Tipizzazione del DNA dell'HPV (27 tipi). Tipizzazione del DNA dei microrganismi Cos'è il papillomavirus e caratteristiche dell'infezione

Oppure la tipizzazione del DNA è un sistema di identificazione basato sull'identificazione delle differenze genetiche tra individui o organismi. Ogni creatura vivente (ad eccezione dei gemelli identici) è geneticamente unica. Le tecniche di tipizzazione del DNA sono progettate per rilevare le più piccole differenze genetiche nella sequenza di elementi costitutivi alternati che compongono il DNA. Questi blocchi - nucleotidi: adenina, timina, citosina e guanina - sono solitamente designati come A, T, C e G.

A volte la tipizzazione del DNA viene utilizzata per confrontare le sequenze nucleotidiche del DNA di due individui per determinarne la somiglianza. In altri casi, gli scienziati sono interessati a identificare la somiglianza di un campione di DNA con una sequenza nota di un campione di controllo. Attualmente, la tipizzazione del DNA è una delle tecniche biotecnologiche più potenti e ampiamente utilizzate. Viene utilizzato per identificare le più piccole differenze nella composizione dei campioni di DNA, compresa la determinazione della compatibilità del donatore e del ricevente durante il trapianto di organi e tessuti, l'identificazione di microrganismi specifici, il monitoraggio dei geni necessari nel processo di selezione delle piante, la determinazione della paternità, l'identificazione dei resti, regolamentare la riproduzione animale negli zoo.

Metodi di tipizzazione del DNA

Gli scienziati hanno sviluppato due approcci per rilevare anche le più piccole differenze nei geni. Ciascun metodo presenta vantaggi e svantaggi ed entrambi vengono utilizzati nella ricerca scientifica di base e applicata, nei centri clinici, nelle scienze forensi e nei laboratori commerciali. La scelta del metodo dipende dalla questione da affrontare, dalla quantità di DNA disponibile, dalla capacità di ripulire il campione, dai costi ragionevoli e dall'urgenza. A volte gli approcci sono combinati.

Una tecnica, chiamata analisi di restrizione, utilizza enzimi naturali che tagliano il DNA in aree strettamente fisse. A causa delle differenze nelle sequenze nucleotidiche, gli enzimi tagliano il DNA di individui diversi in punti diversi. I segmenti di DNA risultanti hanno dimensioni diverse e formano un ritratto del DNA o un'impronta digitale, unico per ogni individuo. Il confronto di serie di frammenti di DNA fornisce prove conclusive del fatto che i campioni studiati siano identici o meno.

Un altro metodo di tipizzazione del DNA, la reazione a catena della polimerasi (PCR), utilizza il meccanismo mediante il quale le cellule duplicano il loro DNA prima di dividersi in due. La PCR produce migliaia di copie di specifici frammenti di DNA in poche ore. Proprio come l'analisi di restrizione, la PCR consente di confrontare campioni di DNA per determinarne l'origine. Inoltre, può essere utilizzato per rilevare la presenza o l'assenza di frammenti di DNA specifici in un campione. Pertanto, la PCR consente di diagnosticare rapidamente e con un elevato grado di precisione malattie come e, identificare i geni che determinano la predisposizione di un individuo a varie forme di cancro e altre malattie e anche fornire una migliore protezione all’individuo dall’HIV/AIDS.

Per rilevare con successo sottili differenze nella struttura delle molecole di DNA, gli scienziati devono concentrarsi su regioni del DNA che sono altamente variabili. Questo è uno dei motivi per cui spesso viene data la preferenza a . non solo ha un grado maggiore di polimorfismo rispetto a quello nucleare, ma è anche caratterizzato da un metodo di ereditarietà unico: quasi tutto viene ereditato dal corpo dalla madre.

La tipizzazione del DNA in medicina legale

In molti stati, l'introduzione della tipizzazione del DNA nella pratica della medicina legale ha ricevuto una risposta positiva, poiché con il suo aiuto è stato dimostrato il coinvolgimento di un gran numero di prigionieri nei crimini di cui erano accusati. Ha inoltre garantito la riabilitazione di numerosi cittadini ingiustamente accusati.

La diffusa introduzione della tipizzazione del DNA nella pratica giudiziaria ha portato all'emanazione di leggi da parte di alcuni stati che richiedono la tipizzazione obbligatoria del DNA dei criminali accusati di reati sessuali e di altro tipo per il successivo inserimento delle informazioni nei database statali. Gli alti funzionari delle forze dell'ordine sperano di unire i database dell'FBI e dello stato per creare un unico database nazionale che consentirebbe di confrontare il materiale genetico delle scene del crimine con quelli di noti delinquenti in una frazione del tempo.

La tipizzazione del DNA viene utilizzata anche per identificare resti umani, ad esempio per identificare soldati sconosciuti o vittime di disastri. Ora tutto il personale militare americano invia campioni di DNA a una banca dati, che garantisce un'identificazione affidabile anche in caso di smarrimento della targhetta metallica del soldato con il numero di registrazione.

Stabilire la paternità

È possibile stabilire la paternità mediante la tipizzazione del DNA perché il bambino riceve metà del suo materiale genetico dal padre biologico. Se necessario, utilizzando l'analisi di restrizione, vengono confrontate le impronte digitali del DNA della madre, del bambino e del padre presunto. Innanzitutto, dal test vengono rimossi frammenti del DNA del bambino simili a quello della madre. Successivamente i restanti frammenti ereditati dal padre biologico vengono confrontati con i frammenti di DNA del presunto padre.

