Migliorare la diagnosi precoce della tubercolosi animale. Diagnosi di reazioni tubercoliniche aspecifiche causate da micobatteri atipici e aviari Boris Lavrentievich Dubovoy
dimensione del font
PREVENZIONE E DIAGNOSTICA DI LABORATORIO DELLA BRUCELLOSI NELL'UOMO - ISTRUZIONI METODOLOGICHE - MU 3-1-7-1189-03 (approvato dallo Stato Principale... Rilevante nel 2018
5.3.2. Reazione di lisi dei leucociti
L'introduzione di un antigene specifico in un organismo sensibilizzato non è indifferente al soggetto. A questo proposito, merita attenzione un metodo efficace per rilevare l'ipersensibilità di tipo ritardato in vitro utilizzando la reazione di lisi leucocitaria (LLR). RLL si basa sulla presa in considerazione della distruzione dei leucociti di un organismo sensibilizzato sotto l'influenza di un antigene specifico, registrato con il metodo in vitro. RLL ha una specificità rigorosa, consente di misurare quantitativamente il grado di sensibilizzazione del corpo e consente di ottenere una risposta 3-4 ore dopo il prelievo di sangue.
Tecnica per impostare RLL.
La RLL viene effettuata in provette di vetro chimicamente puro. Come antigene viene utilizzata una sospensione di Brucella uccisa col calore (si può utilizzare il ceppo vaccinale B.abortus 19BA) in
7 concentrazioni 1 x 10 µl/ml.
Il sangue per la ricerca viene prelevato in una quantità di 1 ml e aggiunto a un pallone con eparina alla velocità di 75 - 80 UI di eparina per 1 ml di sangue. 0,4 ml di sangue eparinizzato vengono posti in 2 provette. Aggiungere 0,1 ml di antigene della brucellosi alla prima provetta (provetta) e 0,1 ml di soluzione salina alla seconda provetta per stabilire la lisi aspecifica dei leucociti (provetta di controllo). Le provette vengono agitate per 2 - 3 minuti, dopodiché i leucociti vengono contati nella camera di Goryaev secondo il metodo accettato in ematologia. Successivamente le provette vengono poste in un termostato per 2 ore a 37 °C e agitate periodicamente dopo 15 - 20 minuti. Dopo l'incubazione, le provette vengono nuovamente agitate per 2 - 3 minuti. e conteggio dei leucociti. Il conteggio viene effettuato almeno 2 - 3 volte per ciascuna provetta, quindi viene visualizzato il numero medio. La presenza di leucociti dopo l'incubazione nelle provette di test e di controllo viene calcolata utilizzando la formula: numero di leucociti dopo l'incubazione x 100% numero di leucociti prima dell'incubazione.
L'indicatore della lisi leucocitaria specifica (PSL) viene calcolato determinando la differenza: la percentuale di riduzione dei leucociti nella provetta meno la percentuale di riduzione dei leucociti nel controllo. Il PSL è espresso come valore negativo e varia da -10 a -30%. Una PSL inferiore a -10% indica una lisi non specifica.
L'invenzione riguarda il campo della biotecnologia. Il metodo prevede l'identificazione degli animali che reagiscono alla tubercolina in allevamenti e cortili sani attraverso test allergici di routine. Dagli animali che reagiscono positivamente alla tubercolina, il sangue viene esaminato utilizzando la reazione specifica di lisi leucocitaria (RSLL) utilizzando PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e CAM come diagnostico per le tubercoline. Il metodo consente di differenziare le reazioni positive specifiche e non specifiche al test della tubercolina e di diagnosticare la tubercolosi in una fase precoce della malattia. 4 stipendio fascicoli, 7 tavole.
L'invenzione riguarda la medicina veterinaria, in particolare metodi espressivi per la diagnosi differenziale della tubercolosi causata da diversi tipi di micobatteri.
È noto che nelle aziende agricole prospere la diagnosi primaria della tubercolosi viene stabilita in modo complesso: epizootologica, clinica, allergica, patologica e di laboratorio (1.)
I metodi diagnostici elencati in molti casi non consentono di formulare una diagnosi definitiva di tubercolosi in un breve periodo di tempo.
Per i test intravitali di massa per la tubercolosi viene utilizzato un test diagnostico allergico (2). Tuttavia, la comparsa di reazioni massicce e non specifiche alla tubercolina in animali non tubercolari non consente di formulare una diagnosi di tubercolosi in allevamenti prosperi sulla base di un test positivo alla tubercolina (1; 2).
Per differenziare le reazioni tubercoliniche aspecifiche, viene eseguito un test simultaneo (prototipo) con due allergeni: PPD per i mammiferi e l'allergene KAM, costituito da diversi ceppi di micobatteri atipici (2; 3; 4).
Un test allergologico simultaneo viene utilizzato per la diagnosi iniziale di tubercolosi nei bovini, nei piccoli ruminanti e nei polli in allevamenti sani e nei casi in cui le reazioni alla tubercolina sono causate da micobatteri atipici e saprofiti acido-resistenti (3).
I proprietari di mucche ad alto rendimento contestano la legalità del controllo e della macellazione diagnostica degli animali che hanno dato una reazione positiva al test della tubercolina e richiedono metodi diagnostici intravitali per riesaminare gli animali altamente produttivi per la tubercolosi. L’utilizzo della nostra proposta “Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale” chiarisce questa questione controversa, poiché ci consente di stabilire chiaramente la specificità o aspecificità della reazione dell’animale all’iniezione intradermica di tubercolina e infine di formulare una diagnosi.
Inoltre, sono consentiti test simultanei 30 o più giorni dopo l'ultima tubercolinizzazione degli animali, il che non soddisfa i requisiti per la diagnosi precoce (preclinica) della tubercolosi in un breve periodo di studio.
Pertanto, gli svantaggi dei metodi noti per diagnosticare la tubercolosi sono l'intensità del lavoro, i lunghi tempi di ricerca e l'incapacità di determinare il tipo di micobatteri nei primi giorni dopo l'infezione.
Il metodo si basa sull'aumento immediato della sensibilità dei leucociti al contatto ripetuto con un antigene (allergene) esterno al corpo. Lo scopo dell'invenzione è quello di sviluppare un nuovo metodo. Questo obiettivo viene raggiunto utilizzando la reazione di lisi leucocitaria specifica (RSLL).
Il metodo viene eseguito esaminando il sangue di RSLL di animali che reagiscono positivamente alla tubercolina, identificati in allevamenti e cortili prosperi mediante test allergici di routine, utilizzando la tubercolina come diagnostico (PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e KAM).
Inoltre, quando si diagnostica la tubercolosi nei bovini, la RSLL viene eseguita con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e KAM, un allergene complesso da micobatteri atipici.
La diagnosi di tubercolosi nei suini viene eseguita con la tubercolina PPD per i mammiferi e con la tubercolina PPD per gli uccelli.
Quando si diagnostica la tubercolosi nei cani e nei carnivori, l'RSLL utilizza la tubercolina PPD per i mammiferi.
La diagnosi della tubercolosi nei conigli e negli animali da pelliccia RSLL viene effettuata con PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli e KAM.
Organizzazione della ricerca sulla tubercolosi RSLL
Negli esperimenti su conigli, cani, maiali e vitelli, sono stati utilizzati micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG-1 per sensibilizzare gli organismi degli animali in dosi vaccinali: uno (0,05 mg), due (0,1 mg), tre (0,15 mg), cinque (0,25 mg) e dieci (0,50 mg).
Gli studi sono stati condotti in condizioni sperimentali su leucociti del sangue di animali intatti vaccinati con BCG e in condizioni di produzione - mucche che hanno dato due volte una reazione positiva alla somministrazione intradermica di PPD-tubercolina per mammiferi, nel complesso di produzione agricola Rassvet a Matveevo- Regione di Kurgan.
L'obiettivo principale della ricerca è utilizzare i risultati dell'RSLL per la diagnosi differenziale e la determinazione di:
1) sensibilizzazione dei leucociti del corpo animale da parte dei micobatteri del vaccino BCG;
2) infezione di mucche che hanno dato una reazione doppia positiva alla tubercolina;
3) reazioni non specifiche alla tubercolina quando somministrata per via intradermica.
Per l'esperimento sono stati selezionati animali intatti clinicamente sani e utilizzati come controlli di fondo. I gruppi erano formati da animali in cui sono stati ottenuti valori stabili dei parametri ematologici (numero di leucociti, % di lisi, ecc.) durante l'esame triplo dei campioni di sangue.
In ciascun gruppo sperimentale sono stati inseriti almeno tre animali. Il sangue è stato prelevato da ciascun animale e diviso in campioni di controllo e sperimentali. Nel campione di controllo è stata aggiunta al sangue una soluzione fisiologica di cloruro di sodio allo 0,9% e nei campioni di sangue sperimentali - tubercolina - PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e KAM.
Per eliminare errori di attenzione nella tecnica di conteggio dei globuli e ottenere valori medi affidabili degli indicatori di reazione del sangue, ciascun campione (controllo e sperimentale) è stato esaminato in triplicato.
La procedura per condurre uno studio sulla tubercolosi RSLL
Lo studio degli animali per la tubercolosi viene inizialmente effettuato con il metodo della tubercolinizzazione nei modi e nei tempi previsti dal "Controllo delle epizoozie e diagnosi della tubercolosi negli animali di diverse specie" (2).
Come strumenti diagnostici vengono utilizzati la tubercolina PPD per i mammiferi, la tubercolina PPD per gli uccelli e un allergene complesso dei micobatteri atipici (CAM).
Nelle mandrie, nei gruppi e nei singoli animali esenti da tubercolosi, il principale metodo di ricerca è il test intradermico della tubercolina. Se vengono identificati animali che reagiscono alla tubercolina, quelli che reagiscono positivamente vengono isolati, legati e da loro viene prelevato il sangue per l'analisi della reazione di lisi leucocitaria specifica (SLLR) con la seguente diagnostica:
Nei bovini viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL
a) soluzione fisiologica di cloruro di sodio (campione di controllo);
d) PPD-tubercolina per uccelli.
Allo stesso tempo, gli animali che hanno dato risultati positivi dallo studio della RSLL con PPD-tubercolina per i mammiferi sono considerati tubercolari
Nei suini viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL
a) soluzione salina fisiologica;
b) PPD-tubercolina per i mammiferi;
c) PPD-tubercolina per uccelli.
I suini nei quali l'RSLL alla PPD-tubercolina per i mammiferi risulta positivo sono considerati tubercolari, mentre gli animali nei quali l'RSLL alla PPD-tubercolina per gli uccelli risulta positivo vengono considerati infetti da micobatteri aviari;
Nei cani e in altri piccoli animali viene prelevato RSLL
a) soluzione salina;
b) PPD-tubercolina per i mammiferi;
Nei conigli viene prelevato il sangue anticoagulante nella RSLL
a) soluzione fisiologica di cloruro di sodio;
b) PPD-tubercolina per i mammiferi;
c) PPD-tubercolina per uccelli;
Allo stesso tempo, i conigli che hanno dato un RSLL positivo con PPD-tubercolina per i mammiferi sono considerati infetti da un patogeno della tubercolosi di tipo bovino e con PPD-tubercolina per gli uccelli - infetti da un patogeno di tipo aviario, con CAM - sensibilizzati con atipici micobatteri non tubercolari.
Lo scopo dell'invenzione è ridurre il tempo necessario per rilevare l'agente causale della tubercolosi nel corpo degli animali e per determinare il tipo di micobatteri che causa la sensibilizzazione.
Il raggiungimento di questo obiettivo si basa sul fenomeno dell'acquisizione immediata di una maggiore sensibilità del corpo dopo l'introduzione dell'agente patogeno da parte delle cellule immunocompetenti, che viene rilevata in seguito all'esposizione ripetuta dei leucociti del sangue allo stesso antigene all'esterno del corpo. L'ipersensibilità dopo l'infezione è un fenomeno cellulare in cui le cellule effettrici che interagiscono con la tubercolina all'esterno del corpo sono leucociti del sangue sensibilizzati, che differisce dall'ipersensibilità di tipo ritardato (DHT) del corpo, che si sviluppa negli animali 2-3 settimane dopo l'infezione con la tubercolina. agente eziologico della tubercolosi.
Metodo di implementazione
Un metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale viene eseguito come segue. 0,1 ml di sangue da analizzare e una dose di lavoro di tubercolina in un volume di 0,05 ml (provette) vengono aggiunti a un pozzetto di una compressa contenente 0,05 ml di una soluzione al 3,8% di citrato di sodio (eparina, Trilon B o qualsiasi altro anticoagulante) . Le provette di controllo vengono riempite nello stesso volume con soluzione fisiologica senza tubercolina. Il sangue nei pozzetti della piastra viene incubato per 2 ore a t=37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, 0,02 ml di sangue dai pozzetti di controllo e sperimentali vengono trasferiti in un pozzetto con 0,4 ml di liquido di Turk (soluzione di acido acetico al 3-5%, colorata con alcune gocce di soluzione di blu di metilene) per distruggere i globuli rossi e colorare il sangue. nuclei dei leucociti. Contare il numero di leucociti (nella camera di Goryaev) in tutti i pozzetti e calcolare le velocità di reazione della lisi leucocitaria specifica (in percentuale) utilizzando la formula
dove L k e L o sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali. L'RSLL è considerato positivo quando è pari o superiore al 10%.
