Test immunologici cutanei - principio del metodo. Test cutanei per allergeni. Limitazioni da considerare quando si eseguono test cutanei

Il test cutaneo è un metodo semplice e affidabile per rilevare le IgE specifiche. Esistono test cutanei - puntura e scarificazione - e intradermici. I risultati positivi dei test cutanei (eritema e vesciche nel sito di iniezione dell'allergene) hanno valore diagnostico solo in combinazione con i dati dell'anamnesi, dei test fisici e di laboratorio.

Indicazioni e scelta degli allergeni. L'indicazione principale per i test cutanei è identificare gli allergeni, il cui contatto provoca la malattia. Quando si scelgono gli allergeni da testare, è necessario tenere conto della probabilità di contatto con essi in una determinata area (va notato che il polline, che provoca allergie, è specifico per determinate aree e i microacari, le muffe e l'epidermide animale sono gli stessi ovunque Negli Stati Uniti i preparati diagnostici e terapeutici degli allergeni vengono prodotti sotto forma di estratti concentrati o diluiti.

Esistono preparati diagnostici di allergeni per test cutanei e intradermici. La durata di conservazione degli estratti allergenici concentrati è di 2-3 anni. Dipende dalla concentrazione dei farmaci e dalla loro temperatura di conservazione. A una temperatura di conservazione di 2-8*C, gli estratti diluiti in rapporto 1:100 mantengono le loro proprietà fino a 1 anno, mentre quelli meno concentrati (1:1000) perdono attività dopo alcune settimane o mesi. A questo proposito, i preparati allergenici, soprattutto quelli diluiti, devono essere aggiornati regolarmente. I farmaci dosati in AE, così come i veleni di insetti pungenti e altri allergeni dosati in microgrammi, sono meglio conservati in forma liofilizzata.

Misure precauzionali:

Il test cutaneo non deve essere eseguito durante il broncospasmo.

È necessario eseguire un test cutaneo prima di un test intradermico, poiché il test cutaneo può rilevare una sensibilizzazione con un rischio minimo di reazione sistemica.

Poiché i test cutanei possono causare shock anafilattico, le scorte di emergenza dovrebbero essere sempre a portata di mano.

I test cutanei possono essere eseguiti da un infermiere esperto o da un assistente di laboratorio, ma sempre in presenza di un medico.

È meglio eseguire il test cutaneo sulla schiena, poiché qui è possibile testare più allergeni contemporaneamente.

Tecnica.

Prove di foratura:

La pelle viene pulita con alcol isopropilico o etilico al 70%. Per evitare che le vesciche si uniscano, la distanza tra le punture adiacenti deve essere di almeno 2 cm, i siti di puntura sono contrassegnati e ogni quinto è numerato (questo facilita la registrazione dei risultati). Su ciascun punto mirato si applica una goccia di estratto allergenico diluito 1:10, 1:20 o un preparato standardizzato non diluito e si fora la pelle. I dispositivi per perforare la pelle dovrebbero essere convenienti, economici, usa e getta e fornire anche una profondità di puntura standard. Aghi sterili da 26 G comunemente usati, aghi da cucito sterili, aghi Morrow Brown sterili e aghi Dermapik in plastica. L'ago viene fatto passare attraverso una goccia di estratto allergenico con un angolo di 45° e la pelle viene forata in modo che non fuoriesca sangue. Quando si rimuove l'ago, sollevare leggermente la pelle. L'ago non può essere riutilizzato; viene immediatamente gettato in un apposito contenitore. Gli aghi Morrow Brown e dispositivi simili hanno una lunghezza della punta di 1 mm, che fornisce una profondità di puntura standard. Gli aghi Dermapik contengono un allergene sulla punta. 15-20 minuti dopo la puntura controllare se sono comparsi eritema e vesciche. Misurando il diametro più piccolo e quello più grande del blister, calcola il valore medio in millimetri. Se appare una vescica di diametro superiore a 10 mm meno di 15 minuti dopo la puntura, rimuovere con attenzione l'allergene dalla pelle.

La reazione all'irritazione aspecifica viene valutata mediante un test di controllo negativo con un solvente. Tipicamente si tratta di soluzione salina tamponata con fosfato (pH 7,4) con aggiunta dello 0,4% di fenolo (per inibire la crescita batterica).

I test cutanei nei pazienti con dermografismo ortinario sono considerati positivi se la reazione all'allergene è più pronunciata della reazione al solvente.

