Пошаговая инструкция проведения биоревитализации вискодермом. Фаготипирование бактерий Что такое препарат раздавленная капля
1. На середину обезжиренного предметного стекла нанесите петлей 1-2 капли бульонной культуры.
2. Осторожно покройте каплю чистым покровным стеклом.
3. Микроскопируйте с приспущенным конденсором. Используйте объективы с увеличением 40 х.
4. Можно также использовать иммерсионный объектив 100х, нанося на покровное стекло одну каплю иммерсионного масла.
При исследовании живых бактерий следует отличать активную подвижность у отдельных микроорганизмов, свидетельствующую о наличии у них жгутиков, от пассивного броуновского движения (движение бактерий в одном направлении).
Занятие № 7
ЭКОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
Изучение микрофлоры ротовой полости
Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
1. Приготовление мазка из зубного налета, окраска простым методом, микроскопия и зарисовка препарата.
Приготовление мазка из зубного налета
1. На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.
2. В правую руку возьмите деревянную палочку (зубочистку) и проведите ею между зубами и у основания зубов, снимая небольшое количество зубного налета.
3. Погрузите палочку в каплю физраствора, равномерно распределите зубной налет по стеклу и приготовьте мазок в виде небольшого круга (d»2см).
4. Прожгите в пламени спиртовки конец палочки, потушите и выбросьте ее в урну.
5. После полного высушивания зафиксируйтемазок.
Окраска мазка простым методом с использованием метиленового синего:
1. После охлаждения предметного стекла нанесите 1-2 капли водного раствора метиленового синего на фиксированный мазок (чтобы он был полностью покрыт краской).
2. Окрашивайте в течение 2-3 минут.
3. Смойте краску водой.
4. Просушите препарат фильтровальной бумагой.
Занятие № 8
ОСНОВЫ УЧЕНИЯ ОБ ИНФЕКЦИИ
Биологический метод исследования
1. Приготовление мазков-отпечатков из органов трупа инфицированной мыши, окраска по Граму, микроскопия и зарисовка препаратов.
Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки, почек небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу, прижимая кусочек ткани к поверхностью разреза.
Мазки-отпечатки фиксируют и окрашивают метиленовым синим или по Граму.
При микроскопии отмечают присутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях.
Занятие № 9
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ХИМИОТЕРАПИИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Методы изучения чувствительности бактерий к антибиотикам
1. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.
2. Определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков.
Качественный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам (метод дисков).
Бумажные диски, пропитанные определенными антибиотиками, помещают на поверхность мясо-пептонного агара в чашках Петри, предварительно засеянных «газоном» исследуемой бактериальной культуры.
Посевы инкубируют в течение 16-24 ч, после чего учитывают результаты опыта по образованию светлых зон задержки роста бактерий вокруг дисков. По диаметру этих зон ориентировочно судят о чувствительности бактерий к антибиотикам.
Так, зоны диаметром до 15 мм указывают на слабую, а с диаметром до 25 мм - на среднюю и более 25 мм - на сравнительно высокую чувствительность исследуемого микроорганизма к антибиотику.
Количественный метод определения чувствительности бактерий к антибиотикам (определение бактериостатического и бактерицидного действия антибиотиков).
Данный метод считается наиболее точным для количественного определения чувствительности бактерий к антибиотикам.
Основной раствор антибиотика, содержащий, например, 100 ЕД/мл, готовят с помощью буферного раствора или специального растворителя.
Серийные разведения препарата (двукратные – 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 )готовят в пробирках, содержащих 1 мл мясо-пептонного бульона: в 1-ю пробирку вносят 1 мл исходного раствора препарата, перемешивают и переносят в следующую, в которой уже содержится 1 мл МПБ, и т.д. – таким методом делают серию (ряд) последовательных разведений препарата от 50 до 0,39 ЕД/мл в равных объемах питательной среды.