Antropologia

Usando la tipizzazione del DNA, gli scienziati stanno cercando di comporre interi documenti da migliaia di frammenti dei Rotoli del Mar Morto. Per fare ciò, utilizzando la tipizzazione del DNA, i frammenti scritti su pelle di pecora vengono separati da frammenti scritti su pelle di capra, il che facilita notevolmente la successiva ricostruzione di interi rotoli.

La tipizzazione del DNA permette di determinare il grado di parentela tra ossa umane fossili rinvenute in diverse regioni geografiche e appartenenti a diverse ere geologiche. I risultati ottenuti fanno luce sulla storia dell’evoluzione umana.

Utilizzando la tipizzazione del DNA, gli scienziati hanno identificato i resti dello zar Nicola Romanov II e della sua famiglia, uccisi dai bolscevichi nel 1918. Per fare ciò, i campioni di DNA isolati dalle ossa trovate nel luogo di sepoltura sono stati confrontati con campioni di DNA dei discendenti viventi di Nicola II, incluso il principe Filippo di Gran Bretagna. I risultati ottenuti hanno smentito l'affermazione di un'impostora che rivendicava il nome della granduchessa Anastasia Romanova, che presumibilmente sarebbe miracolosamente scampata alla distruzione.

Risorse della fauna selvatica

Quanto più comprendiamo il sistema di organizzazione del materiale genetico nelle popolazioni naturali, tanto più alto diventa il livello dei progetti che realizziamo volti a preservare e regolare la diversità naturale. La tipizzazione del DNA viene utilizzata dagli scienziati per identificare la quantità di variazione genetica tra popolazioni della stessa specie, studiare la distribuzione geografica delle specie, conservare le specie in via di estinzione e minacciate e determinare il grado di stabilità genetica delle popolazioni selvatiche di specie in via di estinzione. Ad esempio, ora sappiamo che i ghepardi sono a rischio di estinzione, in gran parte a causa del grave depauperamento della diversità genetica.

Recentemente, la tipizzazione del DNA ha aiutato gli scienziati a risolvere il mistero della popolazione di tartarughe marine del Pacifico del Messico. Le tartarughe marine del Pacifico si riproducono in Giappone e Australia, ma individui molto giovani si trovano spesso vicino alla costa messicana. I biologi non potevano immaginare che le giovani tartarughe potessero nuotare le 10.000 miglia che separano il Giappone dal Messico e, soprattutto, una distanza ancora maggiore dall'Australia, quindi l'origine delle tartarughe marine messicane è rimasta un mistero fino a poco tempo fa. Si è scoperto che le giovani tartarughe provenienti dal Giappone e dall'Australia vengono portate sulle coste del Messico dalle correnti oceaniche e, una volta raggiunta la maturità sessuale, intraprendono un viaggio di ritorno verso i luoghi di riproduzione.

La tipizzazione del DNA viene utilizzata anche per individuare il commercio illegale di prodotti che provengono da specie protette. Ad esempio, gli esperti giapponesi hanno accertato la vendita nel paese di carne di balena importata illegalmente e di alcuni frutti di mare di cui è vietata la raccolta. Studi simili su campioni di avorio hanno rivelato prove di bracconaggio in alcuni paesi in cui è vietata la caccia agli elefanti. Infine, negli Stati Uniti, la tipizzazione del DNA viene utilizzata per impedire l’importazione nel paese di caviale di storione in via di estinzione.

Evgenija Ryabtseva
Rivista online “Biotecnologia commerciale” http://www..org
Continua.

TIPO DI DNA (individualizzazione genetica molecolare di organismi, individualizzazione del DNA), un metodo di studio del materiale genetico volto a identificare e valutare le caratteristiche genetiche individuali di un oggetto biologico. Lo scopo di tale studio è stabilire le somiglianze (o differenze) di diversi organismi per determinare il grado della loro relazione.

Il metodo di tipizzazione del DNA si basa sull'esistenza di differenze nella struttura del DNA tra individui diversi. Questo vale per le cosiddette regioni ipervariabili che hanno polimorfismo strutturale (hanno diverse forme alleliche). Nella loro formazione, il ruolo principale è svolto da sequenze nucleotidiche relativamente brevi, chiamate DNA minisatellite e microsatellite, costituite rispettivamente da 15-70 e 2-5 coppie di nucleotidi. Queste sequenze sono sparse in tutto il genoma sotto forma di blocchi (loci) e hanno un'organizzazione in tandem (si susseguono molte volte). Il numero di ripetizioni in tandem (e, quindi, la lunghezza dei loci stessi) varia da 2-4 a diverse migliaia. La presenza di elementi ripetitivi in ​​tali blocchi satellite omologhi determina il polimorfismo strutturale di questi loci, che si manifesta, in particolare, come il fenomeno del polimorfismo della lunghezza dei frammenti di restrizione (RFLP). Tali frammenti si formano dopo la scissione enzimatica del DNA con enzimi di restrizione (la scissione non avviene all'interno delle ripetizioni a causa delle peculiarità della loro composizione nucleotidica). Nelle versioni originali della tipizzazione del DNA, i frammenti di DNA venivano separati mediante elettroforesi in un gel di agarosio e quindi un'impronta di questo gel veniva ottenuta su un filtro a membrana. Quest'ultimo è stato incubato in una soluzione contenente sonde appositamente selezionate: frammenti di DNA marcati con un radioisotopo. Regioni del DNA in studio contenenti componenti complementari alla sonda sono state legate (ibridizzate) ad essa e rilevate mediante autoradiografia. Pertanto, sulla pellicola radiosensibile, sotto forma di un insieme di bande, sono stati immediatamente identificati tutti i micro e minisatelliti del DNA genomico omologhi alla sonda utilizzata. Per analogia con l'analisi di un'impronta digitale (modello di linee papillari), è apparso il termine "impronta genetica o genomica". Ogni individuo ha la propria “impronta digitale” genomica, caratterizzata da un certo numero di bande (fino a diverse dozzine), dalla loro posizione sulla traccia e dall’intensità dell’annerimento di ciascuna banda. Maggiore è la relazione, maggiori sono le coincidenze. L'intero modello rivela una specificità individuale ancora più elevata rispetto ai modelli papillari e può quindi servire come un "ID genetico" di identità. Nei consanguinei il numero di bande corrispondenti è notevolmente maggiore; nei gemelli sono identiche.