Esempio 1. Dose di lavoro di tubercolina
Schema di esperimenti per determinare la dose di lavoro di tubercolina (rapporto tra anticoagulante, sangue e tubercolina)
Nel disegno sperimentale per determinare la dose di lavoro delle tubercoline, è stato dimostrato che i rapporti volumetrici dell'anticoagulante e del sangue nei campioni sono rimasti gli stessi e le dosi di tubercoline sono aumentate: 0,05; 0,1 e 0,15 ml
| Tabella 1 Determinazione della dose di lavoro di tubercolina (in media per gruppo) per bovini e suini in RSLL |
||||||||||||
| Dose di antigene | BESTIAME | MAIALI | ||||||||||
| Il numero di leucociti durante l'interazione “in vitro” (10 9// l) | RSLL in % | Il numero di leucociti durante l'interazione “in vitro” (10 9/ l) | RSLL in % | |||||||||
| Soluzione fisica | PPD, ml. | KAM | PPD degli uccelli | PPD, ml. | KAM | PPD degli uccelli | Fis. rr | PPD ml. | PPD degli uccelli | PPD ml. | PPD degli uccelli | |
| 0,05 | 9,5 | 9,6 | 9,4 | 9,5 | -1% | 1% | 0 | 9,3 | 9,2 | 9,4 | 1% | 1% |
| 0,1 | 9,5 | 9,5 | 9,4 | 9,4 | 0% | 1% | 1 | 8,6 | 8,7 | 8,7 | 1% | 1% |
| 0,15 | 9,3 | 9,0 | 9,1 | 9,2 | 3% | 2% | 1 | 8,7 | 8,4 | 8,8 | 3% | 2% |
Come si può vedere dalle Tabelle 1 e 2, l'RSLL in tutti i campioni non supera il 3% nei bovini, nei suini, il 7,4% nei cani e il 2% nei conigli, pertanto è più economico utilizzare una dose di 0,05 ml di tubercolina come soluzione dose di lavoro, perché Il suo RSLL era inferiore rispetto alla dose di 0,15. E il suo valore era quasi lo stesso per la PPD dei mammiferi, la PPD degli uccelli e il KAM.
Pertanto, la dose di lavoro di tubercolina è determinata in 0,05 ml per RSLL.
Esempio 2. Specificità e attività del sangue RSLL di tori vaccinati con BCG-1
Negli esperimenti su tori di 4-6 mesi sono state studiate la specificità e l'attività di RSLL. A tale scopo, agli animali sono stati iniettati micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG-1 in dosi di vaccinazione: 0,05 mg, 0,15 mg, 0,25 mg e 0,50 mg (una, tre, cinque, dieci dosi), quindi il sangue è stato esaminato in RSLL. il giorno della vaccinazione e ogni 24 ore per 10 giorni (240 ore).
Il numero di leucociti nei campioni di sangue con PPD per i mammiferi variava da 8,2 a 9,1·10 9 /l. È caratteristico che nei campioni di sangue di tori vaccinati con BCG, quando interagiscono con la PPD per i mammiferi, è stata osservata una diminuzione del numero di leucociti 48-120 ore dopo la somministrazione del vaccino rispetto ad altri campioni, ma il loro numero rientrava nei valori normali. allineare.
Nelle stesse ore dopo l'introduzione di micobatteri vivi nei campioni di sangue con soluzione fisiologica PPD per uccelli e CAM, il numero di leucociti era quasi lo stesso e variava da 9,2 a 11,3·10 9 /l, cioè è stata rilevata leucocitosi, che era più forte, maggiore era la dose di inoculazione del vaccino contro i micobatteri pz. BCG-1.
Come si può vedere dalla Tabella 3, nei campioni di sangue con PPD per i mammiferi, la RSLL positiva è stata rilevata già 24 ore dopo la sensibilizzazione dei bovini con il vaccino BCG; nei campioni di sangue con DPD per gli uccelli e CAM, gli indicatori RSLL erano negativi.
| Tabella 3 Indicatori RSLL nei bovini sensibilizzati con vaccino BCG con tubercolina: PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli e CAM |
||||||||||||
| Tempo dopo la vaccinazione, h | ||||||||||||
| Uno (0,05 mg) | Tre (0,15 mg) | Cinque (0,25 mg) | Dieci (0,50 mg) | |||||||||
| PPD ml. | PPD punto. | KAM | PPD ml. | PPD punto. | KAM | PPD ml. | PPD punto. | KAM | PPD ml. | PPD punto. | KAM | |
| il giorno della sensibilizzazione | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 1,2 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 14 | 0 | 1 | 14,3 | 0 | 0 | 16,2 | 1 | 1 | 34,3 | 1 | 1 |
| 48 | 27 | 0 | 0 | 32,5 | 0 | 0 | 28,6 | 1 | 0 | 48,3 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 0 | 1 | 25,5 | 0 | 1 | 21,6 | -1 | 1 | 41,3 | -1 | 1 |
| 96 | 17 | 0 | 0 | 10,8 | 0 | 0 | 19,5 | 0 | 0 | 35 | 0 | 1 |
| 120 | 13 | 0 | 0 | 5 | 1 | 0 | 10,3 | 0 | 0 | 24,2 | 0 | 1 |
| 144 | 7 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 6,3 | 0 | 1 | 20 | 1 | 1 |
| 168 | 1 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | 2,4 | 0 | 1 | 15,1 | 0 | 1 |
| 192 | 1 | 0 | 0 | 1,2 | 0 | 1 | 8,6 | 0 | 1 | |||
| 216 | 0 | 0 | 0 | 6 | -1 | 1 | ||||||
| 240 | 0 | 0 | 0 | |||||||||
| - PPD ven. - PPD per gli uccelli |
I risultati della ricerca ottenuti indicano la specificità della RSLL. RSLL può essere utilizzato per identificare animali sensibilizzati da micobatteri con antigeni correlati alla tubercolina.
L'attività di RSLL è caratterizzata dal fatto che con l'aumento della dose di vaccino contro i micobatteri vivi pz. BCG-1 da 0,05 mg a 0,50 mg per animale aumenta l'indicatore RSLL.
Pertanto, si è riscontrato che quando vaccinati con una dose di BCG-1, il tasso più alto di RSLL con PPD per i mammiferi era 48-72 ore dopo l'iniezione (27-23%)
Quando i bovini vengono sensibilizzati con tre dosi di vaccinazione, si osservano contemporaneamente anche indicatori RSLL positivi. La percentuale massima di lisi raggiunge il 32,5% dopo la somministrazione del vaccino BCG.
Quando agli animali venivano somministrate cinque dosi di vaccinazione, la lisi dei leucociti era più lunga e tendeva ad aumentare. Questa tendenza è stata osservata in modo particolarmente chiaro quando agli animali sono state somministrate 10 dosi di vaccino BCG, quando la lisi dei leucociti 48 ore dopo l'iniezione del vaccino ha raggiunto il 48,3% ed è stata più lunga, vale a dire all'aumentare del numero delle dosi vaccinali è aumentata la percentuale di leucociti sensibilizzati e ciò ha influito sugli indicatori RSLL (Tabella 3).
I risultati degli indicatori RSLL in base al numero di dosi di vaccino BCG-1 indicano un'attività pronunciata di RSLL.
Pertanto, il tasso medio giornaliero di RSLL con PPD per i mammiferi nell'arco di 120 ore con una dose di vaccinazione di micobatterio BCG è stato del 18,8%, tre - 20,8%, cinque - 19,24% e dieci - 32,2%. Con dieci dosi vaccinali di BCG gli indicatori positivi di RSLL con PPD per i mammiferi vengono estesi a sette giorni.
Studi effettuati con iniezioni di vaccino contro micobatteri vivi pz. BCG ha permesso di stabilire la specificità e l'attività di RSLL, necessaria per la diagnosi differenziale delle reazioni specifiche e non specifiche alla tubercolina.
Esempio 3. Studio per determinare la sensibilizzazione nei suini causata dall'introduzione del vaccino contro micobatteri vivi pz. BCG-1
Gli esperimenti sono stati condotti su suinetti svezzati di tre gruppi, ai quali sono state iniettate una, tre e cinque dosi di vaccino BCG. Il numero di leucociti nei suini sensibilizzati con una dose di vaccino BCG con DPD per i mammiferi variava da 7,2 a 8,8·10 9 /le con soluzione salina DPD per gli uccelli variava da 8,7 a 14,3·10 9 /l. Il numero più alto di leucociti è stato raggiunto 48 ore dopo la vaccinazione. Lo stesso andamento è stato notato con l'introduzione di tre e cinque dosi di vaccino BCG, dove il numero di leucociti con soluzione salina e PPD per gli uccelli dopo 48 ore ha raggiunto rispettivamente 15,4 e 18,6·10 9 /l. Di conseguenza, il tasso di RSLL con PPD per i mammiferi nei suini sensibilizzati dopo 24 ore con una dose di vaccinazione è stato del 26,9%, tre - 28,9%, cinque - 38,1%. Il tasso di RSLL più elevato è stato 48-72 ore dopo la sensibilizzazione e ammontava al 46,6-49,7%; 41,5-46,7%; 49,7-55,4% a seconda delle dosi (Tabella 4).
| Tabella 4 Indicatori RSLL nei suini sensibilizzati con vaccino BCG con tubercolina: PPD per i mammiferi, PPD per gli uccelli |
||||||
| Tempo dopo la vaccinazione, h | Numero di dosi di vaccino BCG | |||||
| Uno (0,05 mg) | Tre (0,15 mg) | Cinque (0,25 mg) | ||||
| PPD ml. | PPD degli uccelli | PPD ml. | PPD degli uccelli | PPD ml. | PPD degli uccelli | |
| il giorno della sensibilizzazione | -1 | 0 | 0,9≈1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 26,9 | 1 | 28,9 | 1 | 38,1 | 0 |
| 48 | 49,65 | 1 | 46,7 | 1 | 55,4 | 0 |
| 72 | 46,61 | 0 | 41,5 | 1 | 49,7 | 1 |
| 96 | 34,45 | 0 | 26,9 | 1 | 19 | 0 |
| 120 | 17,82 | 0 | 20,9 | 1 | 13 | 0 |
| 144 | 1,15 | -1 | 7,8 | 0 | 6,4 | 1 |
| 168 | 0 | 0 | 1,8 | 1 | 1,8 | -1 |
| 192 | 0 | 1 | ||||
| -PPDml. - PPD per i mammiferi | ||||||
| - PPD ven. - PPD per gli uccelli |
Nei suinetti vaccinati, indicatori positivi di RSLL sono stati rilevati 24-120 ore dopo la somministrazione di una, tre e cinque dosi di vaccino BCG.
L'RSLL con DPD per gli uccelli è risultato negativo, confermando la specificità dell'RSLL con DPD per i mammiferi.
Esempio 4. Studio per determinare la sensibilizzazione nei cani causata dall'introduzione di micobatteri vivi nel pezzo di vaccino. BCG-1
Negli esperimenti sui cani dopo la somministrazione di una, tre, cinque dosi di vaccino BCG, si è riscontrato che dopo 24-72 ore quando il sangue interagiva con la soluzione salina, il numero di leucociti era 5,2-6,2 10 9 /l, e con DPP per i mammiferi 3 ,4-4,7 10 9 /l, cioè è stata notata leucopenia.
Il numero di leucociti con la soluzione salina è aumentato di due o più volte rispetto alla norma. Di conseguenza, gli indicatori RSLL erano del 14-25% con una dose, del 20,8-60,6% con tre e del 22-68% con cinque. Il tasso di RSLL più alto è stato 48 ore dopo la vaccinazione. Indicatori RSLL positivi sono stati rilevati con una dose dopo 24-96 ore, con tre dopo 24-120 ore, con cinque dopo 24-240 ore, ad es. con un aumento della dose di vaccino, è aumentata la durata della sensibilizzazione dei leucociti e l'attività - indicatori RSLL - è aumentata (Tabella 5).
| Tabella 5 Indicatori RSLL in cani e conigli sensibilizzati con il vaccino BCG |
|||||||||
| Tempo dopo la vaccinazione (ore) | Numero di dosi di vaccino BCG | ||||||||
| CANI | CONIGLIO | ||||||||
| uno (0,05 mg) | tre (0,15 mg) | cinque (0,25 mg) | cinque (0,25 mg) | dieci (0,50 mg) | |||||
| PPD ml. | PPD ml. | PPD ml. | PPD ml. | PPD degli uccelli | KAM | PPD ml. | PPD degli uccelli | KAM | |
| Il giorno della sensibilizzazione | 1 | 0 | 0,7 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 1 |
| 24 | 24 | 45,9 | 60,5 | 58 | 1 | 0 | 56 | 1 | 0 |
| 48 | 25 | 60,6 | 68 | 71 | 0 | 0 | 72 | 0 | 0 |
| 72 | 23 | 50 | 63,8 | 71 | 0 | 1 | 41 | 1 | 0 |
| 96 | 14 | 43,6 | 62,6 | 36 | 1 | 0 | 26 | 1 | 0 |
| 120 | 1,9 | 20,8 | 57,4 | 2 | 0 | 1 | 30 | 0 | 1 |
| 144 | 1 | 3,4 | 54,9 | 0 | 1 | 0 | 25 | 0 | 0 |
| 168 | 1 | 1 | 41,2 | 0 | 0 | 0 | 19 | 0 | 1 |
| 192 | 0 | 0 | 0 | 0 | 17 | 1 | 1 | ||
| 216 | 32 | 0 | 0 | 1 | 17 | 0 | 0 | ||
| 240 | 22 | 0 | 1 | 0 | 13,7 | 0 | 0 | ||
| 264 | 0 | 0 | 1 | 1 | 16,0 | 1 | 0 | ||
| 288 | 1,4 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 | ||
| 336 | 1 | 0 | 1 | 0 | 0 | 0 | |||
| 408 | 23 | 1 | 1 | ||||||
| 672 | 1 | 0 | 0 | ||||||
| -PPDml. - PPD per i mammiferi | |||||||||
| - PPD ven. - PPD per gli uccelli |
Esempio 5. Studio per determinare la sensibilizzazione nei conigli causata dall'introduzione del vaccino contro micobatteri vivi pz. BCG-1
Quando si vaccinano conigli con cinque dosi di vaccino BCG, il contenuto più basso di leucociti nel sangue quando interagiscono con la PPD per i mammiferi è stato riscontrato dopo 24 e 72 ore (4,6-4,7 10 9 /l), e con dieci dosi il numero più basso dei leucociti quando interagiscono con La PPD per i mammiferi era a 24 ore (3,8 10 9 /l) e 48 ore (4,7 10 9 /l). Una particolarità è che durante l'interazione del sangue con la PPD nei mammiferi, 72-264 ore e 408 ore dopo la vaccinazione, il numero di leucociti era molte volte superiore al normale e ammontava a 11-28,5 10 9 /l, cioè . Invece di leucopenia, è stata notata leucocitosi. Allo stesso tempo, il numero di leucociti nei campioni con soluzione salina (campioni di controllo) superava significativamente il numero dei leucociti nei campioni sperimentali ed era pari a 25,0-38,7 10 9 /l. È stato riscontrato che, a fronte della leucocitosi causata dalla somministrazione di grandi dosi di vaccino BCG, la RSLL nei conigli era positiva e variava dal 13,7 al 72% (Tabella 5).