Viene eseguito un test di controllo positivo con una soluzione di istamina allo 0,1%. L'area per la conduzione del campione di controllo deve essere situata ad una certa distanza dalla posizione degli altri campioni. Un test di controllo positivo (con punteggio "+++") viene utilizzato per valutare i risultati dei test sugli allergeni e consente anche di identificare la ridotta reattività cutanea osservata nei bambini, negli anziani e nei pazienti che assumono bloccanti H1.

L'applicatore multi-test è un dispositivo monouso per test con puntura, che consente la somministrazione simultanea di diversi allergeni. I risultati ottenuti utilizzando questo dispositivo coincidono con i risultati dei test intradermici, del test radioallergoassorbente e dei dati anamnestici. Il vantaggio principale dell'applicatore è che consente di standardizzare il più possibile le condizioni per l'esecuzione dei test cutanei (profondità della puntura della pelle, distanza tra le punture, dose di allergene), lo svantaggio principale è l'alto costo.

I test di scarificazione sono meno sensibili dei test di puntura e richiedono più tempo.

Se i risultati dei test di puntura sono dubbi, vengono eseguiti test intradermici. Per sviluppare una reazione positiva durante il test intradermico, è necessaria una dose inferiore di allergene. L'allergene che ha causato un test di puntura positivo, se somministrato per via intradermica, può portare a una reazione locale pronunciata e persino sistemica. Se meno di cinque test di puntura risultano positivi, è possibile eseguire immediatamente i test intradermici. Se i test di puntura risultano più positivi, il giorno successivo vengono eseguiti i test intradermici. Per evitare una reazione sistemica, i test intradermici con allergeni cross-reattivi, in particolare estratti vegetali, vengono eseguiti in giorni diversi. La selezione degli allergeni tenendo conto delle condizioni climatiche e geografiche e dei dati anamnestici ci consente di ridurre al minimo il numero di campioni. Non vengono eseguiti test intradermici con allergeni alimentari.

Test intradermici:

Per i test intradermici si utilizzano estratti allergenici alla diluizione 1:100. Come controllo positivo viene utilizzata una soluzione di istamina allo 0,01%, la cui reazione viene valutata come “+++”; come controllo negativo viene utilizzato un solvente. La distanza tra i siti di iniezione dell'allergene e i campioni di controllo dovrebbe essere maggiore rispetto a quando si eseguono test di puntura.

Per i test intradermici, utilizzare il terzo superiore della superficie interna dell'avambraccio o la superficie esterna della spalla. Nei bambini di età compresa tra 2 e 5 anni è più conveniente iniettare gli allergeni nella pelle della schiena.

La pelle viene pulita con alcool e vengono contrassegnati i siti di iniezione, la distanza tra i quali deve essere di almeno 2,5 cm.

0,1 ml di estratto allergenico vengono aspirati in una siringa da tubercolina sterile monouso. Poiché la comparsa di una vescica durante l'iniezione intradermica di aria può essere confusa con una reazione positiva, è necessario rimuovere completamente le bolle d'aria dalla siringa.

La pelle viene tesa e l'ago viene inserito con un angolo di 45* con il taglio rivolto verso il basso. Il taglio dell'ago deve essere completamente immerso nella pelle.

Dopo aver iniettato circa 0,02 ml di soluzione, dovrebbe formarsi una papula del diametro di 1-3 mm. Se la soluzione penetra sotto la pelle o fuoriesce, non c'è papula. In questo caso, l'allergene viene reintrodotto in un'altra posizione.

La reazione viene valutata dopo 15-30 minuti. Esistono due modi per valutare i risultati. Secondo uno di essi vengono misurati i diametri massimo e minimo dell'eritema e della vescica, quindi viene calcolato il valore medio, come quando si valutano i risultati dei test cutanei; secondo l'altro viene misurato solo il diametro massimo. Per rendere più chiaramente visibili i confini della vescica, la pelle attorno ad essa viene schiacciata con due dita. Nel valutare i risultati, prestare attenzione alla forma del blister. Se i confini della vescica non sono uniformi, ciò viene annotato nel protocollo dello studio.

Alcuni autori preferiscono introdurre prima soluzioni più diluite di allergeni, ad esempio 1:100.000, e poi soluzioni la cui concentrazione viene successivamente aumentata di 10 volte. Per ciascun allergene viene prelevata la dose massima consentita; in assenza di reazione al suo raggiungimento il campione è considerato negativo.