Lo sviluppo del metodo della reazione a catena della polimerasi (PCR) (fine anni '80) ha reso possibile riprodurre (amplificare) qualsiasi sequenza di DNA, ottenerne decine e centinaia di milioni di copie e utilizzare quantità incredibilmente piccole di materiale biologico per l'analisi genetica molecolare . È diventato possibile confrontare la lunghezza dei singoli loci interi del DNA minisatellitare senza sottoporli a digestione enzimatica preliminare, cioè analizzare il polimorfismo della lunghezza dei frammenti amplificati (AFLP). Dopo la separazione dei prodotti della PCR mediante elettroforesi, la loro posizione nel gel viene rivelata utilizzando coloranti speciali, etichette fluorescenti, ecc. Sono stati sviluppati anche i cosiddetti sistemi di amplificazione multiplex che consentono l'analisi simultanea dell'AFLP di più loci contemporaneamente (possono essercene più più di dieci). In questo caso, il profilo di amplificazione del DNA creato dalla somma dei loci risulta essere estremamente polimorfico (è una combinazione di più elementi polimorfici indipendenti), ma fornisce un'altissima affidabilità dell'analisi.

La variabilità nella struttura dei geni del DNA polimorfico mini e microsatellite può anche essere causata da sostituzioni puntiformi di nucleotidi. Tali loci differiscono solo nella composizione nucleotidica. In questo caso viene determinata la struttura primaria dei frammenti amplificati (vedi Sequenziamento). Il metodo più sviluppato di tipizzazione del DNA, basato sul sequenziamento dei frammenti, è l'analisi del DNA mitocondriale (mtDNA), che è caratterizzato da un alto livello di polimorfismo, dalla presenza di un gran numero di copie, dall'assenza di ricombinazione ed eredità materna (l'embrione riceve i mitocondri solo dall'uovo). Tutto ciò ha permesso di utilizzare ampiamente il mtDNA negli studi di popolazione e filogenetici, e in alcuni casi lo ha reso l'unico strumento possibile per la tipizzazione del DNA; ad esempio, quando il DNA contenuto nel campione è altamente degradato e il DNA cromosomico non può essere amplificato. L'eredità materna e l'assenza di ricombinazione consentono l'uso del mtDNA come cosiddetto marcatore genetico ancestrale di “tracciamento”. Ciò è particolarmente importante quando si stabilisce la parentela nei casi in cui la distanza genetica che separa i parenti risulta essere più di una generazione. Un esempio lampante dell'uso del mtDNA per la tipizzazione del DNA è stato il lavoro di scienziati russi, britannici e americani per identificare i resti della famiglia imperiale russa nel 1992-98. Successivamente, l'analisi del mtDNA è stata utilizzata molte volte per individuare resti scheletrici e mummificati di decine, centinaia o addirittura decine di migliaia di anni.

Il metodo di tipizzazione del DNA viene utilizzato nelle scienze forensi per identificare individui e stabilire rapporti familiari, nonché nelle analisi mediche e biologiche. Nella genetica e nella selezione di animali e piante da allevamento, questo metodo viene utilizzato per la certificazione e la selezione della prole di animali di razza pura, la tipizzazione delle varietà vegetali, la determinazione delle differenze interspecifiche e intervarietali e nella batteriologia ed epidemiologia pratica per l'identificazione dei ceppi batterici. La tipizzazione del DNA può essere utilizzata nello studio delle caratteristiche strutturali e funzionali dell'apparato genetico e dei fenomeni di instabilità genomica durante il normale funzionamento e la patogenesi delle cellule, nella genetica delle popolazioni ed evolutiva.

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Oggi sono state studiate più di cento varietà del virus HPV, la metà delle quali causa lo sviluppo di formazioni sulla pelle e sulle mucose degli organi intimi dell'uomo. Le statistiche mostrano che l’80% della popolazione mondiale è infetta. Ciò significa che le cellule del corpo contengono HPV con vari gradi di oncogenicità.

La presenza di papillomavirus in un paziente può portare allo sviluppo di gravi complicazioni, è difficile prevedere come si comporterà questo o quel tipo di agente patogeno. Ecco perché è così importante conoscere le caratteristiche di ciascun genotipo per combattere efficacemente questa infezione.

Molti tipi di papillomavirus umano sono completamente sicuri per il loro portatore; si verificano papillomi e verruche minori, che vengono eliminati con successo con metodi cosmetici.

Altri tipi di papillomi appartengono al gruppo oncogenico e provocano una modificazione attiva delle cellule, che porta alla diagnosi di cancro nel portatore. La divisione dell'HPV in tipologie ci consente di sviluppare le tattiche terapeutiche più corrette, basate su test per l'identificazione dei microrganismi.