Esempio 6. Studio di campioni di sangue di mucche RSLL che hanno dato una doppia reazione positiva alla tubercolina
La diagnosi di tubercolosi mediante reazioni di lisi specifica dei leucociti RSLL in condizioni di produzione è stata effettuata presso il Rassvet SEC nella regione di Matveevo-Kurgan.
Nell'ottobre 2006, in un allevamento precedentemente di successo, sette mucche su 198 testate hanno reagito positivamente alla tubercolina. Quando ripetuta la tubercolinizzazione dopo 45 giorni, hanno dato nuovamente una reazione positiva. Con l'iniezione intradermica di tubercolina si sono formati rigonfiamenti diffusi di consistenza pastosa e la plica cutanea si è ispessita di 5-10 mm.
Prima della macellazione, il sangue veniva prelevato dalle mucche per testare la reazione specifica di lisi leucocitaria (SLLL). I risultati degli studi sul numero di leucociti e sugli indicatori RSLL nelle mucche con una reazione pronunciata alla tubercolina sono presentati nella Tabella 6.
| Tabella 6 RSLL e dati patologici nelle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina |
|||||||
| Numeri di inventario delle mucche | Il numero di leucociti e l'indicatore RSLL del sangue quando si interagisce con | ||||||
| Fisiologico soluzione | PPD per ml. | PPD per gli uccelli | KAM | ||||
| numero di laghi | numero di laghi | RSLL% | numero di laghi | RSLL% | numero di laghi | RSLL% | |
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 6827 | 7,7 | 5,5 | 29 | 7,6 | 1 | 7,55 | 2 |
| 071 | 11,0 | 7,1 | 36 | 11,0 | 0 | 10,5 | 1 |
| 4006 | 5,05 | 5,0 | 1 | 5,0 | 1 | 5,05 | 1 |
| 4018 | 9,5 | 2,75 | 71 | 9,35 | 2 | 9,4 | 1 |
| 162 | 5,0 | 4,8 | 4 | 4,9 | 1 | 4,9 | 1 |
| 109 | 5,0 | 4,9 | 2 | 5,0 | 0 | 4,9 | 1 |
| 148 | 5,75 | 4,2 | 27 | 5,7 | 1 | 5,7 | 1 |
Come si può vedere dalla Tabella 6, delle sette mucche che hanno risposto all'iniezione intradermica di tubercolina, solo quattro hanno avuto un RSLL positivo (inventario n. 6827; n. 071; n. 4018; n. 148) in seguito all'interazione dei campioni di sangue con PPD-tubercolina per i mammiferi. I campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM hanno dato valori RSLL negativi.
Un esame veterinario del controllo e della macellazione diagnostica di mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina ha mostrato che dei quattro animali con indicatori RSLL positivi, solo due presentavano cambiamenti caratteristici della tubercolosi nei linfonodi: in una carcassa nella zona sottomandibolare e retrofaringea, e nel secondo nei linfonodi mediastinici e mesenterici. Nelle carcasse di due mucche con una reazione positiva al test della tubercolina e indicatori RSLL positivi, non sono stati rilevati visivamente cambiamenti patologici caratteristici della tubercolosi negli organi interni e nei linfonodi. Ciò è probabilmente dovuto alla recente infezione di animali con l'agente eziologico della tubercolosi e i cambiamenti patologici non hanno ancora avuto il tempo di formarsi. Inoltre, durante un controllo post mortem e un esame diagnostico, è stato riscontrato che le reazioni positive all'iniezione intradermica di tubercolina sono state date da due mucche gravide (7-8,5 mesi di gravidanza) e una con endometrite acuta dovuta a infezione da streptococco. I cambiamenti patologici nelle mucche che hanno risposto positivamente alla tubercolina sono mostrati nella Tabella 7.
| Tabella 7 Cambiamenti patologici nelle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina |
|
| Numero di mucca | Cambiamenti patologici |
| 6827 | Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi |
| 071 | Il linfonodo sopraarterioso è iperemico, il linfonodo epatico nella sezione presenta focolai simili a salo, non sono stati riscontrati altri cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi |
| 4006 | Endometrite postpartum, non sono stati riscontrati altri cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi |
| 4018 | Il linfonodo sottomandibolare sinistro della sezione presentava focolai necrotici di colore grigio-bianco; non sono stati riscontrati altri cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi |
| 162 | Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 7 mesi |
| 109 | Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 7,5 mesi |
| 148 | Non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi, gravidanza 8 mesi |
Un esame di controllo e diagnostico di vacche macellate che hanno reagito positivamente alla tubercolina ha mostrato che in quattro casi su sette un test positivo alla tubercolina coincideva con un RSLL positivo (B = 4: 7 = 0,57); in un caso (B=1:7=0,14) su tre vacche con una gravidanza di 7-8 mesi. un test positivo alla tubercolina coincideva con una gravidanza profonda (8 mesi; B=1:3=0,33); in un caso - con infezione da streptococco (endometrite acuta; B=1:7=0,14).
RSLL in due casi su quattro gli indicatori positivi coincidevano con il rilevamento di alterazioni patologiche caratteristiche della tubercolosi (B=2:4=0,5), e in due casi su quattro (B=2:4=0,5) i dati patologici visivi non erano Si è riscontrato che ciò non può costituire una base per escludere un'infezione precoce da micobatteri, quando i cambiamenti patologici non si sono ancora formati.
Letteratura
1. Diagnosi di tubercolosi. // V.P. Urban, M.A. Safin, A.A. Sidorchuk, M.V. Kharitonov, R.S. Sigbatulin, F.G. Akberov. // Workshop su epizootologia e malattie infettive con servizi igienico-sanitari veterinari. Manuale. Mosca: Kolos, 2003, pp.82-86.
2. Controllo epizootologico e diagnosi della tubercolosi in animali di diverse specie. Prevenzione e controllo delle malattie infettive comuni all'uomo e agli animali. Raccolta di norme sanitarie e veterinarie. Ed. ufficiale. Comitato statale per la sorveglianza sanitaria ed epidemiologica della Russia. Ministero dell'Agricoltura della Russia. Mosca. 1996, pp.164-167.
3. Istruzioni per l'esecuzione di un test simultaneo utilizzando la tubercolina e l'allergene complesso da micobatteri atipici (AM) nella diagnosi della tubercolosi animale. Legislazione veterinaria. Volume 3. Mosca: Kolos, 1981, pp. 220-224.
4. Sharov A.N. Manuale sui “farmaci veterinari” per la tubercolosi (a cura di D.F. Osidze, dottore in scienze biologiche). Mosca: Kolos, 1981, pp. 192-201.
1. Un metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale, compresa l'identificazione degli animali che reagiscono alla tubercolina in allevamenti e cortili prosperi mediante test allergici pianificati, che differisce in quanto il sangue degli animali che reagiscono positivamente alla tubercolina viene esaminato mediante la reazione di lisi leucocitaria specifica (RSLL) utilizzando la tubercolina PPD come diagnostico per i mammiferi, PPD per gli uccelli e KAM.
2. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che nella diagnosi della tubercolosi nei bovini, la RSLL viene eseguita con PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli e allergene del complesso KAM da micobatteri atipici.
3. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che nella diagnosi della tubercolosi nei suini, la RSLL viene eseguita con PPD-tubercolina per i mammiferi e PPD-tubercolina per gli uccelli.
// 2341288 // 2443428
L'invenzione riguarda il campo della microbiologia veterinaria
L'invenzione riguarda il campo della biotecnologia
L'invenzione riguarda il campo della diagnostica di laboratorio e può essere utilizzata per la diagnosi espressa della mixomatosi nei conigli. L'essenza del metodo è che una specifica reazione di lisi leucocitaria (SLLR) viene eseguita utilizzando un vaccino antimixomatosi del ceppo B-82, viene calcolato l'indice RSLR e viene diagnosticata la mixomatosi se il suo valore è pari o superiore al 10%. Il risultato tecnico è lo sviluppo di un metodo che consente una diagnosi accelerata in una fase iniziale della malattia, oltre a identificare il decorso asintomatico della mixomatosi. 1 stipendio file, 2 tabelle.
L'invenzione riguarda la medicina veterinaria, in particolare metodi espressi per la diagnosi della mixomatosi.
Esistono vari metodi per diagnosticare la mixomatosi del coniglio, tra cui il rilevamento degli antigeni nella pelle colpita utilizzando anticorpi fluorescenti, il rilevamento degli anticorpi, gli immunocomplessi circolanti utilizzando reazioni di fissazione del complemento, reazioni di immunodiffusione, reazioni di neutralizzazione e test immunoenzimatici (Gunenko V.V. et al. O diagnosi e prevenzione della mixomatosi nei conigli, Veterinary Medicine, 1987, vol. 12, pp. 44-45). Gli svantaggi dei metodi noti sono l'intensità del lavoro, la presenza di attrezzature costose e l'incapacità di determinare la presenza del virus nei primi giorni dopo l'infezione.
Lo scopo dell'invenzione è ridurre il tempo necessario per rilevare l'agente causale della mixomatosi nel corpo animale. Il rilevamento è possibile a partire da tre a sei ore dopo l'infezione.
Il raggiungimento di questo obiettivo si basa sul fenomeno dell'attivazione immediata, dell'aumento della sensibilità e del sovraccarico delle cellule del sangue immunocompetenti - i leucociti - all'esposizione ripetuta all'esterno del corpo allo stesso antigene che era precedentemente entrato nel corpo.
Il metodo per diagnosticare la mixomatosi nei conigli è il seguente. Viene prelevato un campione di sangue dall'animale studiato. In una provetta contenente 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8%, aggiungere 0,1 ml del sangue da analizzare e una dose di lavoro dell'antigene - 0,05 ml di vaccino vivo secco contro la mixomatosi dei conigli del ceppo "B-82". diluizione di una dose immunizzante per ml di soluzione fisiologica. La provetta di controllo viene riempita con lo stesso volume, ma la soluzione fisiologica viene riempita senza antigene.
Le provette vengono incubate in termostato per due ore ad una temperatura di +37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere i globuli rossi, 0,02 ml di sangue dalle provette di controllo e da test vengono trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione di acido acetico al 3% e colorate con viola di genziana. Contare il numero di leucociti in entrambi i campioni nella camera di Goryaev e calcolare la velocità di reazione della lisi leucocitaria specifica (in percentuale) utilizzando la formula:
L'RSLL è considerato positivo quando è pari o superiore al 10%.
In caso di leucocitosi grave, quando è difficile contare i leucociti, il controllo del test e i campioni di sangue sperimentale vengono ulteriormente diluiti con soluzione fisiologica in un rapporto di 1:1 o 1:2.
Per determinare la dose di lavoro dell'antigene (vaccino vivo secco contro la mixomatosi del coniglio del ceppo B-82), sono stati selezionati dieci conigli sani. Il sangue di ciascun coniglio è stato diviso in tre campioni. 0,1 ml del sangue da analizzare sono stati aggiunti in tre provette con 0,05 ml di soluzione di citrato di sodio al 3%. Quindi, nella prima provetta sono stati aggiunti 0,05 ml dell'antigene - vaccino vivo secco contro la mixomatosi dei conigli del ceppo "B-82" in una diluizione di quattro dosi immunizzanti del farmaco per ml di soluzione fisiologica, nella seconda - 0,05 ml di vaccino in una diluizione di due dosi immunizzanti per ml di soluzione fisiologica, nella terza - 0,05 ml di vaccino in una diluizione di una dose immunizzante per ml di soluzione fisiologica.
Le provette sono state incubate per due ore ad una temperatura di +37°, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere i globuli rossi, 0,02 ml di sangue dalle provette di controllo e sperimentali sono stati trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione di acido acetico al 3% e colorate con viola di genziana. Successivamente, abbiamo contato il numero di leucociti in tutte le provette nella camera di Goryaev e calcolato la velocità di reazione della lisi specifica dei leucociti (in percentuale) utilizzando la formula:
dove Lk e Lo sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali.
L'RSLL per conigli sani dovrebbe essere inferiore al 10%. I risultati sono presentati nella tabella. 1.
Come si può vedere dalla Tabella 1, l'RSLL in tutti i campioni non ha superato il 10%, pertanto, come dose di lavoro dell'antigene, è più razionale assumere una diluizione del vaccino contro la mixomatosi del coniglio, una coltura viva secca proveniente dal Ceppo “B-82” in ragione di una dose immunizzante per ml di soluzione fisiologica.
Per la diagnosi retrospettiva di mixomatosi in un allevamento disfunzionale è stato esaminato il sangue dei conigli.
Sulla base dei risultati delle condizioni cliniche dei conigli, sono stati formati 4 gruppi di animali di 5 animali ciascuno (Tabella 2).
Il primo gruppo - conigli portatori del virus con una forma latente di mixomatosi - era in contatto con i pazienti, ma senza cambiamenti clinici. Alcuni presentavano evidenti aree glabre, indicanti una storia di noduli di mixoma.