TEST SULLA PELLE- un metodo diagnostico per identificare la sensibilizzazione specifica del corpo umano o animale introducendo un allergene attraverso la pelle e valutare la reazione infiammatoria della pelle.

Esistono due metodi di K. p. Il metodo diretto, quando l'allergene viene somministrato senza danni o con danni alla pelle, può essere flebo, applicazione (epicutanea o patchwork), scarificazione, prova di iniezione e intradermica. Il metodo diretto prevede anche prove a freddo e termiche. Il metodo indiretto è la reazione di trasferimento passivo di Prausnitz-Küstner (vedi reazione di Prausnitz-Küstner), quando il siero del paziente con gli anticorpi in esso contenuti viene iniettato per via intradermica in una persona sana, seguito dall'introduzione di un allergene nello stesso punto, a cui il paziente è sensibile. Questa tecnica viene utilizzata quando il test cutaneo diretto è impossibile o molto pericoloso (ad esempio, nell'ipersensibilità di tipo anafilattico alla penicillina) ed è necessaria una diagnosi specifica.

A seconda del momento in cui si verifica la reazione infiammatoria, si distingue tra tipi immediati (reazioni allergiche di tipo I e III) e ritardati (reazioni allergiche di tipo IV) (vedi Allergia). Il meccanismo di tipo immediato K. si basa sul fatto che quando il corpo è sensibilizzato, le reagine si fissano non solo nei tessuti degli organi “shock” (vedi Anafilassi), ma anche nelle cellule della pelle. Quando un allergene specifico (antigene) viene applicato sulla pelle, si verifica una reazione allergene-anticorpo e vengono rilasciate sostanze biologicamente attive (vedi Mediatori delle reazioni allergiche). Dopo 15-20 minuti. si forma una vescica, circondata da una zona di iperemia, reazione infiammatoria di tipo vescicolo-eritematoso (reazione di tipo I). Nelle reazioni di tipo III, si sviluppano gonfiore e iperemia nel sito di iniezione dell'allergene. Questi cambiamenti si verificano dopo 3-4 ore e raggiungono il massimo dopo 7-8 ore. e scompaiono dopo 24 ore. Il Kp di tipo III è considerato una manifestazione di reattività allergica come il fenomeno di Arthus (vedi fenomeno di Arthus) e dipende dalla presenza di precipitine circolanti. Per reazioni ritardate che si verificano dopo 24-48 ore. dopo l'esposizione ad un allergene, le cellule linfoidi prendono parte alla formazione dell'infiltrato nel sito del K. p. Quando i recettori dei linfociti interagiscono con un allergene, i mediatori vengono rilasciati dai linfociti, causando lo sviluppo di una reazione infiammatoria.

La scelta della tecnica del test cutaneo dipende dalla malattia, dal grado e dal tipo di ipersensibilità allergica prevista (immediata, ritardata), nonché dal gruppo di allergeni da testare. Con maggiore sensibilità alle sostanze chimiche semplici. sostanze, alcuni farmaci, ecc., espressi clinicamente dalla dermatite allergica da contatto, hanno valore diagnostico solo gli elementi dell'applicazione K. Per l'asma bronchiale, la rinite allergica, il raffreddore da fieno, in cui è prevista una maggiore sensibilità agli allergeni di origine non batterica, lo studio inizia con un'iniezione di prova o un prick test. In caso di orticaria, edema di Quincke, allergie alimentari ed emicranie, è meno comune identificare le allergie utilizzando K. p., poiché danno risultati negativi con un numero di allergeni alimentari che, se consumati per os, causano una malattia chiaramente definita . K. p. con i farmaci non sono affidabili. Un K. negativo non significa che non vi sia sensibilizzazione a questo allergene, poiché in questi casi si verificano gravi reazioni anafilattiche. Gli allergeni batterici vengono solitamente testati per via intradermica (ad eccezione del test Pirquet). Con la tecnica della scarificazione non danno risultati sufficientemente netti, ciò è dovuto al minor contenuto di sostanze specifiche rispetto agli estratti non batterici.