Una persona può essere portatrice di diversi DNA HPV, i virus possono stabilizzarsi, smettere di riprodursi o viceversa: il processo di sviluppo delle cellule oncogene progredirà, il che significa che sarà difficile fermare il loro impatto negativo sul corpo.

Gruppo oncogenico

La genotipizzazione dell’HPV è una procedura importante nella diagnosi e nel rilevamento della malattia; rappresenta un’ulteriore opportunità per prevedere il decorso della malattia. In totale, nella medicina pratica, il papillomavirus è diviso in tre gruppi.

1. I virus sono sicuri e non causano lo sviluppo del cancro, quindi non c'è bisogno di farsi prendere dal panico; l'importante è non diventare portatori di altre infezioni in futuro, sottoporsi regolarmente ai test per rilevare l'infezione e non innescare lo stato del sistema immunitario.
2. Bassa probabilità di sviluppare cellule tumorali quando viene rilevato il papillomavirus6,11,42-44 In rari casi possono verificarsi mutazioni cellulari che si trasformano in oncogene.
3. Il gruppo più pericoloso, nelle donne aumenta il rischio di sviluppare un processo tumorale, negli uomini - la causa del cancro alla vescica. Questi sono HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 59, 68.

I pazienti con papillomavirus 66 e 56 dovrebbero prestare maggiore attenzione alla propria salute; molto spesso, tale trasporto dell'infezione è asintomatico e quindi l'identificazione della malattia è problematica. Per ogni tipo di virus è importante monitorare i segni dell'HPV, condurre un esame speciale e, se necessario, iniziare un trattamento qualificato.

Caratteristiche di ciascun tipo di virus

La classificazione dei virus aiuta a determinare il grado di complessità della malattia che tale infezione può provocare. Le verruche comuni sono causate da un virus di tipo 2 e si trasmettono attraverso il contatto domestico con un portatore; ne soffrono molto spesso bambini e adolescenti.

Le difese del corpo consentono al sistema immunitario di far fronte all'infezione, le formazioni scompaiono senza lasciare traccia, l'importante è non ferire la pelle nel sito di sviluppo dei papillomi, per non causare infezioni secondarie.

Quando si infetta con HPV 3 e 5, compaiono piccole escrescenze sul viso e sui palmi. Tali eruzioni cutanee sono anche chiamate eruzioni cutanee giovanili, il che significa che il corpo può far fronte a questa infezione da solo senza l'intervento farmacologico.

Quando vengono rilevate le verruche plantari, possiamo dire con sicurezza della presenza di papillomavirus di tipo 1 e 2 nel corpo. Le donne soffrono molto spesso di indossare scarpe strette con i tacchi alti. La pelle della verruca si ispessisce nel tempo e le escrescenze si moltiplicano in tutto il corpo.

Le formazioni di HPV di tipo 1 crescono all'interno, causano disagio quando si cammina, dolore e dolore, soprattutto di notte. Il papillomavirus del secondo genotipo si manifesta come escrescenze a mosaico che non causano dolore, ma solo disagio estetico.

Le verruche genitali nelle donne si trovano sulle mucose dei genitali e dei genitali e negli uomini - sulla testa del pene e sul prepuzio. Questi sono virus pericolosi di tipo 6 e 11.

Se viene rilevato un papillomavirus a basso rischio oncogeno significa che si tratta dell'aggiunta di un'infezione di tipo 20, 21, 14, 25, 27. Molto spesso si tratta di formazioni benigne che non si ripresentano.

Durante il travaglio della madre, il bambino può essere infettato dalla papillomatosi laringea, HPV di tipo 11. Questa forma della malattia si osserva nei bambini sotto i cinque anni; se le formazioni sono abbondanti, può esserci il rischio di soffocamento.

Determinazione del pericolo dei tipi di HPV 16 e 18

Utilizzando un'analisi hemotest, è possibile effettuare la prognosi più accurata del decorso della malattia, il che significa identificare contemporaneamente più genotipi del virus, effettuare la diagnosi corretta e iniziare un trattamento tempestivo.

Se viene rilevata una combinazione dei tipi 16 e 18, ciò indicherà la presenza di un alto grado di oncogenicità: sarà richiesto un esame colposcopico.

Grazie all'emotest HPV è possibile escludere la possibilità di recidiva con esito fatale.

Quando si diagnostica il cancro cervicale alle donne, si può dire con certezza che la causa della mutazione è il virus di tipo 16. Sotto l'influenza di fattori favorevoli (indebolimento del sistema immunitario, presenza di altre infezioni genitali), il papillomavirus inizia il suo effetto distruttivo sulle cellule, modificandone il DNA.

Ciò significa che il virus del genotipo 16 influenza lo sviluppo di una condizione precancerosa, provoca displasia cervicale e papillomi e condilomi si formano abbondantemente in tutto il corpo del paziente. Negli uomini, questi pericolosi ceppi del virus possono causare la malattia di Bowen, danni alla mucosa dell'organo genitale.

Grazie all'analisi ad alta risoluzione del DNA dell'HPV (27 tipi), è possibile identificare pericolose alterazioni patologiche nell'organismo causate dalla presenza di vari tipi di papillomavirus.

Nella displasia cervicale, oltre ai virus 16 e 18, esistono anche i virus 32, 30, 57, 61 e altri tipi oncogeni. Se durante l'esame i test confermano la presenza di un solo tipo di HPV ad alto rischio e non ci sono escrescenze, allora possiamo parlare di autoeliminazione dell'infezione dal corpo.