В каждую пробирку вносят 0,1 мл испытуемой бактериальной суспензии, густотой 1 млрд/мл по оптическому стандарту. Одновременно ставят контроли - бактерий (1 мл мясо-пептонного бульона+ +0,1 мл суспензии бактерий) и антибиотика (мясо-пептонный бульон + антибиотик).
Посевы инкубируют, после чего отмечают результаты. Отсутствие помутнения среды свидетельствует о задержке роста бактерий в присутствии данной концентрации препарата.
Бактериостатической дозой или минимальной ингибирующей концентрацией (МИК) называется наименьшая концентрация антибиотика, в присутствии которой угнетается видимый рост бактерий.
Для определения бактерицидного действия препарата дополнительно производят высевы из пробирок, в которых отсутствует видимый рост бактерий, на чашки Петри с плотной питательной средой, не содержащей антибиотика.
Наименьшая концентрация антибиотика, вызывающая полную гибель испытуемых бактерий, о чем свидетельствует отсутствие роста на агаре без антибиотинка, называется минимальной бактерицидной концентрацией (МБК) .
Иммунология
Занятие № 11
ИММУНОЛОГИЯ КАК НАУКА. ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИММУНИТЕТ
Испытуемую суточную бульонную культуру бактерий в количестве 0,5 мл вносят в пробирку с расплавленным и охлажденным до 45° С 0,7% мясо-пептонным агаром, перемешивают и равномерно распределяют по поверхности 2% мясо-пептонного агара в чашке Петри.
После застывания агара чашку слегка подсушивают в термостате, затем стеклянное дно чашки делят на квадраты, надписывают номера (или названия) фагов, которые будут использоваться для типирования. Переворачивают чашку, приоткрывают крышку и на обозначенные квадраты пастеровской пипеткой наносят по одной капле соответствующих надписи фагов.
После суточной инкубации просматривают чашку, отмечая те квадраты, в которых имеется лизис бактерий.
Фаготип бактериальной культуры определяется тем типом (типами) фага, который вызывает ее лизис.
Занятие № 6
Генетика бактерий Изучение бактерий в живом состоянии
Приготовление препарата по методу “раздавленной” капли и его микроскопия.
Приготовление препаратов для изучения микроорганизмов в живом состоянии.
Метод «висячей» капли. Используют стекла с лункой и покровные стекла. Края покровного стекла смазывают вазелином, а в центр наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло лункой вниз прижимают к покровному стеклу, так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Используя малый сухой объектив 8х, находят край капли, затем устанавливают объектив 40х и микроскопируют.
Метод «раздавленной» капли.
На поверхность чистого предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой и не выходить за края покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40х или 100х (с иммерсией).
Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микробов вносят в каплю 0,001% раствора метиленового синего или нейтрального красного. Затем приготавливают препарат «висячей» или «раздавленной» капли и микроскопируют.
Этапы приготовления препарата «раздавленная капля»
На середину обезжиренного предметного стекла нанесите петлей 1-2 капли бульонной культуры.
Осторожно покройте каплю чистым покровным стеклом.
Микроскопируйте с приспущенным конденсором. Используйте объективы с увеличением 40 х.
Можно также использовать иммерсионный объектив 100х, нанося на покровное стекло одну каплю иммерсионного масла.
При исследовании живых бактерий следует отличать активную подвижность у отдельных микроорганизмов, свидетельствующую о наличии у них жгутиков, от пассивного броуновского движения (движение бактерий в одном направлении).
Занятие № 7
Экология микроорганизмов Изучение микрофлоры ротовой полости
Практические навыки, осваиваемые студентами на занятии:
Приготовление мазка из зубного налета, окраска простым методом, микроскопия и зарисовка препарата.
Приготовление мазка из зубного налета
На обезжиренное предметное стекло нанесите петлей каплю физиологического раствора.
В правую руку возьмите деревянную палочку (зубочистку) и проведите ею между зубами и у основания зубов, снимая небольшое количество зубного налета.