Quando si mette in scena K., è necessario tenere conto della disuguale reattività della pelle. La pelle più sensibile è la superficie anteriore dell'avambraccio, del torace, dell'addome, della schiena vicino alla colonna vertebrale e sopra le scapole. Sulla fossa ulnare la reazione è più forte, ma meno specifica. La sensibilità della pelle durante un'esacerbazione della malattia o immediatamente dopo è meno pronunciata. Quando si mette in scena K., raramente si verificano reazioni generali come lo shock anafilattico (vedi). Le complicazioni si osservano più spesso quando si utilizzano allergeni così forti come allergeni provenienti da polline di piante, peli di animali ed epidermide, corpi di insetti e siero animale. Il pericolo maggiore deriva dai farmaci, in particolare dagli antibiotici (soprattutto la penicillina). I test con la penicillina dovrebbero essere eseguiti quando assolutamente necessario, utilizzando diluizioni molto elevate; Lo studio inizia applicando una goccia della soluzione test sulla pelle e solo se la reazione è negativa viene eseguito un test di graffio. Per prevenire reazioni generali come lo shock anafilattico, il test degli allergeni non batterici dovrebbe iniziare con il metodo di scarificazione, osservando rigorosamente tutte le precauzioni necessarie, e solo se i risultati sono negativi passare al metodo intradermico. A causa del fatto che non esiste una corrispondenza completa tra la sensibilità allergica della pelle e gli organi "shock", nella diagnosi specifica delle malattie allergiche non si può fare affidamento solo sui risultati di K. p. K. p. acquisisce importanti informazioni diagnostiche significato quando il suo risultato corrisponde pienamente ai dati anamnestici. Se i dati dell'anamnesi non corrispondono ai risultati di K. p., vengono utilizzati altri metodi di ricerca: in vivo - test provocatori (vedi), in vitro - determinazione degli anticorpi IgE nel sangue utilizzando il metodo radioallergoassorbente, test di rilascio specifico dell'istamina , test dei basofili (vedi), ecc. d.

I test di gocciolamento vengono utilizzati per rilevare la sensibilizzazione ai farmaci, principalmente agli antibiotici. Si utilizzano basse concentrazioni di sostanze: soluzione di novocaina allo 0,25%, antibiotici da 0,5 a 100 U/ml, soluzione di resorcina al 2,5%, ecc. Sulla pelle dell'addome o sulla superficie anteriore dell'avambraccio, pretrattata con alcol al 70%, applicare una goccia della sostanza in esame e tracciare l'area del campione con una matita. Contemporaneamente viene effettuato un test di controllo con un solvente. Per rilevare la reattività cutanea viene utilizzata una soluzione di istamina allo 0,01%: un controllo positivo. Prendere in considerazione la reazione immediata (entro 20 minuti) e ritardata (entro 24-48 ore). In caso di reazione positiva, nel sito di applicazione di una goccia della sostanza si sviluppano eritema, edema, papule ed elementi vescicolari. In caso di reazione negativa si procede alla scarificazione.

Prove applicative sono utilizzati dal prof. malattie della pelle e sono test provocatori in cui una quantità nota della sostanza in esame viene applicata su un'area della pelle della superficie anteriore dell'avambraccio, della schiena o dell'addome che non è danneggiata dalla dermatite per riprodurre il processo in miniatura. Gli articoli dell'applicazione K. sono più facili da controllare rispetto alle reazioni con danni cutanei più profondi (scarificazione e intradermica). Esistono test applicativi chiusi e aperti. Quelli aperti vengono utilizzati per sostanze oleo-resinose o fluide. La sostanza viene applicata direttamente sulla pelle (coloranti, cosmetici), oppure sotto forma di “finestra cutanea”, attraverso la quale si osserva la reazione: la pelle viene trattata con alcool al 70% ed essiccata; Successivamente, un pezzo quadrato di cellophane o vetro viene fissato su tre lati con un cerotto adesivo e il liquido di prova viene iniettato nella tasca risultante. I test delle applicazioni chiuse vengono eseguiti come segue. Sulla superficie della pelle viene posto un pezzo quadrato di garza di 1 cm2, inumidito con la soluzione di prova. Copri la parte superiore con un pezzo di cellophane o carta oleata leggermente più grande e sigillalo in modo che la garza non si estenda oltre il bordo dell'adesivo (per evitare che si secchi rapidamente). Contemporaneamente alle soluzioni di prova viene fornito come controllo un campione con un liquido di controllo del test o una soluzione fisiologica. La soluzione della sostanza in esame viene selezionata in modo tale da non provocare irritazione alla pelle in una persona sana. Se si avverte prurito o sensazione di bruciore nel sito del test, il paziente deve rimuovere l'adesivo e la garza e rimuovere eventuali residui della sostanza in esame dalla superficie della pelle con alcol o etere. Il materiale testato viene mantenuto sulla pelle per non più di 5 giorni. Il risultato dell'applicazione K.p. viene valutato dopo 20 minuti, 12 ore, 1, 3 e 7 giorni. dopo aver rimosso la sostanza (colore fig. 1-3). La specificità dell'applicazione K. p. è molto elevata se vengono seguite tutte le regole tecniche per la loro applicazione, ovvero la concentrazione dell'allergene è selezionata correttamente, vengono presi in considerazione gli indicatori del campione di controllo, ecc. La loro specificità è simile alla specificità di scarificazione K. p. ed è molto più elevato rispetto a quello intradermico. La sicurezza è significativamente più elevata rispetto ai test intradermici, poiché gli strati superficiali delle cellule della pelle impediscono la rapida penetrazione dell'allergene nel corpo. Se la reazione è rapida, l'allergene viene rimosso. In caso di reazione tardiva, l'allergene viene rimosso anche non appena compaiono i sintomi di irritazione cutanea. L'assunzione di antistaminici non influisce sui risultati del test; i farmaci corticosteroidi, al contrario, riducono significativamente l'intensità della reazione.

