое созревание.

Влияние на репродуктивную функцию

Сообщалось о снижении концентраций эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови женщин, получавших Реальдирон. Поэтому Реальдирон можно применять у женщин репродуктивного возраста в том случае, если на протяжении всего срока лечения они пользуются эффективными средствами контрацепции. С осторожностью применяется Реальдирон и у мужчин репродуктивного возраста.

Беременность и период лактации

Отсутствуют достаточные данные по использованию Реальдирон во время беременности. Реальдирон следует применять в период беременности, если потенциальная польза для матери преобладает над потенциальной угрозой для плода.

Вследствие возможного неблагоприятного воздействия на грудного ребенка решение о прекращении кормления грудью или отмены препарата нужно принимать с учетом степени необходимости данной терапии для матери.

Особенности влияния лекарственного средства на способность управлять транспортным средством или потенциально опасными механизмами.

Необходимо предупредить пациента о возможном развитии слабости, сонливости, нарушений сознания на фоне терапии и рекомендовать избегать управления автомобилем или сложной техникой.

Передозировка

В настоящее время о случаях передозировки препарата не сообщалось.

В случае передозировки показано симптоматическое лечение.