Погрузите палочку в каплю физраствора, равномерно распределите зубной налет по стеклу и приготовьте мазок в виде небольшого круга (d2см).
Прожгите в пламени спиртовки конец палочки, потушите и выбросьте ее в урну.
После полного высушивания зафиксируйтемазок.
Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.
Культуры для приготовления препарата.
Материалы для исследования и техника взятия
Вопросы для рассмотрения
1. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. Под редакцией Егорова Н.С. МГУ, М. 1995г. Стр. 81-97, 20-28.
2. Коротяев А.И., Бабичев С. А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. «Спец. литература». Санкт-Петербург, 1998. Стр. 14-18.
3. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. «Колос», М. 1972. Стр. 5-23.
ТЕМА: Приготовление микроскопических препаратов и их окраска.
1. Приготовление прижизненных (нативных) препаратов.
2. Приготовление мазков и их фиксация.
3. Красители, используемые в микробиологии.
4. Простые и сложные методы окраски.
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Приготовить фиксированный препарат из молодой культуры дрожжей, окрасить его в течение 2-3 мин метиленовым синим и микроскопировать без иммерсии.
2. Приготовить фиксированный препарат из почвенной суспензии, окрасить по методу Грама, микроскопировать его и зарисовать.
3. Выполнить схематическое изображение клеточной стенки грамотрицательных и грамположительных прокариот.
Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки, колбы или чашки Петри бактериологической петлей, обоженной в пламени спиртовки или стерильной пипеткой.
Пробирку с бактериальной культурой берут в левую руку, а петлю за петледержатель в правую. Правой рукой вращательным движением вынимают из пробирки ватную пробку, зажимая ее между мизинцем и ладонью, а края пробирки обжигают в пламени спиртовки. Осторожно вводят петлю в пробирку, охлаждая ее о внутреннюю поверхность стекла, после чего легким скользящим движением берут материал. Затем вынимают петлю из пробирки, снова обжигают ее край и ватную пробирку и закрывают пробирку. После приготовления препарата петлю обязательно прожигают (стерилизуют) в пламени спиртовки.
Для исследования живых клеток микроорганизмов применяют методы «раздавленной и висячей капли». В обоих случаях возможно окрашивание объекта “прижизненными” красителями – “витальная” окраска.
На чистое предметное стекло наносят каплю воды. В каплю вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы не образовались пузырьки воздуха. Стеклянной палочкой прижимают покровное стекло к предметному. Капля должна быть небольшой, не выходящей за края покровного стекла, но если суспензия попала за край - удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. Метод удобен для исследования подвижности бактериальных клеток, а также просмотра крупных объектов - плесневых грибов, дрожжей. Применяют при изучении запасных веществ клетки. Метод “висячей” капли – используются для длительных наблюдений за клетками микроорганизмов. Препарат готовят на покровном стекле, в центр которого наносят одну каплю бактериальной культуры. Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином, прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь её дна или края. Для микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого находят край капли, а затем устанавливают иммерсионный объектив.
Прижизненная (витальная) окраска. Взвесь микроорганизмов вносят в каплю раствора метиленового синего или нейтрального красного в концентрациях от 0,001 до 0,00001%. Затем готовят препарат по одному из выше указанных методов и микроскопируют. После микроскопии препараты, «раздавленной» или «висячей» капли опускают в дезинфицирующий раствор.
РАЗДАВЛЕННАЯ КАПЛЯ - метод приготовления препаратов для микроскопического исследования биологических объектов. В исследовательской практике Р. к. используют при изучении формы, размера и расположения микроорганизмов, выявления подвижности бактерий, при наблюдении за ростом и размножением микроорганизмов, для изучения реакций микроорганизмов на хим. соединения (хемотаксис) и физические факторы. В практике мед. микробиологии этот метод применяют при микроскопическом исследовании материала от больных для обнаружения возбудителей заболеваний, обладающих специфической морфологией,- простейших, спирохет, грибков. Методом Р. к. и его модификациями пользуются также при микроскопическом исследовании кала и других выделений на яйца и личинки гельминтов.