Prove di scarificazione introdotti in pratica da E. Schloss nel 1912. Sono meno sensibili dei test intradermici, ma più specifici e sicuri. I test di scarificazione vengono eseguiti sulla pelle della superficie anteriore dell'avambraccio. Vengono utilizzati allergeni pollinici contenenti 1.000 e 10.000 PNU (unità di azoto proteico) e allergeni domestici ed epidermici contenenti 5.000-10.000 PNU. Se l'estratto allergenico contiene 20.000 PNU, viene diluito con un liquido di controllo del test. Gocce di allergeni sterili vengono applicate sulla pelle pretrattata e asciugata con alcol al 70% a una distanza di 3-4 cm l'una dall'altra. Gli allergeni vengono aspirati dalle bottiglie attraverso tappi di gomma utilizzando un ago da siringa (per ciascun allergene viene utilizzata una siringa separata). Quindi, attraverso ciascuna goccia di allergene, vengono realizzati due graffi paralleli, ciascuno lungo 0,5 cm, con un ago o uno scarificatore separato per non danneggiare i vasi sanguigni. Quando si utilizzano allergeni in polvere, si applicano prima gocce di liquido di controllo del test sulla pelle, quindi con un ago sterile asciutto (un ago separato per ciascun allergene), si prelevano piccole quantità di allergene (sulla punta dell'ago), si aggiungono ad una goccia di liquido di controllo del test e la scarificazione viene eseguita con lo stesso ago. Come controllo negativo è necessario utilizzare un liquido di controllo del test e come controllo positivo una soluzione di istamina diluita 1: 10.000 Non eseguire più di 20 test contemporaneamente. I risultati dei test di scarificazione vengono valutati dopo 20 minuti. (colore fig. 4-5).

Prova di iniezioneè una modifica della scarificazione K. p., con questo test la possibilità di danni ai vasi sanguigni è inferiore rispetto alla scarificazione. Lo eseguono con gli stessi allergeni. Per il test di iniezione, viene prelevata una soluzione più concentrata dell'allergene rispetto a quando si esegue una procedura di scarificazione, poiché una quantità minima di allergene penetra nella pelle. La tecnica del test di iniezione presenta varie modifiche. Il test classico si svolge come segue. Una goccia dell'allergene da testare viene applicata sulla pelle precedentemente disinfettata e l'epidermide della pelle viene perforata con un ago attraverso la goccia. La valutazione del test mediante iniezione viene effettuata allo stesso modo del prick test. Solo dopo aver ricevuto risultati negativi da questo test o da un graffio test con allergeni non batterici si procede ai test intradermici.

Test intradermici vengono utilizzati principalmente per rilevare la sensibilizzazione ad allergeni di origine batterica o fungina. Per la diagnosi delle malattie allergiche furono proposti per la prima volta da R. Cook nel 1911. I test intradermici forniscono un aiuto significativo nella diagnosi della tubercolosi (reazione di Mantoux), della brucellosi (reazione di Burnet), dell'echinococcosi (reazione di Casoni), ecc. Il test intradermico di Mantoux La reazione completa il test di Pirquet.