Altri tipi di etichette sulla pelle

Il ceppo HPV 49 si manifesta con la crescita di singole formazioni piatte, che possono essere facilmente rimosse utilizzando un dispositivo laser. Questo genotipo non è oncogenico e non si manifesta secondariamente.

Il rilevamento del virus del ceppo 57 in una donna indica una condizione precancerosa del paziente; se sono presenti escrescenze sul viso, vengono rimosse utilizzando un flusso di impulsi, dopo di che non rimangono tracce o tessuto cicatrizzato.

Le crescite dell'HPV di tipo 27 negli uomini e nelle donne possono essere rimosse con azoto liquido ed è esclusa la comparsa di un'infezione secondaria. I ceppi numerati 51, 52, 56 sono oncogeni, il che significa che ulteriori cambiamenti nella struttura del DNA possono causare il cancro.

Negli uomini, lo sviluppo dell'oncologia dell'organo genitale e dell'ano. Solo una terapia farmacologica tempestiva può rallentare questi processi e lasciarsi alle spalle la distruttiva divisione cellulare del DNA.

L'HPV di tipo 37 è una delle cause dello sviluppo del cheratoacantoma, che indica la comparsa di un tumore benigno sulla pelle, localizzato - viso, aree aperte del corpo e, in casi eccezionali - aree chiuse.

I test per rilevare l'HPV di tipo 38 possono indicare lo sviluppo del melanoma; si tratta di escrescenze maligne caratterizzate da aggressività e rapido sviluppo, il che significa che i sintomi non possono essere ignorati, poiché la malattia può avere un impatto negativo su tutti gli organi e sistemi umani.

Analisi per varietà di HPV

Esistono diversi metodi di laboratorio in grado di determinare con precisione quanti ceppi del virus sono presenti nel corpo di un uomo e di una donna. A questo scopo vengono utilizzati tipi di diagnostica come la reazione a catena polimerica e l'analisi della genotipizzazione. La PCR viene eseguita per determinare il tipo di virus e i risultati di questo studio si presentano sotto forma di una tabella con un elenco dei tipi di HPV, i segni di quelli rilevati da essi e un'indicazione della carica virale.

Il materiale per l'analisi nelle donne è uno striscio dal canale cervicale. Durante la gravidanza non è necessario un test per il papilloma, poiché non vi è alcun pericolo per la madre e il feto. Gli uomini con formazioni sospette dovrebbero consultare un urologo. Solo un'attenzione così speciale alla salute aiuterà ad evitare gravi conseguenze per le donne dopo l'infezione del corpo.

Quando dovrebbe essere diagnosticato l’HPV alle donne?

Non dovresti permettere sintomi pronunciati della malattia, è importante sottoporsi regolarmente a esami preventivi dal ginecologo una o due volte l'anno e assicurarsi di fare test per rilevare l'infezione dopo il primo anno di attività sessuale.

Conclusione

Tutte le classificazioni di rilevamento dell'HPV nel corpo stanno subendo modifiche, perché i virus mutano, causano complicazioni, non possono essere trattati, ricompaiono dopo la rimozione e il processo di diagnosi e interpretazione dei test diventa più complicato.

Le specificità di tali neoplasie non sono state ancora studiate con precisione, non è noto quanto tempo ci vorrà per ridurre il rischio di pericolo dopo l'infezione da ceppi oncogeni e rimuovere completamente il virus dal corpo.

Per i pazienti con qualsiasi tipo di HPV è richiesto un approccio terapeutico individuale; per fermare con successo la diffusione del virus nel corpo, è necessario essere regolarmente esaminati da specialisti specializzati, seguire le raccomandazioni e condurre uno stile di vita sano.

Il principale pericolo dell'HPV per donne e uomini è la formazione di un tumore maligno, pertanto questa classificazione del virus viene effettuata tenendo conto del grado del suo pericolo oncologico.

Prenditi cura di te e sii sano!

I tipi di HPV (papillomavirus umano) si manifestano con danni alla pelle e alle mucose con varie escrescenze: papillomi e verruche. Questa è una conseguenza della penetrazione del papillomavirus nel corpo. È un errore pensare che l’impatto del virus sul corpo umano sarà limitato solo alle neoplasie esterne ed interne. Alcuni tipi di papillomi possono portare a tumori maligni. Pertanto, l'obiettivo principale è rimanere vigili quando si rilevano escrescenze insolite sul corpo.

I tipi di HPV erano noti ai nostri antenati già nei primi secoli della nostra era. Gli antichi guaritori determinarono accuratamente che tali escrescenze vengono trasmesse da una persona malata a una persona sana attraverso il contatto sessuale. Gli scienziati sono stati in grado di dimostrare che la causa delle verruche e dei papillomi è un virus solo all'inizio del secolo scorso.

Questo virus appartiene al genere dei papillomavirus e si trasmette attraverso il contatto con un organismo vivente attraverso lo strato superiore della pelle, dove si moltiplica all'interno delle cellule e delle mucose, provocando alterazioni come verruche e papillomi.

Nell'ambiente esterno il virus potrebbe non esistere a lungo; ci sono esempi in cui l'agente patogeno può essere “catturato” in una sauna o in uno stabilimento balneare, poiché prospera in un ambiente umido. Il suo intero ciclo vitale si svolge all'interno delle cellule dell'organismo donatore. Può rimanere a lungo nelle cellule della pelle, causandone la divisione errata.

Il papillomavirus è uno dei più comuni e si trasmette attraverso il contatto sessuale. Il numero di persone infette da questo virus cresce ogni anno. Oggi circa il 90% della popolazione mondiale è portatrice del papillomavirus. Il pericolo principale di questo virus è che, rimanendo a lungo nel corpo, alcuni dei suoi tipi provocano il cancro.