Для приготовления препарата готовят взвесь исследуемого материала в изотоническом р-ре хлорида натрия или водопроводной воде, добавляя вещества, облегчающие процесс микроскопии (красители, осветлители и др.); используют также культуры микроорганизмов на жидких или полужидких питательных средах, биол, жидкости. Каплю материала помещают на предметное стекло и сверху кладут покровное стекло, избегая появления в препарате пузырьков воздуха. Жидкость не должна выступать за пределы покровного стекла. Щель между предметным и покровным стеклами может быть герметизирована вазелином или смесью, состоящей из равных объемов вазелина и парафина. При исследовании быстродвижущихся микроорганизмов, чтобы уменьшить скорость их движения к суспензии можно добавить метилцеллюлозу. В этом случае можно наблюдать движения жгутиков. При микроскопии живых клеток возможно использование прижизненных (витальных) красителей - метиленового синего, нейтрального красного и других (в разведении 1:1000 - 1:10 000), повышающих контрастность препаратов и позволяющих выявить внутреннее строение простейших, грибков и др.
В зависимости от объекта и целей изучения микроскопию можно проводить при малом или большом увеличении с сухой или иммерсионной системами. В простейшем случае микроскопию осуществляют в затемненном поле зрения при суженной диафрагме и опущенном конденсоре. Более четкое изображение дают микроскопия в темном поле зрения, фазово-контрастная или аноптральная микроскопия (см. Микроскопические методы исследования). При приготовлении препаратов толщина предметных стекол не должна превышать 1,2 мм, а толщина покровных стекол - 0,17 мм. Предметные и покровные стекла должны быть чистыми и обезжиренными. При микроскопии в темном поле зрения препарат готовят как можно тоньше, а толщина покровных стекол не должна превышать 0,11 мм.
С. С. Белокрысенко.
РАЗДАВЛЕННАЯ КАПЛЯ
метод при готовления препаратов для микроскопии живых объектов (бактерий, клеток культур тканей и др.). На предметное стекло наносят каплю воды, физиол. р-ра или культуральной жидкости, вносят в неё небольшое кол-во исследуемой культуры, накрывают покровным стеклом, избегая образования пузырьков воздуха. Для наибольшего контраста применяют темнопольную или фазово-контрастную микроскопию. Под микроскопом
видны неокрашенные организмы, обведённые светлой или тёмной полоской. Р. к. применяют также для прижизненной окраски (краситель 0,1%-ный р-р нейтрального красного).
Ветеринарный энциклопедический словарь. - М.: "Советская Энциклопедия" . Главный редактор В.П. Шишков . 1981 .
Смотреть что такое "РАЗДАВЛЕННАЯ КАПЛЯ" в других словарях:
раздавленная капля - препарат для витальной микроскопии микроорганизмов, приготовляемый путем помещения капли их взвеси между предметным и покровным стеклами … Большой медицинский словарь
Микробиологи́ческая диагно́стика - основана на идентификации возбудителя или выявлении иммунного ответа организма больного на него. Начальным этапом М.д. является отбор материала и транспортировка проб в лабораторию. Вид материала для исследования определяется особенностями… … Медицинская энциклопедия
Микроскопия, исследования невидимых невооружённым глазом объектов при помощи микроскопа. Различают световую М., основанную на использовании световых лучей, и электронную М., где вместо световых лучей применяют поток электронов (см. Электронный… … Ветеринарный энциклопедический словарь
Список основных персонажей серии романов о Гарри Поттере - Серия романов о Гарри Поттере была написана английской писательницей Дж. К. Роулинг с 1997 по 2007 год. В данном списке перечислены все основные персонажи серии романов (в заметной степени повлиявшие на сюжет произведений), а также персонажи,… … Википедия