Il secondo gruppo - pazienti clinicamente affetti da mixomatosi - comprendeva conigli malati con gonfiore delle palpebre, base delle orecchie, regione anogenetica, dorso, con formazioni nodulari limitate nella pelle delle orecchie, della testa e delle palpebre.
I conigli del terzo gruppo sono stati vaccinati per stabilire la dinamica della lisi dei leucociti dal momento in cui l'antigene mixomatoso è stato introdotto nel corpo dell'animale e per identificare le caratteristiche della reazione di lisi dei leucociti nelle persone vaccinate rispetto ai portatori del virus.
I conigli del quarto gruppo sono clinicamente sani e non infetti dal virus della mixomatosi; fungono da controllo.
La velocità della reazione specifica di lisi leucocitaria è stata determinata negli animali di tutti i gruppi. A questo scopo sono stati prelevati campioni di sangue dagli animali. Ciascun campione è stato suddiviso in sperimentale e di controllo. In una provetta contenente 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8%, sono stati contenuti 0,1 ml del sangue da analizzare e una dose di lavoro dell'antigene - 0,05 ml di un vaccino vivo secco contro la mixomatosi di conigli del ceppo "B-82". aggiunta diluizione di una dose immunizzante per ml di soluzione fisiologica. La provetta di controllo è stata riempita con lo stesso volume, ma con soluzione salina senza antigene.
Le provette sono state incubate in termostato per due ore ad una temperatura di +37°C, agitando ogni 30 minuti. Quindi, per distruggere i globuli rossi, 0,02 ml di sangue dalle provette di controllo e sperimentali sono stati trasferiti in provette con 0,4 ml di una soluzione di acido acetico al 3% e colorate con viola di genziana. Abbiamo contato il numero di leucociti in entrambi i campioni nella camera di Goryaev e calcolato la velocità di reazione della lisi leucocitaria specifica (in percentuale) utilizzando la formula:
dove Lk e Lo sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di controllo e sperimentali.
RSLL è stato considerato positivo quando il tasso era pari o superiore al 10%.
I risultati sono presentati nella Tabella 2.
| Tavolo 2 Indicatori RSLL in conigli con mixomatosi, vaccinati e sani |
||||
| Gruppi di porcellini d'India | RSLL, in% | Durata delle osservazioni in giorni | Diminuzione della % di lisi in media al giorno (%) | |
| all'inizio dello studio | alla fine dello studio | |||
| 1. Forma nascosta, portatori di virus. | 30-42 | 29-38 | 10 | 0,25 |
| 2. Clinicamente malato di mixomatosi | 62-77 | 60-71 | 10 | 0,40 |
| 3. Vaccinato con vaccino antimixomatosi | 29-36 | 21-28 | 10 | 0,80 |
| 4. Comandi intatti | 4-9 | 4-9 | 10 | 0 |
Come si può vedere dalla Tabella 2, il tasso di diminuzione della percentuale di lisi leucocitaria nei conigli vaccinati è 3,2 volte maggiore rispetto ai conigli portatori di virus con una forma latente di mixomatosi e 2 volte maggiore rispetto ai pazienti clinicamente malati. Nei pazienti con forma clinica di mixomatosi, la percentuale di lisi dei leucociti durante l'intero periodo di osservazione è stata molto elevata, raggiungendo il 60-77%.
Nel gruppo dei conigli vaccinati è stato riscontrato un forte aumento della percentuale di lisi leucocitaria al terzo giorno. Questa è la prova che il vaccino vivo secco contro la mixomatosi del coniglio del ceppo B-82 provoca uno stato di sensibilizzazione dei leucociti del sangue (responsabili dell'immunità) fino alla formazione di anticorpi specifici nel corpo.
La lisi dei leucociti nei conigli intatti durante l'intero periodo dell'esperimento non ha superato il 10%, vale a dire rientrava nei limiti normali.
Lo studio della RSLL consente di diagnosticare il decorso asintomatico della mixomatosi.
RECLAMO
1. Metodo per diagnosticare la mixomatosi nei conigli, caratterizzato dal fatto che viene effettuata una reazione specifica di lisi leucocitaria (SLLR) utilizzando un vaccino antimixomatosi del ceppo B-82, viene calcolato l'indice RSLR e viene diagnosticata la mixomatosi quando il suo valore è 10 % o più.
2. Metodo per la diagnosi della mixomatosi nei conigli secondo la rivendicazione 1, caratterizzato dal fatto che per la leucocitosi i campioni di sangue vengono diluiti con soluzione fisiologica in rapporto 1:1 o 1:2 prima della conta dei leucociti.
18.01.2009, 17:36
Ciao!
Si prega di consigliare una soluzione alla seguente situazione. Ho sempre avuto problemi con le cure odontoiatriche; non molto tempo fa ho dovuto togliere diversi denti. Septonest è stato utilizzato per alleviare il dolore. Dopo la somministrazione la pressione salì a 190 e la tachicardia iniziò a 150 battiti/min. (la mia pressione sanguigna è 110) Dopo l'iniezione di Tavegil, la mia pressione sanguigna ha cominciato a normalizzarsi. Il giorno successivo è stata osservata raucedine. Il medico ritiene che gli anestetici siano controindicati per me: ubestesina, ultracaina, septonest.
Dato che devo ancora curarmi i denti, cosa devo fare?
19.01.2009, 00:06
Ti sei già fatto curare i denti con l'anestesia prima di questo incidente? Anche precedenti iniezioni di anestetico sono state accompagnate da una simile reazione o è la prima volta? Interessato anche al tipo di anestesia somministrata e alla concentrazione di adrenalina nell'anestetico utilizzato e alla presenza di patologie del sistema cardiovascolare
Tale reazione può essere dovuta alla penetrazione dell'anestetico in un vaso sanguigno (con alcuni tipi di anestesia esiste la possibilità di penetrazione in un vaso sanguigno). Inoltre, tali sintomi possono essere una reazione all'adrenalina, che fa parte dell'anestetico.
Nella nostra azienda, i pazienti con intolleranza agli anestetici locali vengono inviati al reparto di odontoiatria chirurgica dell'ospedale, dove vengono esaminati e trattati in anestesia locale o anestesia generale.
19.01.2009, 09:51
Grazie per la risposta rapida! Prima di questo, la lidocaina veniva utilizzata durante gli interventi minori; recentemente mi sono tolto un neo sul viso utilizzandola. Lo ha tollerato bene, ma il dosaggio, a quanto pare, era piccolo.
Septonest è stato utilizzato due volte, la seconda che vi ho descritto, e la prima anche in odontoiatria, dopodiché la mia pressione sanguigna è salita a 140 e per 5-6 ore non sono riuscito a fermare l'emorragia dal dente.
Tra le malattie cardiovascolari c'è l'aritmia extrasistolica.
Il medico mi ha scritto controindicazioni: soluzione di ubestezin 4 u, soluzione di ultracaina 2 u, soluzione di septonest. Sfortunatamente non posso rispondere sulla concentrazione di adrenalina.
18.02.2009, 18:33
Ciao,
Ho fatto un test immunologico per gli anestetici e questi sono i risultati:
1. Ultracaina DS - 81 (11%)
2. Ultracaina DS forte - 61 (32%)
3. Arenalina - 64 (29%)
4. Lidocaina - 58 (36%)
5. Scandonest - 76 (16%)
6. Ubestezin forte - 58 (36%)
7. Septanest con andrenalina - 65 (28%)
Per grado di attività:
Risulta che questi farmaci non possono essere utilizzati (tutti >10%) durante l'anestesia in odontoiatria. Allora cosa puoi fare adesso?
18.02.2009, 21:12
Ti darò un suggerimento riguardo al valore dell'analisi:
"La reazione specifica di leucocitolisi ha mostrato una variazione del numero di leucociti rispetto al controllo 91 (100%) con i seguenti farmaci:
...
4. Lidocaina - 58 (36%)
...
lisi fino all'11% - debolmente positiva
lisi fino al 21%-40% - moderatamente positiva
lisi fino al 41%-100% - nettamente positiva
Prima di questo, la lidocaina veniva utilizzata durante gli interventi minori; recentemente mi sono tolto un neo sul viso utilizzandola. L'ho tollerato bene
Poliakova Olga Nikolaevna
MIGLIORARE LA DIAGNOSI PRECOCE
TUBERCOLOSI ANIMALE
02/06/02 – microbiologia veterinaria, virologia, epizootologia,
Micologia con micotossicologia e immunologia
A V T O R E F E R A T
Candidato di Scienze Veterinarie
Novocherkassk - 2011
Il lavoro è stato svolto presso l'Istituto scientifico statale
Veterinario per la ricerca zonale del Caucaso settentrionale
Istituto dell'Accademia Russa delle Scienze Agrarie
Consulente scientifico: Dottore in Scienze Veterinarie, prof
Dubovoy Boris Lavrentievich
Avversari ufficiali: Dottore in scienze veterinarie Popov M.A.
Dottore in Scienze Veterinarie,
Professore associato Khabuzov I.P.
Organizzazione leader: Istituto scientifico statale Pri-Caspio Zonale Scientifico-
Istituto di ricerca veterinaria
Accademia agricola russa
In una riunione del consiglio di tesi D 006.106.01 presso l'Istituto scientifico statale del Caucaso settentrionale Istituto veterinario di ricerca zonale dell'Accademia russa delle scienze agrarie.
346421, regione di Rostov, Novocherkassk, autostrada Rostov, 0
La tesi può essere trovata nella biblioteca dell'Istituto veterinario di ricerca scientifica zonale del Caucaso settentrionale dell'Accademia agricola russa - 346421, regione di Rostov, Novocherkassk, autostrada Rostov, 0.
Segretario Scientifico
consiglio di tesi, dottore in scienze biologiche SONO. Ermakov
DESCRIZIONE GENERALE DEL LAVORO
Rilevanza del problema. La lotta contro la tubercolosi animale è il problema più importante. L'eliminazione della tubercolosi animale non ha solo un significato veterinario, ma anche economico ed epidemiologico.
La cosa più importante nel sistema di misure antitubercolare è l’identificazione tempestiva degli animali infetti e la loro rimozione dall’allevamento come fonte dell’agente patogeno della tubercolosi.
A questo proposito, quando si diagnostica la tubercolosi, è particolarmente importante la differenziazione delle reazioni specifiche e non specifiche alla somministrazione intradermica della tubercolina.
Uno dei compiti più importanti nella prevenzione della tubercolosi negli animali da allevamento è migliorare la diagnostica, poiché i metodi esistenti non garantiscono il rilevamento di animali malati nella fase iniziale della malattia.
Il problema del miglioramento della diagnosi della tubercolosi animale è finalizzato a trovare un modo per la diagnosi preclinica precoce della malattia e a risolvere una serie di problemi associati alla diagnosi differenziale della tubercolosi, delle reazioni alla tubercolina causate dalla sensibilizzazione del corpo da parte di micobatteri atipici e specie aviarie . Pertanto, è necessario un metodo diagnostico che aiuti rapidamente a identificare un animale infetto e malato e prevenga la macellazione ingiustificata e ingiustificata di animali altamente produttivi.
Scopo dello studio - sviluppare un metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale e la differenziazione delle reazioni specifiche e non specifiche alla somministrazione intradermica di tubercolina.
Il raggiungimento dell'obiettivo prefissato è stato effettuato risolvendo i seguenti compiti:
1) determinare la dose di lavoro dell'allergene;
2) studiare la specificità e l'attività della reazione di lisi leucocitaria (LLLR) in vitro con allergeni: PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli e CAM;
3) studiare la possibilità di utilizzare la reazione di lisi leucocitaria specifica (SLLR) per differenziare le reazioni specifiche e non specifiche nelle mucche che hanno risposto positivamente alla tubercolina.
Novità scientifica.È stato sviluppato un metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi che consente di identificare un animale infetto entro 24 ore dall'infezione e di differenziare le reazioni specifiche alla tubercolina da quelle non specifiche. L'uso di una reazione specifica di lisi leucocitaria con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e CAM ha permesso di identificare la sensibilizzazione non specifica del corpo causata da micobatteri atipici.
La novità scientifica è confermata dal brevetto per l’invenzione n. 2366454 “Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale”.
Principali provvedimenti presentati a difesa:
1. Diagnosi precoce della tubercolosi animale.
2. Differenziazione delle reazioni alla tubercolina.
Approvazione del lavoro. I materiali principali della tesi sono stati riportati e discussi alle conferenze scientifiche e pratiche annuali dell'Istituto statale federale di istruzione professionale superiore "Università agraria statale del Don", dell'Istituto veterinario di ricerca zonale del Caucaso settentrionale dell'Accademia russa delle scienze agrarie nel 2006 -2010. e a conferenze scientifiche e pratiche tutta russe e internazionali. Makhachkala, Kazan, Novocherkassk.
Implementazione dei risultati della ricerca. I risultati della ricerca vengono utilizzati durante le lezioni e lo svolgimento di laboratori e lezioni pratiche sull'epizootologia presso l'Istituto statale federale di istruzione professionale superiore "Università agraria statale del Don", vengono testati nel laboratorio veterinario regionale, SBBZH Novocherkassk, SPK "Rassvet", Matveevo -Regione di Kurgan, OJSC "Yuzhnoye", distretto di Salsky e SEC "Sovetinsky", distretto di Neklinovsky, regione di Rostov.
Pubblicazioni sull'argomento. Sulla base dei materiali del lavoro di tesi, sono stati pubblicati 15 articoli scientifici, tre dei quali in una pubblicazione sottoposta a revisione paritaria raccomandata dalla Commissione di attestazione superiore della Federazione Russa e un brevetto russo per un metodo diagnostico.