Tipi di virus

I tipi di papillomavirus umano sono oggi ampiamente rappresentati. La tipizzazione dell'HPV ha più di cento varietà.

Diversi tipi di tumori causati dall'HPV causano cambiamenti nel corpo che si manifestano esternamente e internamente. Molti di loro non sono pericolosi per l'uomo, ma ce ne sono alcuni che, dopo essere rimasti a lungo nel corpo umano, possono degenerare in tumori maligni.

A seconda della loro capacità di provocare il cancro nel corpo, si distinguono i seguenti tipi di virus:

• non svilupparsi in cancro (1-5.10, 28.49);
• raramente provoca cancro (6, 11, 13, 32, 34, 40-44, 51, 72);
• percentuale media di trasformazione del cancro (26, 30, 35, 52, 53, 56, 58, 65);
• alta percentuale di formazione di cancro (16, 18, 31, 33, 39, 45, 50, 59, 61, 62, 64, 68, 70, 73).

Quest'ultimo gruppo è particolarmente pericoloso per le donne, poiché spesso causa il cancro cervicale. I tipi più pericolosi, che causano il cancro nel 94% dei casi, sono 16, 18, 45.

Le persone a cui sono stati diagnosticati i tipi di papillomi 56 e 66, che possono portare allo sviluppo di un tipo speciale di cancro: il carcinoma, dovrebbero prestare particolare attenzione alla loro salute.

Questa classificazione sta cambiando in base alla ricerca scientifica. Ciò è avvenuto con il tipo 58, che è passato dall'ultimo gruppo al penultimo.

Se una persona è portatrice del DNA del virus del papilloma, dovrebbe essere regolarmente osservata da un oncologo, sottoporsi ad esame e sottoporsi ai test necessari.

Tipi oncogeni

Sulla base del fatto che alcuni tipi di HPV possono essere pericolosi per il cancro, gli esperti li hanno divisi in diversi gruppi, mostrando il possibile rischio di sviluppare un tumore maligno:

• sicuro;
• a basso rischio;
• con rischio elevato.

L’ultimo gruppo è motivo di grande preoccupazione. In questo caso, puoi osservare papillomi e verruche genitali che si sono depositati sugli organi riproduttivi di entrambi i sessi. Se vengono rilevati, è obbligatoria una visita dall'oncologo. Il medico prescriverà una determinazione differenziata del DNA dell'HPV e poi deciderà se rimuovere tali escrescenze.

Il test HPV nelle donne con cancro cervicale mostra la presenza dei tipi 16 e 18. Si riscontrano in due donne malate su tre.

Se un esame del sangue mostra la presenza di un tipo oncogeno di papillomavirus umano, ciò non significa affatto che si svilupperà necessariamente un tumore maligno. L’HPV nelle donne può aumentare il rischio di sviluppare un tumore. Pertanto, con un trattamento tempestivo appropriato, non vi è alcuna minaccia per la salute.

Oltre al cancro degli organi riproduttivi, l’HPV oncogeno può colpire la vescica negli uomini. In questo caso, il virus sopprime i geni dell'epitelio delle vie urinarie, provocandone la degenerazione in un tumore maligno.

Sintomi diagnostici della malattia

La scienza medica oggi è armata di metodi che consentono di determinare con precisione quale tipo di virus ha causato la comparsa di tumori sul corpo del paziente.

Tra questi, vengono spesso utilizzati i seguenti metodi:

• Ispezione visuale. Una delle manifestazioni cliniche è la presenza di papillomi, condilomi e verruche sul corpo del paziente. Se sono presenti sugli organi riproduttivi e nella zona anale, vengono prescritti ulteriori studi.

• Biopsia (colposcopia). Prescritto per problemi con il tessuto cervicale. Per la procedura, vengono presi per l'elaborazione l'acido acetico e la soluzione di Lugol. Se è presente il DNA del papillomavirus, sulla zona infetta si forma un disegno caratteristico.
• Citologia. Analisi degli strisci mediante PAP test. Inoltre, viene eseguita l'istologia.
• PCR (reazione a catena della polimerasi). L’aspetto positivo di questo metodo è che rileva la genotipizzazione dell’HPV oltre al virus stesso. Il test rileva anche i tipi di HPV di breve durata e autoriparanti.

L’ultimo studio dovrebbe includere campioni per tutti i 15 tipi oncogenici del virus. Anche se dieci di loro sono attivi nel nostro Paese.

Se i risultati diagnostici indicano la presenza di un virus nel sangue e displasia cervicale, è probabile che il metodo PCR rilevi il rischio di sviluppare il cancro.

Sintomi della malattia

Nella maggior parte dei casi, il papillomavirus nel corpo del portatore è in forma asintomatica. Ciò è facilitato dall'immunità, che sopprime tutte le manifestazioni.

Quando il sistema immunitario si indebolisce, tutti i tipi di virus vengono immediatamente attivati. Si uniscono e iniziano a influenzare le cellule della pelle. La normale riproduzione viene interrotta e il processo di divisione delle cellule della pelle accelera.

Di conseguenza, compaiono varie crescite. Sono loro che, all'esame visivo, indicano l'infezione da papillomavirus.

A seconda del tipo, possono apparire i seguenti tipi di escrescenze:

1. Verruche. Crescite rotonde e dense fino a 1 cm di diametro, con confini chiaramente definiti, una superficie ruvida, di diversi colori. Si trovano in aree aperte. Non pericoloso per l'uomo.
2. Papillomi. Una crescita morbida su un gambo color pelle con una superficie ruvida. Ama i luoghi umidi del corpo. Si riproducono molto rapidamente. Alcuni tipi sono pericolosi.
3. Condilomi. Simile ai papillomi. Trovato nell'area degli organi riproduttivi esterni e dell'ano. Si moltiplicano rapidamente e formano interi grappoli. Pericoloso per l'uomo.

Il virus si trasmette attraverso il contatto sessuale. I segni potrebbero non apparire immediatamente, ma anche dopo sei mesi.

Una volta nel corpo, il virus attraversa quattro fasi:

• decorso latente: non ci sono cambiamenti nel corpo, la presenza del virus verrà mostrata solo mediante analisi;
• la comparsa di segni clinici - tra cui escrescenze sulla pelle;
• displasia: il virus penetra nelle cellule e queste iniziano a cambiare, il tipo di virus verrà mostrato da un emotest;
• carcinoma: le cellule mutano, appare un tumore maligno.

Possibili malattie

La tipizzazione del DNA dei tipi HPV 27 provoca varie malattie che possono comparire in una persona dopo l'infezione.

Tra queste malattie ci sono le seguenti:

1. Diversi tipi di verruche. L'infezione avviene attraverso mezzi domestici. I bambini e i giovani ne sono sensibili. Di solito il sistema immunitario se la cava. Le verruche plantari possono essere curate con un intervento chirurgico.
2. Condilomi acuminati. Colpisce i genitali.
3. Epidermodisplasia. Le verruche piatte e rosa causano il cancro della pelle.
4. Papillomatosi laringea. Inerente ai neonati. Rende difficile la respirazione.
5. Papulosi bowenoide. Caratteristico degli uomini, colpisce le mucose.

Particolare attenzione dovrebbe essere prestata alle donne incinte per i segni della malattia, poiché il virus può raggiungere il bambino durante il parto.

Trattamento e prevenzione

La maggior parte delle crescite scompare da sola nel giro di pochi anni. Allo stesso tempo, il corpo sviluppa l'immunità al tipo di virus trasferito, che rimane per tutta la vita. Il trattamento per questa malattia comprende due fasi: l'uso di farmaci antivirali e la rimozione chirurgica.

La terapia farmacologica comprende i seguenti farmaci: Acido salicilico, Bleomicina, Imiquimod, Retinoidi, Epigen, Feresol, Podofillotossina, Solcoderm.

Per la rimozione vengono utilizzate la crioterapia e la terapia laser.

Esiste anche un ampio gruppo di farmaci della medicina tradizionale. Questi sono celidonia, dente di leone, kalanchoe, cipolla, aloe, limoni, assenzio, mirtilli rossi, ecc. Da essi vengono preparati decotti, tinture, applicazioni, sfregamenti, succo, polpa, ecc.

Per prevenire l'infezione, vengono utilizzate misure preventive e la vaccinazione.

Le misure di prevenzione includono:

• garantire una vita sessuale sicura;
• visite regolari dal medico;
• uno stile di vita sano;
• vaccinazione.

Se prendi misure per prevenire la malattia, potresti non sapere mai da solo cos'è il papillomavirus umano.

I risultati ottenuti dallo studio della struttura e dell'organizzazione del DNA genomico di animali, piante e microrganismi hanno lasciato un'impronta profonda sulla metodologia della loro sistematizzazione. Il problema di assegnare adeguatamente un particolare organismo a un particolare gruppo non è puramente accademico. Basata su criteri precisi, la sistematica degli organismi viventi, che determina il rapporto evolutivo tra loro, riveste, oltre che puramente teorico, di grande interesse pratico. In particolare, la conoscenza dell'origine dei diversi ceppi di microrganismi patogeni che causano infezioni ospedaliere consentirebbe di sviluppare efficaci misure protettive contro la loro diffusione.

Recentemente sono stati scoperti marcatori genetici sotto forma di specifiche sequenze di DNA, che consentono di identificare relazioni correlate tra individui della stessa specie attraverso studi intra e interpopolazioni. Questo tipo di ricerca sulle popolazioni umane è particolarmente importante da un punto di vista pratico. Attualmente, i metodi di genetica molecolare consentono di identificare gli individui nella ricerca forense, nonché di risolvere il problema della determinazione della paternità in casi controversi.

Tipizzazione genetica o del DNAè la determinazione delle caratteristiche del genotipo di un organismo analizzando il DNA del suo genoma. In altre parole, nel processo di tipizzazione del DNA, le caratteristiche della struttura primaria del DNA dell'organismo studiato sono determinate in specifici loci genetici. Apparentemente non esistono loci genetici assolutamente conservati. I cambiamenti mutazionali nel genoma si accumulano continuamente durante lo sviluppo filogenetico (storico, evolutivo) della specie. Ma lo stesso tipo di cambiamenti si verifica costantemente nei genomi di singoli individui appartenenti alla stessa popolazione o a popolazioni diverse. Naturalmente, quelli più facili da individuare differenze interspecie nelle sequenze nucleotidiche delle regioni del genoma studiato, poiché queste differenze sono solitamente significative, e sono loro che determinano la distanza evolutiva tra le specie (la loro divergenza).

Pertanto, ciascuna specie di organismo presenta un gran numero di differenze intraspecifiche nella struttura primaria del DNA dei singoli loci genetici. I loci genetici che svolgono la stessa funzione (contenenti lo stesso gene o più geni), ma differiscono nella struttura primaria del DNA, sono chiamati polimorfico, e viene chiamato il fenomeno stesso dell'esistenza di loci polimorfici in una popolazione polimorfismo genetico.