Significato pratico. Il materiale scientifico ottenuto ci consente di rilevare un animale infetto nel primo giorno dopo l'infezione e di distinguere le reazioni positive alla tubercolina non specifiche causate da micobatteri atipici e aviari da quelle specifiche, il che è di grande importanza pratica per la conservazione degli animali con reazioni alla tubercolina non specifiche. L'uso dell'RSLL è raccomandato nella diagnosi retrospettiva della tubercolosi e nella diagnosi differenziale delle reazioni specifiche e non specifiche alla somministrazione di PPD-tubercolina nei mammiferi con un test intradermico della tubercolina.
Struttura e ambito di lavoro. La tesi è presentata su 153 pagine di testo informatico, consiste in un'introduzione, una revisione della letteratura, una ricerca propria e la sua discussione, conclusioni, suggerimenti pratici e un elenco di bibliografia. La tesi contiene 28 tavole. L'elenco dei riferimenti comprende 264 fonti, di cui 58 autori stranieri.
2. RICERCA PROPRIA
Materiali e metodi di ricerca. Il lavoro è stato svolto presso il Dipartimento di Epizootiologia dell'Istituto Educativo Statale Federale di Istruzione Professionale Superiore "Università Agraria dello Stato del Don", presso la fattoria didattica "Donskoye" (Università Autonoma dello Stato del Don, villaggio Persianovsky), nel laboratorio dello Stato Istituto scientifico SKZNIVI, nel distretto industriale della città di Novocherkassk, nelle fattorie dei distretti Matveevo-Kurgan, Neklinovsky e Salsky della regione di Rostov.
Per gli esperimenti sono stati selezionati animali (bovini, suini, cani e conigli) i cui parametri fisiologici ed ematologici rientravano nei limiti normali. Sono stati formati cinque gruppi di animali sperimentali e uno di controllo. È stato formato un gruppo di controllo per il confronto con il gruppo sperimentale per dimostrare la specificità della reazione. Ciascun gruppo sperimentale e di controllo era composto da cinque animali.
Durante il lavoro sono stati studiati i parametri ematologici del sangue fresco (numero di leucociti) e la reazione della lisi specifica dei leucociti nei bovini, suini, cani e conigli.
Gli animali dei gruppi sperimentali sono stati divisi in cinque gruppi a seconda della dose di vaccino somministrato per determinare l'intensità della reazione. Dopo che agli animali dei gruppi sperimentali sono stati somministrati micobatteri vivi del vaccino BCG e agli animali dei gruppi di controllo il vaccino contro la brucellosi pc.82, è stato prelevato il sangue. Ad ogni prelievo il sangue degli animali è stato suddiviso in campioni sperimentali e di controllo. Campioni di controllo - sangue con l'aggiunta di soluzione di citrato di sodio al 3,8% e soluzione fisiologica, campioni sperimentali - sangue con l'aggiunta di soluzione di citrato di sodio al 3,8% con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e CAM.
Nei campioni sperimentali e di controllo è stato contato il numero dei leucociti per determinare successivamente la percentuale di lisi leucocitaria utilizzando la formula.
La selezione della dose di lavoro degli allergeni è stata effettuata con il sangue di animali i cui parametri fisiologici ed ematologici rientravano nei limiti normali, scegliendo una dose alla quale la percentuale di lisi leucocitaria non era superiore a 10. La ricerca presunta di un allergene era in una dose da 0,05 a 0,15 ml.
Per impostare la reazione di lisi specifica dei leucociti, abbiamo utilizzato il metodo esistente per determinare il numero di leucociti nel sangue. È stato contato il numero di leucociti nei campioni sperimentali e di controllo e la percentuale di lisi dei leucociti è stata calcolata utilizzando la formula.
0,1 ml del sangue in esame e una dose di lavoro dell'allergene di 0,05 ml sono stati aggiunti al pozzetto del test della compressa contenente 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8%. Il pozzetto di controllo con il sangue è stato riempito nello stesso volume, ma con soluzione salina al posto dell'allergene.
I campioni di sangue con tubercolina, CAM e soluzione salina sono stati incubati in un termostato per 2 ore a +37°C, agitando leggermente periodicamente. Quindi, per distruggere i globuli rossi, 0,02 ml di sangue sono stati prelevati dal controllo e da tre pozzetti sperimentali e trasferiti nei pozzetti di una piastra contenente 0,4 ml di liquido di Turk. Il numero di leucociti è stato contato (nella camera di Goryaev) in tutti i campioni.
Quindi la percentuale di lisi dei leucociti è stata calcolata utilizzando la formula:
RSLL = Lk-Lo * 100%
Dove Lk e Lo sono il numero assoluto di leucociti nei campioni di sangue di controllo e sperimentali durante un campionamento una tantum.
RSLL è stato considerato positivo quando il tasso era pari o superiore al 10%.
Durante la modellazione del processo di tubercolosi, per determinare l'attività e la specificità della reazione, sono stati formati sei gruppi di animali: cinque sperimentali e uno di controllo.
Ad ogni gruppo sperimentale è stata somministrata una certa dose di micobatteri vivi provenienti dal vaccino BCG. Agli animali del gruppo di controllo è stata somministrata una dose di vaccino antibrucellosi pz. 82. Al momento della somministrazione e ogni 24 ore, dagli animali è stato prelevato sangue, suddiviso in campioni con l'aggiunta di una soluzione di citrato di sodio al 3,8% e agenti diagnostici per determinare la percentuale di lisi leucocitaria, studiare la sensibilità, l'attività e la specificità della reazione.
Negli allevamenti di mucche che hanno reagito alla tubercolina, il sangue è stato esaminato utilizzando una specifica reazione di lisi leucocitaria. Il sangue raccolto è stato suddiviso in campioni sperimentali con l'aggiunta di PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli, KAM ed un campione di controllo con soluzione salina. È stato contato il numero di leucociti in tutti i campioni ed è stato calcolato l'indice RSLL.
Dopo aver studiato la reazione della lisi specifica dei leucociti, sono stati effettuati un controllo e una macellazione diagnostica delle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina e un esame veterinario e sanitario post mortem delle carcasse e degli organi interni per rilevare i cambiamenti patologici caratteristici della malattia e per studiare l'eziologia dei test alla tubercolina che causano reazioni positive in reazioni non specifiche.
Abbiamo preso in considerazione quale percentuale di test positivi alla tubercolina coincideva con i risultati dell'RSLL, con cambiamenti patologici caratteristici della tubercolosi. Qual è la proporzione della coincidenza di test positivi alla tubercolina, RSLL e cambiamenti patologici non caratteristici della tubercolosi? Quanti campioni positivi alla tubercolina coincidono in RSLL con PPD-tubercolina per i mammiferi, con PPD-tubercolina per gli uccelli e KAM. Quanti test positivi alla tubercolina coincidono con l'echinococcosi accertata durante un esame patologico delle carcasse di mucche uccise a fini diagnostici.
3. RISULTATI DELLA RICERCA
3.1. Determinazione della dose di lavoro di PPD–tubercolina per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e KAM
La dose di lavoro degli allergeni diagnostici è stata testata su sangue citrato di animali i cui parametri fisiologici ed ematologici rientravano nei limiti normali. L'allergene è stato utilizzato in dosi di 0,05 ml, 0,1 ml e 0,15 ml e la soluzione fisiologica è stata prelevata negli stessi volumi.
La dose di lavoro non deve causare la distruzione dei leucociti e la sensibilizzazione all'allergene, all'antigene e ai farmaci diagnostici.
La tabella mostra il rapporto volumetrico di tubercoline e CAM con sangue e soluzione di citrato di sodio al 3,8%.
Nei campioni sperimentali e di controllo è stato contato il numero di leucociti e la percentuale di lisi leucocitaria è stata calcolata utilizzando la formula.
La reazione di lisi leucocitaria specifica (SLLR) in tutti i campioni di sangue con allergeni nei bovini, suini e conigli ha raggiunto fino al 3% e nei cani fino al 7%. Pertanto, è più economico utilizzare come dose di lavoro una dose di 0,05 ml di allergene (tubercolina o CAM), perché Il suo RSLL era inferiore rispetto a quello ottenuto con una dose di 0,15 ml. E il suo valore era quasi lo stesso per PPD - tubercolina per i mammiferi, PPD - tubercolina per gli uccelli e KAM.
La dose operativa di tubercolina e CAM per RSLL era di 0,05 ml, poiché si è rivelata economica e non ha causato la distruzione dei leucociti.
Tabella 1.
Determinazione della dose di lavoro di tubercolina e CAM.
| № campioni | Soluzione al 3,8%. Citrato di sodio | Sangue | Campioni sperimentali con PPD ml., PPD pt. e KAM | Controllare i campioni con soluzione salina |
| 1 | 0,05 | 0,1 | 0,05 | 0,05 |
| 2 | 0,05 | 0,1 | 0,1 | 0,1 |
| 3 | 0,05 | 0,1 | 0,15 | 0,15 |
3.2. Studio della specificità e dell'attività di una reazione specifica
lisi dei leucociti
3.2.1. Studio della specificità e dell'attività delle RSLL nel sangue dei grandi
bestiame
L'esperimento è stato condotto presso la fattoria didattica Donskoye, distretto di Oktyabrsky, regione di Rostov.
Per la ricerca sono stati selezionati trenta capi di bovini giovani di età compresa tra quattro e sei mesi.
Sono stati formati cinque gruppi di animali sperimentali e uno di controllo. Cinque animali sono stati presi in ciascun gruppo.
Agli animali dei gruppi sperimentali sono stati iniettati micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG in dosi vaccinali: uno, tre, cinque, sette, dieci. Ai tori del gruppo di controllo è stata somministrata una dose di vaccino contro la brucellosi da pz. 82. Successivamente è stato prelevato il sangue da tutti gli animali per essere analizzato mediante la reazione di lisi leucocitaria specifica (SLLR).
I leucociti sensibilizzati dai micobatteri del vaccino BCG nell'organismo acquisiscono una maggiore sensibilità all'antigene e, quando incontrano un allergene simile all'esterno del corpo (in vitro), vengono lisati.
Il giorno della somministrazione del vaccino BCG agli animali, il numero di leucociti (in media per il gruppo) fuori dal corpo nei campioni di sangue quando interagivano con la tubercolina PPD per i mammiferi, la tubercolina PPD negli uccelli e la CAM era quasi lo stesso, che indica l'assenza di leucociti sensibilizzati dai micobatteri BCG.
24 ore dopo la somministrazione del vaccino BCG, il numero di leucociti (media del gruppo) nei campioni di sangue extracorporei con tubercolina PPD per i mammiferi è diminuito a causa della loro lisi causata dall'interazione delle cellule sensibilizzate con l'allergene. Quando ai tori è stata somministrata una dose immunitaria del vaccino BCG, il numero di leucociti era 9,0 10 9
/l (Tabella n. 2), tre dosi – 8,6 10 9
/l, cinque dosi – 8,7 10 9
/l, sette dosi – 8,6 10 9
/l, dieci dosi – 7,1 10 9
/l (p
Nei campioni di sangue con soluzione salina, PPD-tubercolina per uccelli e CAM, il numero dei leucociti è aumentato dopo 24 ore sotto l'influenza del vaccino BCG sul corpo. Studiando campioni di sangue con soluzione salina fuori dal corpo di animali a cui era stata iniettata una dose di vaccino BCG, il numero di leucociti (in media per il gruppo) era 10,5 10 9
/l, tre dosi – 10,2·10 9
/l, cinque dosi – 10,9 10 9
/l, sette dosi – 12,0 10 9
/l, dieci dosi – 12,0 10 9
/l. La percentuale di lisi leucocitaria nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM era assente. L'aumento è associato alla reazione dell'organismo al vaccino somministrato ed è accompagnato da leucocitosi. I leucociti sensibilizzati al BCG non interagiscono in vitro con un allergene non correlato. Ciò indica la specificità di RSLL.
In tutti i gruppi sperimentali di animali, il numero di leucociti nei campioni di sangue con soluzione salina, tubercolina PPD per uccelli e CAM ha raggiunto il livello massimo dopo 48 ore. Il numero di leucociti (in media per il gruppo) nei campioni contenenti soluzione salina, PPD-tubercolina per uccelli e CAM era di 11,3 10 con l'introduzione di una dose immunitaria di BCG 9 /l, tre dosi – 11,6·10 9 /l, cinque dosi – 12,1·10 9 /l, sette dosi – 13,3 10 9 /l, dieci dosi – 14,5 10 9 /l. E dopo 72 ore cominciò lentamente a diminuire.
Tavolo 2.
Il numero di leucociti e indicatori RSLL nel sangue dei bovini sensibilizzati con 1 dose di vaccino BCG.
| Tempo dopo la somministrazione di micobatteri vivi BCG (ore) | Numero di leucociti | Numero di leucociti | RSLL% |
||||
| Con | con PPDml. | Con | Con | con PPDml. | con PPDpt. | con KAM |
|
| Al momento della sensibilizzazione | 9,2±0,10 | 9,1±0,07 | 9,2±0,09 | 9,1±0,06 | 1 | 0 | 1 |
| 24 | 10,5±0,10 | 9,0±0,11 | 10,5±0,11 | 10,5±0,07 | 14 | 0 | 0 |
| 48 | 11,3±0,17 | 8,2±0,17 | 11,1±0,04 | 11,1±0,06 | 27 | 2 | 2 |
| 72 | 10,9±0,06 | 8,4±0,09 | 10,8±0,10 | 10,9±0,06 | 23 | 1 | 0 |
| 96 | 10,7±0,07 | 8,7±0,04 | 10,6±0,04 | 10,7±0,07 | 19 | 1 | 0 |
| 120 | 10,2±0,05 | 8,9±0,07 | 10,1±0,04 | 10,0±0,03 | 13 | 1 | 2 |
| 144 | 9,7±0,09 | 9,0±0,08 | 9,6±0,08 | 9,5±0,04 | 7 | 1 | 2 |
| 168 | 9,1±0,04 | 9,2±0,03 | 9,1±0,03 | 9,1±0,04 | -1 | 0 | 0 |
Μ ± m – valore medio ± errore della media aritmetica
Con un aumento della dose immunitaria di BCG, aumenta il numero di leucociti sensibilizzati nei campioni di sangue e quando interagiscono in vitro con la tubercolina PPD per i mammiferi, vengono distrutti, di conseguenza aumenta la percentuale di lisi dei leucociti.
Dopo 48 ore in vitro, nei campioni di sangue con tubercolina PPD per mammiferi, si è verificata una diminuzione del numero di leucociti a seguito della lisi. Quando agli animali è stata somministrata una dose immunitaria di BCG, il numero di leucociti dopo ripetuti incontri con l'allergene in vitro (in media per il gruppo) era di 8,2 10 9 /l, tre dosi – 8,0 10 9 /l, cinque dosi – 7,9 10 9 /l, sette dosi – 7,7 10 9 /l, dieci dosi – 7,5 10 9 /l. La reazione della lisi specifica dei leucociti in vitro è stata determinata per una dose immunitaria per animale - 27%, tre dosi - 31%, cinque dosi - 35%, sette dosi - 42%, dieci dosi - 48%. Dopo 72 ore, la lisi dei leucociti ha raggiunto il 23% con una dose immunitaria per animale, il 28% con tre dosi, il 31% con cinque dosi, il 37% con sette dosi e il 41% con dieci dosi.
Dopo 72 ore, la reazione di lisi specifica dei leucociti è diminuita in tutti i gruppi sperimentali di animali.
Il numero di leucociti nel sangue dei bovini nei giorni successivi (3-7 giorni) è diminuito ed è tornato al valore iniziale (annotato il giorno della vaccinazione con il vaccino BCG) con l'introduzione di una, tre dosi il 6° giorno ( 144 ore), cinque, sette dosi il 7° giorno (168 ore) e dieci dosi l'8° giorno (192 ore).
Nei campioni di sangue di toro contenenti PPD-tubercolina per uccelli e CAM, gli indicatori RSLL sono risultati negativi in tutti i giorni degli esperimenti e non è stata riscontrata lisi dei leucociti. I risultati indicano la specificità della reazione.
Si osserva un'elevata percentuale di lisi leucocitaria nei campioni di sangue animale contenenti tubercolina PPD per i mammiferi e la percentuale di lisi leucocitaria nei campioni di sangue contenenti tubercolina PPD per uccelli e CAM non supera il 3%, ovvero è inferiore alla soglia preso in considerazione. Poiché i leucociti sensibilizzati dai micobatteri BCG vengono distrutti in vitro sotto l'influenza di uno specifico allergene correlato.
L'attività di RSLL è caratterizzata dal fatto che con l'aumento della dose di vaccino contro i micobatteri vivi pz. BCG da 0,05 mg a 0,50 mg per animale, aumenta il numero di leucociti sensibilizzati e aumenta la percentuale di lisi leucocitaria.
Con un aumento della percentuale di lisi dei leucociti, a seconda della dose vaccinale somministrata del vaccino BCG, si osserva un aumento dell'intensità e della durata della reazione specifica di lisi dei leucociti.
Studi condotti con l'introduzione di vaccini contro micobatteri vivi pz. Il BCG nei tori ha permesso di stabilire la specificità e l'attività della reazione di lisi specifica dei leucociti, necessaria per la diagnosi differenziale delle reazioni specifiche ad un altro allergene; la reazione di lisi specifica dei leucociti con PPD-tubercolina per i mammiferi, PPD- tubercolina per uccelli e CAM è risultato negativo, poiché il numero di leucociti nei campioni di sangue sperimentali con tubercolina e CAM, così come nei campioni di controllo con soluzione salina, era quasi lo stesso.
L'assenza di reazione di lisi leucocitaria negli animali vaccinati con il vaccino contro la brucellosi pc.82 con PPD-tubercolina per i mammiferi indica anche la specificità della reazione di lisi leucocitaria, poiché i campioni di sangue contengono leucociti sensibilizzati da un altro allergene non correlato.
3.2.2. Studio della specificità e dell'attività delle RSLL nel sangue suino
con l’introduzione del vaccino BCG contro i micobatteri vivi
Per l'esperimento sono stati selezionati 30 capi di suinetti di tre mesi appartenenti a cittadini della città di Novocherkassk.
I suinetti sono stati divisi in cinque gruppi di 5 animali ciascuno, ai quali sono state iniettate per via sottocutanea una, due, tre, quattro e cinque dosi di vaccino BCG.
Il numero di leucociti (media del gruppo) nei suini il giorno della somministrazione del vaccino BCG contro i micobatteri in tutti i campioni variava da 10,7 a 10,9 10 9 /menzogna. rientrava nei limiti fisiologici.
24 ore dopo la somministrazione del vaccino, il numero di leucociti nei campioni di sangue con soluzione salina, tubercolina PPD per uccelli e CAM era approssimativamente lo stesso. Con l'introduzione di una dose immunitaria 11,8 - 11,9 10 9 , due dosi 13,2 10 9 , tre dosi 14,8 - 14,9 10 9 , quattro dosi 15,4 - 15,5 10 9 , cinque dosi 15,8 - 15,9 10 9 , Perché i leucociti sensibilizzati non reagiscono con la soluzione salina e gli allergeni non correlati e non avviene la lisi dei leucociti.
Nei campioni di sangue di suinetti vaccinati con BCG, nonostante la leucocitosi nel corpo, nei campioni di sangue in vitro quando interagiscono con la tubercolina PPD per i mammiferi, il numero di leucociti ha iniziato a diminuire dopo 24 ore a causa della lisi delle cellule sensibilizzate dopo aver incontrato un allergene correlato. Quando ai suinetti è stata somministrata una dose immunitaria del vaccino BCG, il numero di leucociti in vitro (in media per il gruppo) è stato di 10,5 10 9
/l, due, tre, quattro dosi – 10,0 10 9
/l, cinque dosi - 9,9 10 9
/l (p
Dopo 48 ore, il numero di leucociti nei campioni di sangue con tubercolina PPD per mammiferi in vitro ha raggiunto il valore minimo. Quindi il numero dei leucociti è aumentato. La lisi dei leucociti è stata del 33%, 41%, 47%, 52%, 55% a seconda delle dosi somministrate. Dopo 48 ore, nei campioni sperimentali è stata osservata la percentuale più alta di lisi leucocitaria.
Nei campioni di sangue contenenti soluzione salina, PPD-tubercolina per uccelli e CAM, il numero di leucociti è aumentato e ha raggiunto il suo valore massimo 48 ore dopo la somministrazione del vaccino BCG ai suinetti. Con un aumento della dose del vaccino BCG somministrato, il numero di leucociti nei campioni di sangue contenenti soluzione salina, tubercolina PPD per uccelli e CAM è aumentato, cioè un aumento della dose di micobatteri BCG è stato accompagnato da un aumento della leucocitosi in Nell'organismo, quindi, è aumentato il numero di leucociti nei campioni di sangue con allergeni aspecifici (campioni sperimentali) e con soluzione salina (campione di controllo). Successivamente (dopo 72 ore) in questi campioni di sangue è stata osservata una diminuzione del numero di leucociti.
Nei suini vaccinati, indicatori RSLL positivi nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi sono stati rilevati 24-120 ore dopo la somministrazione di una, due, tre, quattro dosi e dopo 24-144 ore con cinque dosi di vaccinazione del vaccino BCG.
Negli esperimenti condotti sui suinetti, il numero di leucociti nei campioni di sangue contenenti PPD-tubercolina per uccelli e CAM era simile a quello dei campioni con soluzione salina. L'RSLL nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e KAM è risultato negativo, il che conferma la specificità dell'RSLL con tubercolina PPD per i mammiferi.
Nei suini vaccinati con vaccino contro la brucellosi pz. 82, il numero di leucociti nei campioni di sangue con tubercolina e soluzione salina era quasi lo stesso, quindi RSLL con PPD - tubercolina per i mammiferi, PPD - tubercolina per gli uccelli e KAM era negativo, perché i leucociti sensibilizzati da un altro allergene non reagiscono con le soluzioni saline e gli allergeni non correlati e non avviene la lisi dei leucociti. Ciò indica la specificità della reazione.
3.2.3. Studio della specificità e dell'attività delle RSLL nel sangue dei cani
con l’introduzione del vaccino BCG contro i micobatteri vivi
Sono stati condotti esperimenti su cani appartenenti a cittadini della città di Novocherkassk, nella regione di Rostov.
Sono stati formati cinque gruppi di animali sperimentali e uno di controllo. C'erano 5 cani in ciascun gruppo.
Per condurre la ricerca, ai cani sono state iniettate per via sottocutanea una (0,05 ml), due (0,1 ml), tre (0,15 ml), quattro (0,2 ml) e cinque (0,25 ml) dosi di vaccino BCG. Agli animali del gruppo di controllo è stata somministrata una dose di vaccino contro la brucellosi. 82.
Il giorno della somministrazione del vaccino BCG, il numero di leucociti in tutti i campioni di sangue dei gruppi in vitro era quasi lo stesso.
24 ore dopo la somministrazione di micobatteri BCG agli animali durante l'interazione del sangue con la soluzione fisiologica esterna al corpo, il numero di leucociti (in media per il gruppo) era 6,1·10 9 /l con una dose di vaccino BCG, 6,9· 10 con due dosi 9 /l, tre dosi - 7,4 10 9 /l, quattro dosi - 7,7 10 9 /l, cinque dosi - 8,3 10 9 /l. Nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM, sono stati ottenuti dati simili a quelli ottenuti nei campioni di sangue con soluzione salina. È stata rilevata la leucocitosi, poiché il corpo reagisce alla somministrazione del vaccino BCG e i leucociti sensibilizzati non interagiscono con antigeni non correlati.
Dopo ulteriori studi, si è riscontrato che dopo 48 ore, il numero di leucociti (in media per il gruppo) nei campioni di sangue in vitro contenenti soluzione salina ha raggiunto il suo livello massimo, con l'introduzione di una dose immunitaria del vaccino - 6,2·10 9/l; due dosi - 7,4·10 9 /l; tre dosi - 8,5·10 9 /l; quattro dosi - 9,5·10 9 /l; cinque dosi - 10,8·10 9 /l. Il numero di leucociti nei campioni di sangue contenenti soluzione salina era due o più volte superiore al numero di leucociti il giorno della somministrazione del vaccino. Poi il numero dei globuli bianchi ha cominciato ad aumentare. L'estinzione della reazione è associata alla produzione di normali anticorpi da parte del sistema immunitario.
In media per il gruppo, il numero di leucociti nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per i mammiferi diminuisce e raggiunge il minimo dopo 48 ore con l'introduzione di una dose di BCG - 4,6·10 9 /l; due dosi - 3,8·10 9 /l; tre dosi - 3,4·10 9 /l; quattro dosi - 3,3·10 9 /l; cinque dosi - 3,1·10 9 /l. La lisi dei leucociti nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi è stata la più elevata e ammontava al 26% con una dose di BCG, al 49% con due dosi, al 60% con tre dosi, al 65% con quattro dosi e al 71% con cinque dosi. Maggiore è la dose di vaccino BCG somministrato, maggiore è la percentuale di lisi dei leucociti. Quando grandi dosi dell'agente patogeno vengono introdotte nel corpo, si verifica una grave allergia e i leucociti più sensibilizzati vengono distrutti quando incontrano un antigene correlato (specifico), come si può vedere dagli esperimenti nella RSLL all'esterno del corpo.
Si è riscontrato che dopo 72 ore il numero di leucociti (in media per il gruppo) nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi è aumentato, mentre nei campioni con soluzione salina con tubercolina PPD per uccelli e CAM è diminuito. La percentuale di lisi leucocitaria dopo 72 ore nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per mammiferi è pari al 23% con una dose immunitaria, 39% con due dosi, 50% con tre dosi, 60% con quattro dosi e 64% con cinque dosi.
Indicatori positivi della reazione di lisi leucocitaria specifica (SLLR) in campioni di sangue contenenti tubercolina PPD per i mammiferi sono stati notati con l'introduzione di una dose di vaccino BCG dopo 24-96 ore, due dosi dopo 24-120 ore, tre dosi dopo 24 –120 ore, quattro dosi 24 – 168 ore, cinque dosi 24 – 240 ore.
L'attività della reazione di lisi specifica dei leucociti è caratterizzata dal fatto che con un aumento della dose somministrata di vaccino contro i micobatteri vivi pz. Il BCG aumenta l'indice RSLL e la durata della sensibilizzazione dei leucociti negli animali.
La reazione della lisi specifica dei leucociti nei campioni di sangue di gruppi sperimentali contenenti PPD-tubercolina per uccelli e CAM è stata negativa e variava fino al 3%.
Nei cani vaccinati con una dose di vaccino antibrucellosi, la reazione della lisi leucocitaria specifica nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e CAM è risultata negativa. Il numero di leucociti nei campioni di sangue sperimentali e di controllo con tubercolina, CAM e soluzione salina era quasi lo stesso, il che indica la specificità della reazione di lisi dei leucociti, poiché nei campioni di sangue i leucociti sensibilizzati non interagiscono con antigeni non correlati.
3.2.4. Studio della specificità e dell'attività delle RSLL nel sangue di coniglio
con l’introduzione del vaccino BCG contro i micobatteri vivi
Per gli esperimenti comportamentali sono stati selezionati 15 conigli e divisi in tre gruppi.
Dopo aver somministrato da cinque a dieci dosi di vaccino contro il micobatterio BCG ai conigli nei gruppi sperimentali e una dose di vaccino antibrucellosi pz. Il sangue è stato prelevato da 82 animali del gruppo di controllo e diviso in campioni.
Dallo studio è emerso che il giorno della somministrazione del vaccino, il numero di leucociti in tutti i gruppi era pari a 7,9–8,8·10 9 /l.