1. Tipizzazione del DNA dei microrganismi

I due metodi più comunemente utilizzati per la tipizzazione del DNA di microrganismi patogeni si basano attualmente sul metodo PCR. Nel primo caso vengono utilizzati uno o più primer corti di struttura primaria arbitraria, lunghi 6-15 nucleotidi, che, a causa delle loro piccole dimensioni, hanno una bassa specificità per loci genetici specifici e sono in grado di ibridarsi con molti siti del DNA genomico . Nel secondo caso vengono utilizzati primer oligonucleotidici specifici, lunghi 20-27 nucleotidi, le cui sequenze affiancano la sequenza nucleotidica in studio nel genoma batterico.

Riso. II.35. Schema per la tipizzazione del DNA di microrganismi mediante PCR e primer di struttura arbitraria

UN– differenze ceppo-specifiche dovute alla diversa localizzazione delle sezioni di DNA che interagiscono con i primer. Nel DNA dei ceppi 2 e 3 manca una regione che è presente nel DNA del ceppo 1, il che porta alla scomparsa della banda corrispondente del prodotto PCR nell'elettroferogramma; B– risultati dell'amplificazione del DNA contenente siti di legame per primer di localizzazione costante. Il DNA dei ceppi 2 e 3 contiene delezioni di diversa lunghezza tra i siti di legame dei primer. In alternativa, il DNA dei ceppi 1 e 2 può contenere inserzioni che non sono presenti nel DNA del ceppo 3. Ciò si riflette nelle lunghezze dei prodotti della PCR separati mediante elettroforesi. A, B – siti di legame dei primer sul DNA

Tipizzazione genetica di microrganismi utilizzando primer di struttura primaria arbitraria. L'uso di primer oligonucleotidici corti di struttura arbitraria si basa sul fatto che nei genomi di grandi dimensioni esistono più siti di atterraggio per essi e, di conseguenza, sull'inizio della PCR. Quanto più brevi sono tali primer, maggiore dovrebbe essere il numero di siti di atterraggio per essi. Una limitazione all'ulteriore partecipazione di tali primer nella PCR sarà la distanza tra i due siti di atterraggio per primer diretti in modo opposto. Quanto più lungo è il prodotto di PCR che dovrebbe formarsi a seguito del funzionamento di tali primer, tanto meno affidabile funziona l'intero sistema di tipizzazione. In pratica, la lunghezza dei prodotti PCR formati con primer arbitrari è compresa tra 0,2 e 2,0 kb.

A seconda della localizzazione sul DNA dei siti di atterraggio per una coppia di primer corti, si possono formare due tipi di prodotti della PCR. Nel primo caso, le differenze nelle lunghezze dei prodotti di PCR sono dovute alla presenza sul DNA dei microrganismi tipizzati di un diverso numero di siti di legame per uno o entrambi i primer (Fig. II.35, UN). Nel secondo caso, tali differenze sono determinate dalla lunghezza dei segmenti di DNA ( ampliconi), conclusi tra coppie di siti di atterraggio dei primer con il loro numero invariato in specifici loci genetici (vedi Fig. II.35, B). In pratica, entrambe queste possibilità possono essere realizzate contemporaneamente. Durante la tipizzazione genetica degli eucarioti utilizzando questi metodi, a volte fino a 100 ampliconi sono immediatamente funzionali, mentre nei batteri questo numero raggiunge solo 20.

Nonostante il fatto che nell'approccio discusso, le sequenze di primer siano scelte in modo casuale, il modello di amplificazione risultante è solitamente specie e ceppo-specifico. Inoltre, il numero di siti di legame sullo stesso DNA per primer della stessa lunghezza ma con strutture primarie diverse può variare in modo significativo. Nella fig. II.35 mostra queste proprietà di venti primer a 10 nucleotidi testati su DNA umano, di fagioli e di S. aureus. Si può notare che l'utilizzo del primer AGGGGTCTTG, ad esempio, porta all'amplificazione di 8 ampliconi nel DNA umano, 3 ampliconi nel DNA di soia e non rileva un singolo amplicone nel DNA di S. aureus, mentre utilizzando il primer AATCGGGCTG è possibile per rilevare fino a 40 ampliconi nel DNA umano e nella soia e fino a 20 ampliconi nel DNA batterico. Pertanto, quando si utilizza il metodo discusso nella tipizzazione del DNA, il passo più importante è la selezione dei primer o delle loro combinazioni per determinare nel modo più efficace se un organismo appartiene a una particolare specie, ceppo o linea.

Tipizzazione genetica di microrganismi mediante impronte genomiche. Un altro approccio alla tipizzazione genetica mediante PCR esamina il polimorfismo di loci specifici di cui è almeno parzialmente nota la struttura primaria. Vengono sintetizzati primer oligonucleotidici specifici, i cui siti di legame fiancheggiano la sequenza di DNA in studio con una lunghezza di 1,5–2,5 kb. Dopo la PCR, le caratteristiche della struttura primaria dei prodotti della PCR vengono determinate mediante l'analisi di restrizione. La posizione dei siti di restrizione nella sequenza nucleotidica analizzata può essere specifica per specie o ceppo e fungere da marcatore genetico accurato di un particolare microrganismo.

Utilizzando questo metodo, che è essenzialmente una variazione del metodo per determinare RFLP discusso sopra, vengono identificati ceppi di agenti patogeni strettamente correlati e fenotipicamente simili, vengono studiati la struttura genetica delle popolazioni di microrganismi e i meccanismi della loro variabilità adattativa.