Nei campioni di sangue di conigli vaccinati con cinque dosi di micobatteri vivi del vaccino BCG, con soluzione fisiologica al momento della somministrazione del vaccino, il numero di leucociti in media per il gruppo era di 8,8·10 9 /l. Successivamente il numero dei leucociti aumenta e dopo 24 ore era di 11,3·10 9 /l, e dopo 48 ore ha raggiunto il livello massimo di 16,1·10 9 /l. Ciò è dovuto all'aumento dell'attività funzionale degli organi ematopoietici causata dagli antigeni che entrano nel corpo: i micobatteri BCG.
Quando il sangue esterno al corpo interagiva con la tubercolina PPD nei mammiferi, il contenuto più basso di leucociti veniva osservato dopo 24 ore. La reazione della lisi specifica dei leucociti dopo 24 ore è del 58%, dopo 48 ore - 71,4%, 72 ore - 70,5%. La percentuale massima di lisi leucocitaria è stata registrata dopo 48 ore, poi la percentuale di lisi leucocitaria è diminuita. RSLL positivo con PPD-tubercolina per i mammiferi è stato osservato dopo 24 - 96 ore.
Il numero di leucociti nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM era simile a quello dei campioni di sangue con soluzione salina. La reazione di lisi specifica dei leucociti con PPD-tubercolina per uccelli e CAM è stata negativa (da -1% a 1%), il che indica la specificità della reazione, poiché i leucociti sensibilizzati non interagiscono con allergeni estranei.
Gli studi hanno stabilito che con l'introduzione di dieci dosi di micobatteri vivi del vaccino BCG, dopo 24 e 48 ore il numero più piccolo di leucociti in vitro era nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi. Una diminuzione del numero di leucociti nei campioni di sangue con un antigene omogeneo PPD-tubercolina per i mammiferi non può essere attribuita alla leucopenia, poiché essenzialmente la lisi dei leucociti avviene all'esterno del corpo e la leucolisi è causata da una maggiore distruzione dei leucociti sensibilizzati quando esposti ad uno specifico allergene.
È stato determinato che quando il sangue interagisce con la tubercolina PPD nei mammiferi, la percentuale di lisi dei leucociti dopo 24 ore era del 56%, dopo 48 ore - 72%, dopo 72 ore - 41%.
La conta dei globuli bianchi iniziò quindi ad aumentare e tornò alla normalità dopo 672 ore.
Nei campioni di sangue con soluzione salina dopo dieci dosi di vaccino BCG, il numero di leucociti ha cominciato ad aumentare dopo 24 ore. Il numero più alto di leucociti in vitro è stato registrato 96 ore dopo la somministrazione del vaccino BCG. La conta dei globuli bianchi è poi diminuita lentamente ed è tornata alla normalità (conta dei globuli bianchi il giorno della somministrazione del vaccino) dopo 672 ore.
Quando si aumenta la dose di vaccino contro i micobatteri vivi pz. BCG, aumenta il numero di leucociti sensibilizzati, aumenta la percentuale di lisi leucocitaria e la durata della reazione, questo caratterizza l'attività della reazione specifica di lisi leucocitaria.
I risultati nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli e CAM erano quasi gli stessi dei campioni di sangue contenenti soluzione salina, quindi non c'era RSLL, che indica la specificità della reazione, poiché i leucociti non reagiscono con allergeni estranei.
Vaccinati con una dose di vaccino antibrucellosi, pz. 82 conigli RSLL con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli, CAM sono risultati negativi, poiché nel sangue non erano presenti leucociti sensibilizzati a questi allergeni diagnostici. Il numero di leucociti nei campioni di sangue contenenti tubercolina e soluzione salina negli animali era quasi lo stesso.
Mancanza di reazione di lisi leucocitaria nei campioni di sangue di animali vaccinati con vaccino antibrucellosi pz. 82 contenente PPD-tubercolina per mammiferi indica la specificità della reazione, poiché gli allergeni diagnostici non reagiscono con i leucociti sensibilizzati di un altro allergene.
3.3. Studio della possibilità di utilizzare RSLL per differenziare reazioni non specifiche nelle vacche che hanno reagito positivamente
per la tubercolina
3.3.1. Studio del sangue RSLL nelle mucche che hanno reagito positivamente
per la tubercolina nella regione di Matveevo-Kurgan
La diagnosi di tubercolosi mediante la reazione specifica di lisi leucocitaria (SLLR) in condizioni industriali è stata effettuata presso il complesso agricolo Rassvet nel distretto di Matveevo-Kurgan, nella regione di Rostov.
Il 27 novembre 2006, presso il macello di Rassvet, è stata effettuata una commissione di controllo e macellazione diagnostica di sette mucche che hanno reagito alla tubercolina, seguita da un esame veterinario e sanitario post mortem.
Prima della macellazione, veniva prelevato il sangue dalle mucche per studiare la reazione specifica di lisi leucocitaria (SLLR).
Dallo studio è emerso che in tre mucche (43%) la reazione della lisi leucocitaria specifica con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e CAM era negativa, vale a dire la percentuale di lisi dei leucociti era dell'1% - 4%.
In quattro mucche (57%), la lisi dei leucociti nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi è stata del 27%, 29%, 36%, 71%, mentre la RSLL con tubercolina PPD per gli uccelli e con CAM è risultata negativa.
Durante un esame veterinario e sanitario post mortem di sette mucche che avevano reagito alla tubercolina, solo quattro (57%) avevano indicatori RSLL positivi nei campioni di sangue con tubercolina PPD per i mammiferi. Due (29%) di loro hanno mostrato cambiamenti nei linfonodi caratteristici della tubercolosi: uno nei linfonodi sottomandibolari, il secondo nei linfonodi sopradarteriosi. Nelle carcasse di due mucche uccise (29%) con una reazione positiva al test della tubercolina e indicatori RSLL positivi, i cambiamenti patologici caratteristici della tubercolosi non sono stati rilevati visivamente negli organi interni e nei linfonodi. Ciò è dovuto alla recente infezione di animali con l'agente eziologico della tubercolosi, quindi i cambiamenti patologici non hanno ancora avuto il tempo di formarsi. Inoltre, è stato riscontrato che reazioni positive all'iniezione intradermica di tubercolina con indicatori RSLL negativi in campioni di sangue con tubercolina PPD per mammiferi erano presenti in due (29%) mucche in gravidanza profonda (7 - 8,5 mesi di gravidanza) e in una (14 %) - con endometrite acuta.
In sette mucche (100%) con un test della tubercolina positivo, l'RSLL nei test con PPD-tubercolina per uccelli e KAM è negativo, perché la sensibilizzazione non è causata da micobatteri aviari e atipici.
3.3.2. Studio della reazione di lisi specifica dei leucociti del sangue
nelle mucche della regione di Salsk che hanno reagito positivamente alla tubercolina
In condizioni di produzione, la diagnosi RSLL di tubercolosi è stata effettuata a Yuzhnoye OJSC, distretto di Salsky, regione di Rostov.
Il 24 agosto 2009, presso l'impianto di lavorazione della carne del distretto di Peschanokopsky, è stata effettuata una commissione di controllo e macellazione diagnostica di 32 mucche che hanno reagito alla tubercolina, seguita da un esame veterinario e sanitario.
Prima della macellazione, il sangue veniva prelevato dalle mucche per testare la reazione specifica di lisi leucocitaria (SLLL). I risultati degli studi sul numero di leucociti e sugli indicatori RSLL nelle mucche con una reazione pronunciata alla tubercolina sono presentati nella Tabella n. 3.
Delle 32 mucche che hanno risposto all'iniezione intradermica di tubercolina, solo otto (25%) sono risultate positive alla RSLL quando i campioni di sangue hanno interagito con la PPD, la tubercolina dei mammiferi. La percentuale di lisi nelle mucche era del 19%, 20%, 23,1%, 23,8%, 24,5%, 30,2%, 31%, 32,7%.
La ricerca ha stabilito che nei campioni con tubercolina PPD per uccelli in otto animali (25%), la lisi dei leucociti era del 14,3%, 15,8%, 20,1%, 21%, 23,1%, 23,8%, 27,3%, 34,5%.
Sette vacche (22%) avevano RSLL positivo con CAM. RSLL era 19%, 20%, 23,2%, 23,8%, 24,6%, 28,6%, 33,3%.
Di queste, in sei (19%) mucche, è stata osservata RSLL positiva sia con la tubercolina PPD per i mammiferi che con la tubercolina PPD per gli uccelli. Due mucche (6,3%) hanno avuto una reazione positiva alla tubercolina PPD per i mammiferi, alla tubercolina PPD per gli uccelli e alla CAM. In diciotto (56%) animali che hanno risposto all'iniezione intradermica di tubercolina, la reazione specifica di lisi leucocitaria è risultata negativa in tutti i campioni di sangue.
L'esame post mortem delle carcasse e degli organi interni di 32 mucche che hanno reagito alla tubercolina ha mostrato che di otto (25%) mucche con indicatori RSLL positivi nei campioni di sangue con tubercolina PPD per mammiferi, solo una (3%) presentava cambiamenti nella linfa retrofaringea nodi , caratteristico della tubercolosi, in due (6%) - echinococco nel fegato, in tre (9%) - gravidanza, in due (6%) - gravidanza ed echinococco nel fegato.
Delle 32 mucche che hanno risposto all'iniezione intradermica di tubercolina, 14 (44%) presentavano vesciche echinococciche nel fegato e una (3%) nei polmoni. In un caso (3%) è stato riscontrato un ascesso purulento nel fegato. Venti mucche (63%) erano gravide, di cui quattro (13%) erano malate di echinococcosi e una (3%) presentava alterazioni tubercolari nei linfonodi retrofaringei.
Tabella 3.
Numero di leucociti, indicatori RSLL e cambiamenti patologici nelle mucche nella regione di Salsk che hanno reagito positivamente alla tubercolina.
| № | Inventario n. | Il numero di leucociti con cui il sangue interagisce | RSLL, % | Cambiamenti patologici, gravidanza |
|||||
| Fisico soluzione | PPD – T per ml. | PPD – T per venerdì. | A | PPD – T per ml. | PPD – T per venerdì. | A |
|||
| 1 | 5948 | 5,2 | 3,5 | 5,2 | 5,2 | 32,7 | 0 | 0 | 7 mesi, cambiamenti caratteristici della tubercolosi nella linfa retrofaringea. nodi |
| 2 | 5070 | 5,8 | 4,0 | 3,8 | 5,8 | 31,0 | 34,5 | 0 | Art. 3 mesi |
| 3 | 5625 | 6,3 | 4,4 | 5,0 | 6,3 | 30,2 | 20,1 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 4 | 4533 | 4,9 | 3,7 | 4,9 | 4,9 | 24,5 | 0 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 5 | 5926 | 10,5 | 8,0 | 8,0 | 8,0 | 23,8 | 23,8 | 23,8 | 3 mesi, echinococcosi epatica. |
| 6 | 5602 | 6,5 | 5,0 | 5,0 | 6,5 | 23,1 | 23,1 | 0 | Art. 8 mesi |
| 7 | 5631 | 9,5 | 7,6 | 8,0 | 9,5 | 20 | 15,8 | 0 | Art. 3 mesi |
| 8 | 5563 | 10,5 | 8,5 | 8,3 | 7,5 | 19 | 21 | 28,6 | 3 mesi, echinococcosi epatica. |
| 9 | 5916 | 5,5 | 5,0 | 4,0 | 4,4 | 9,1 | 27,3 | 20 | Echinococcosi epatica. |
| 10 | 5567 | 5,6 | 5,6 | 5,6 | 4,3 | 0 | 0 | 23,2 | 6 mesi, echinococcosi epatica. |
| 11 | 5632 | 6,6 | 6,6 | 6,6 | 4,8 | 0 | 0 | 24,6 | Echinococcosi epatica. |
| 12 | 3016 | 4,2 | 4,2 | 3,6 | 4,2 | 0 | 14,3 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 13 | 5077 | 4,5 | 4,5 | 4,5 | 3,0 | 0 | 0 | 33,3 | Art. 6 mesi |
| 14 | 5923 | 5,8 | 5,8 | 5,8 | 4,7 | 0 | 0 | 19 | Art. 8 mesi |
| 15 | 5578 | 6,2 | 6,0 | 6,2 | 6,2 | 3,2 | 0 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 16 | 6626 | 5,1 | 5,1 | 5,1 | 5,1 | 0 | 0 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 17 | 5573 | 5,3 | 5,0 | 5,3 | 5,3 | 7 | 0 | 0 | 7 mesi, echinococcosi epatica. |
| 18 | 5599 | 6,5 | 5,9 | 6,5 | 6,5 | 9,2 | 0 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 19 | 5660 | 4,8 | 4,8 | 4,8 | 4,5 | 0 | 0 | 6,3 | Echinococcosi polmonare. |
| 20 | 5664 | 6,2 | 6,2 | 6,2 | 6,0 | 0 | 0 | 3,2 | Echinococcosi epatica. |
| 21 | 5538 | 5,4 | 4,9 | 5,3 | 5,4 | 9,3 | 1,8 | 0 | Echinococcosi epatica. |
| 22 | 7406 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 0 | 1,8 | 0 | Art. 7 mesi |
| 23 | 5137 | 6,4 | 5,9 | 6,4 | 6,4 | 7,8 | 0 | 0 | Art. 7 mesi |
| 24 | 5241 | 15,5 | 15,5 | 15,5 | 15,0 | 0 | 0 | 3,2 | Art. 5 mesi |
| 25 | 5946 | 10,0 | 10,0 | 10,0 | 9,8 | 0 | 0 | 2 | Processo purulento nel fegato. |
| 26 | 5176 | 5,0 | 5,0 | 4,9 | 4,8 | 0 | 2 | 4 | Art. 8 mesi |
| 27 | 5668 | 5,0 | 5,0 | 4,8 | 5,0 | 0 | 4 | 0 | Art. 8 mesi |
| 28 | 4506 | 5,3 | 5,3 | 5,3 | 5,3 | 0 | 0 | 0 | Art. 4 mesi |
| 29 | 6514 | 7,1 | 7,1 | 7,1 | 7,1 | 0 | 0 | 0 | Art. 3 mesi |
| 30 | 5027 | 6,5 | 6,5 | 6,5 | 6,5 | 0 | 0 | 0 | Art. 6 mesi |
| 31 | 6063 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 5,5 | 0 | 0 | 0 | Art. 6 mesi |
| 32 | 4922 | 6,8 | 6,8 | 6,8 | 6,8 | 0 | 0 | 0 | Art. 7 mesi |
Delle otto mucche macellate in cui la RSLL nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per i mammiferi era positiva, solo una (12,5%) presentava alterazioni nei linfonodi retrofaringei caratteristici della tubercolosi. In sette (87,5%) animali uccisi con RSLL positivo, non sono stati riscontrati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi caratteristici della tubercolosi, il che è probabilmente dovuto alla recente infezione di queste mucche con l'agente eziologico della tubercolosi, e ai cambiamenti patologici non si era ancora formato.
Sette (21%) delle 32 mucche che hanno reagito alla tubercolina hanno avuto una reazione positiva nei campioni di sangue con MAM, che è associato a un'infezione del corpo con micobatteri atipici.
In otto (25%) animali uccisi è stata osservata una reazione positiva nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per uccelli, ciò è spiegato dall'infezione delle mucche con micobatteri aviari (M. avium).
Sono stati identificati animali con test positivo per la tubercolina e infetti da diversi tipi di micobatteri. Pertanto, quattro (12,5%) mucche hanno avuto una reazione positiva ai test con tubercolina PPD per i mammiferi e tubercolina PPD per gli uccelli, una (3,1%) - con tubercolina PPD per uccelli e CAM, due (6,3%) - con PPD -tubercolina per i mammiferi, PPD-tubercolina per gli uccelli e CAM.
Delle 32 mucche che hanno risposto positivamente all'iniezione intradermica di tubercolina, 18 mucche (56%) hanno presentato RSLL negativo nei test con tubercolina PPD per i mammiferi, tubercolina PPD per gli uccelli e CAM, che è associata ad altre malattie (echinococcosi, ecc.). ) e gravidanza.
Gli studi batteriologici sul campione per la tubercolosi hanno dato risultati negativi.
3.3.3. Studio del sangue RSLL delle mucche nel distretto di Neklinovsky,
ha risposto positivamente alla tubercolina
In condizioni di produzione, la diagnosi di tubercolosi mediante la reazione della lisi specifica dei leucociti è stata effettuata nel SEC Sovetinsky, distretto di Neklinovsky, regione di Rostov.
Otto mucche in un allevamento precedentemente sano sono risultate positive alla tubercolina.
6 settembre 2009 È stata effettuata una macellazione di controllo e diagnostica delle mucche che hanno reagito positivamente alla tubercolina. Durante l'esame post mortem non sono stati rilevati visivamente cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi. I test batteriologici del campione per la tubercolosi nel laboratorio regionale di Rostov hanno dato risultati negativi.
Prima della macellazione, il sangue veniva prelevato dalle mucche che avevano risposto alla tubercolina per condurre una specifica reazione di lisi leucocitaria (SLLR).
Si è scoperto che su otto mucche con test positivo alla tubercolina, solo due avevano RSLL positivo quando i campioni di sangue interagivano con la tubercolina PPD per i mammiferi. La percentuale di lisi dei leucociti nelle mucche è del 10% e del 16%.
In tre mucche, la reazione specifica di lisi leucocitaria è risultata positiva con la tubercolina PPD per uccelli. La lisi dei leucociti negli animali era del 26%, 20%, 20%.
Risultati RSLL negativi sono stati ottenuti in campioni di sangue contenenti CAM. La percentuale di lisi dei leucociti variava dallo 0% al 2%.
In tre mucche (37,5%) che hanno reagito alla tubercolina, l'RSLL è risultato negativo in tutti i campioni.
In due mucche uccise (25%) con un test positivo alla tubercolina e che hanno dato un RSLL positivo nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per mammiferi, non sono stati rilevati cambiamenti patologici negli organi interni e nei linfonodi, ciò è dovuto alla recente infezione di animali con l'agente eziologico della tubercolosi, e quindi i cambiamenti patologici non hanno ancora avuto il tempo di formarsi.
Una reazione positiva nei campioni di sangue con tubercolina PPD per uccelli è stata osservata in tre animali (37,5%) che hanno risposto positivamente alla somministrazione intradermica di tubercolina, nei quali non sono stati rilevati cambiamenti patologici caratteristici della tubercolosi, il che può essere spiegato dall'infezione delle mucche con micobatteri aviari (M. avium).
Se la sensibilizzazione non è causata da micobatteri tubercolari, cioè l'eziologia della sensibilizzazione è diversa, i risultati dell'RSLL nei campioni di sangue con PPD-tubercolina per i mammiferi saranno negativi.
La possibilità di utilizzare il metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi in vitro sulle cellule del sangue direttamente nelle condizioni pratiche degli allevamenti contribuirà all'uso diffuso di allergeni di varia natura come mezzo di diagnosi differenziale delle reazioni tubercoliniche specifiche e non specifiche.
4. CONCLUSIONI
1. La dose operativa per la reazione di lisi specifica dei leucociti in un campione di 0,1 ml di sangue da analizzare e 0,05 ml di una soluzione di citrato di sodio al 3,8% è 0,05 ml per PPD-tubercoline e CAM.
2. Negli animali sensibilizzati mediante l'introduzione di micobatteri vivi del vaccino BCG nel corpo dell'animale, è stata rilevata RSLL positiva all'esterno del corpo 24 ore dopo la somministrazione di un vaccino con allergeni - PPD-tubercolina per i mammiferi.
3. L'aumento della dose di micobatteri vivi del ceppo vaccinale BCG a un animale è accompagnato da un aumento dell'indicatore RSLL e della durata della reazione, che indica un aumento dei leucociti sensibilizzati e dell'attività della specifica reazione di lisi dei leucociti.
4. In campioni di sangue con soluzione salina, tubercolina PPD per uccelli e CAM in animali vaccinati con micobatteri vivi del vaccino BCG e in campioni di sangue con soluzione salina, tubercolina PPD per mammiferi, tubercolina PPD per uccelli e CAM vaccinati con vaccino dal ceppo 82, il numero di leucociti era lo stesso, cioè è stato ottenuto un RSLL negativo, che indica la specificità della reazione, poiché i leucociti sensibilizzati non reagiscono con allergeni estranei.
5. Nella reazione della lisi specifica dei leucociti possono essere utilizzati molti allergeni, il che rende possibile differenziare le reazioni non specifiche alla tubercolina.
6. Il metodo RSLL da noi proposto integra e migliora il complesso della diagnosi esistente e della diagnosi differenziale della tubercolosi animale.
5. SUGGERIMENTI PRATICI
1. La reazione di lisi specifica dei leucociti consente di rilevare un animale infetto nel primo giorno dopo l'infezione, quindi è di grande importanza pratica per la diagnosi precoce della tubercolosi.
2. Raccomandiamo di utilizzare la reazione specifica di lisi leucocitaria per la diagnosi differenziale intravitale di reazioni specifiche e non specifiche alla somministrazione di PPD-tubercolina per i mammiferi, che chiarirà la diagnosi di tubercolosi e preverrà la macellazione ingiustificata e ingiustificata di animali sani e altamente produttivi.
1. Dubovoy, B.L. Novità nella diagnosi differenziale della tubercolosi negli animali da allevamento / B.L. Dubovoy, O.N. Solovyova, N.V. Ulko // Raccolta di articoli scientifici "Diagnostica, prevenzione e trattamento delle malattie infettive degli animali da allevamento." - Persianovsky, 2000.-P.8-12.
2. Dubovoy, B.L. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi nei bovini RSLL/B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova // Medicina veterinaria degli animali domestici.-Kazan.-No.3, 2006.–P. 54-56.
3. Dubovoy, B.L. Ricerca per la diagnosi precoce della tubercolosi animale / B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova // Conferenza scientifica e pratica internazionale “Principali problemi, tendenze e prospettive per lo sviluppo sostenibile della produzione agricola” - Makhachkala - T.2, 2006. - P.68-69.
4. Dubovoy, B.L. Studi sulla specificità e sull'attività delle RSLL nella diagnosi della tubercolosi nei bovini / B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova // Percorso innovativo di sviluppo del complesso agroindustriale - la direzione principale della ricerca scientifica per l'agricoltura. - Persianovsky. - 2007. – P. 67-69.
5. Polyakova, O.N. Diagnosi precoce della tubercolosi nei suini / Polyakova O.N., Dubovoy B.L. // Materiali della conferenza interregionale "Tecnologie intensive nell'allevamento suino: problemi e soluzioni." - Persianovsky. - 2007. - P. 124-125.
6. Polyakova, O.N. RSLL in vacche che hanno reagito due volte positivamente al test intradermico della tubercolina/O.N. Poljakova, B.L. Dubovoy, N.A. Soloviev// Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa "Problemi attuali di diagnosi funzionale e morfofunzionale delle malattie animali". - Novocherkassk. - 2007. - P. 179-180.
7. Polyakova, O.N. Studio dei cambiamenti nell'attività della tubercolina-PPD per i mammiferi RSLL / O.N. Poljakova, B.L. Dubovoy // Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa “Problemi attuali di patologia, morfologia e oncologia degli animali” – Novocherkassk.-2007.-P.74-75.
8. Polyakova, O.N. Reazione di lisi specifica dei leucociti nella diagnosi della tubercolosi animale / O.N. Polyakova // Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa “Problemi, compiti e modalità di supporto scientifico del progetto nazionale prioritario “Sviluppo del complesso agroindustriale”. – Novocherkassk.-2008.-P.18-19.
9. Polyakova, O.N. Studio delle reazioni aspecifiche alla tubercolina nei bovini / O.N. Polyakova // Bollettino dell'Università agraria statale di Saratov intitolato a N. I. Vavilov - N. 6, 2008. - P. 50-53.
10. Dubovoy, B.L. Diagnosi differenziale della tubercolosi nei bovini mediante la reazione di lisi specifica dei leucociti/B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova // Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa “Aumentare la produttività degli animali da fattoria e del pollame sulla base di risultati innovativi.” – Novocherkassk.-2009.-P.3-7.
11. Dubovoy B.L. Metodo per la diagnosi precoce della tubercolosi animale / B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova, A.I. Klimenko, A.V. Kovalenko, L.P. Mironova // Invenzioni. Modelli di utilità. Bollettino ufficiale n. 25, 2009.-P.2.
12. Polyakova, O.N. Diagnosi differenziale delle reazioni intradermiche alla tubercolina PPD per mammiferi (TML) nelle vacche / O.N. Poljakova, B.L. Dubovoy, V.V. Moseychuk // Materiali della conferenza scientifica e pratica internazionale “Integrazione della scienza, educazione alla sicurezza alimentare della Federazione Russa”. - Persianovsky. - T. N. 3, 2010. – P. 177-180.
13. Dubovoy, B.L. Diagnosi di tubercolosi mediante differenziazione delle reazioni positive alla tubercolina intradermica nei bovini / B.L. Dubovoy, O.N. Polyakova, V.I. Dobrelin, V.V. Moseychuk, G.V. Goryacheva // Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa "Problemi attuali di supporto veterinario all'allevamento di bestiame russo". - Novocherkassk. - 2010. - P. 10-13.
14. Polyakova, O.N. Reazione di lisi specifica dei leucociti quando si effettua una diagnosi differenziale di tubercolosi / O.N. Poljakova, B.L. Dubovoy // Materiali della conferenza scientifica e pratica tutta russa “Problemi attuali di supporto veterinario all’allevamento di bestiame russo” - Novocherkassk – 2010.- P.8-9.
15. Dubovoy, B.L. Diagnosi di reazioni tubercoliniche aspecifiche causate da micobatteri atipici e aviari / B.L. Dubova, O.N.Polyakova // Scienze veterinarie di Kuban. – Krasnodar.-Nr. 1, 2011. – P. 21-23.
16. Polyakova, O.N. Determinazione delle cause delle reazioni tubercoliniche non specifiche con tubercolina PPD per uccelli e CAM all'esterno del corpo / O.N. Poljakova, B.L. Dubovoy // Scienze veterinarie di Kuban. – Krasnodar.-Nr. 1, 2011. – P. 8-10.
Elenco delle abbreviazioni:
BCG - vaccino secco BCG è un micobatterio tubercolare vivo essiccato del ceppo vaccinale BCG.
Il CAM è un complesso di micobatteri atipici.
PPD per ml. – derivato proteico purificato per mammiferi, è una frazione proteica purificata isolata rispettivamente dal fluido di coltura dell'agente patogeno della tubercolosi di una specie bovina coltivata su un mezzo nutritivo sintetico.
PPD per venerdì – derivato proteico purificato per uccelli, è una frazione proteica purificata isolata dal fluido culturale dell'agente patogeno della tubercolosi di una specie aviaria coltivata su un mezzo nutritivo sintetico.
RSLL – reazione di lisi specifica dei leucociti.
Poliakova Olga Nikolaevna
MIGLIORARE LA DIAGNOSI PRECOCE DELLA TUBERCOLOSI NEGLI ANIMALI.
A V T O R E F E R A T
Tesi di laurea accademica
Candidato di Scienze Veterinarie 
Firmato per timbro il 14/01/11 Timbro rapido
Foglio di stampa standard del volume 1. Ordine n. 198/1 Tiratura 100 esemplari.
Impresa editoriale e tipografica
LLC "MP Book", Rostov sul Don,
Autostrada Taganrog, 106
Caricamento...