Quando l'allergene viene somministrato per via intradermica, fornisce un contatto più stretto con le cellule della pelle che con la scarificazione. Pertanto, i test intradermici sono circa 100 volte più sensibili, ma meno specifici, dei prick test. Possono causare complicazioni allergiche locali e generali. Per i test intradermici vengono utilizzate siringhe con graduazioni da 0,01 ml e aghi sottili con smusso corto e punta non smussata. Per ciascun allergene sono necessari una siringa e un ago separati. La pelle della superficie anteriore dell'avambraccio viene prima trattata con alcol al 70%. L'iniezione viene eseguita come segue: la punta di un ago, posizionata su una siringa con una piccola quantità di allergene da testare, viene inserita con un angolo molto piccolo nello strato superficiale dell'epidermide con l'ago tagliato verso l'alto in modo che l'ago il foro viene completamente nascosto nell'epidermide (Fig.), dopodiché la quantità necessaria di allergene viene iniettata per via intradermica. Più l'iniezione è superficiale, maggiore è la sensibilità della pelle. La reazione allo stesso allergene quando somministrato per via sottocutanea sarà molto debole e quando somministrato per via intramuscolare sarà negativa. Con la tecnica di iniezione corretta, immediatamente dopo l'iniezione si forma un infiltrato sulla superficie della pelle. Quando si testano gli allergeni non infettivi, vengono somministrati per via intradermica in una quantità di 0,01-0,02 ml di estratto. Gli allergeni batterici vengono somministrati in grandi quantità - da 0,05 a 0,1 ml. È obbligatorio eseguire test paralleli con il fluido di controllo del test. Allo stesso tempo, non puoi eseguire più di 10 test intradermici con allergeni di diversi gruppi. Per le reazioni negative e deboli vengono eseguiti altri 10 test. Il risultato del test viene visualizzato dopo 15-20 minuti. e dopo 24 e 48 ore. (colore fig. 6-12).

Prove a freddo e termiche. Per la diagnostica, il cosiddetto Per le allergie fisiche vengono utilizzati test del freddo e del caldo. Durante un test a freddo, un pezzo di ghiaccio di 2-3 cm di diametro viene fissato sulla pelle della superficie palmare dell'avambraccio per 3 minuti. oppure una provetta riempita d'acqua con pezzi di ghiaccio per 10 minuti. Con una reazione positiva (con orticaria da contatto fredda), sulla pelle si forma una vescica orticarioide, solitamente senza "pseudopodia", e la sua forma corrisponde al contorno di un pezzo di ghiaccio o di una provetta. Il test termico viene eseguito come segue. Una provetta con acqua riscaldata ad una temperatura di 40-42° viene posta sulla pelle della superficie anteriore dell'avambraccio per 10 minuti. Un test positivo è caratterizzato dalla formazione di una vescica orticarioide nel punto di contatto. K. p. per le allergie fisiche non identificano un allergene specifico, ma permettono solo di stabilire se il paziente ha una maggiore sensibilità al fattore temperatura.

Valutazione del test cutaneo

Nel valutare gli elementi K. (tabella), è necessario tenere conto del fatto che la loro specificità non è assoluta. In alcuni casi, possono essere positivi, ma non correlati all'eziologia della malattia. Tali reazioni sono chiamate falsi positivi. Le cause delle reazioni false positive possono essere: 1. Aumento della sensibilità dei capillari cutanei all'irritazione meccanica. In questo caso, tutti i campioni, incluso un campione con un liquido di controllo del test, presentano rigonfiamenti e non possono essere considerati positivi. A volte questa reazione può essere alleviata prescrivendo antistaminici. 2. Utilizzo di aghi smussati o troppo spessi o applicazione di scarificazioni troppo profonde. 3. Effetto irritante aspecifico dell'allergene dovuto alla sua preparazione impropria (l'allergene deve essere isotonico e avere una reazione neutra). 4. Introduzione di una quantità eccessiva di allergene (durante il test intradermico). 5. Contaminazione degli strumenti (siringhe, aghi) con allergeni rimasti da test precedenti o da soluzioni di istamina. 6. Ipersensibilità ai conservanti utilizzati per preparare gli allergeni (mertiolato, fenolo, glicerina). 7. Immunol stretto, somiglianza tra alcuni allergeni dovuta alla presenza di gruppi antigenici comuni.

Se l'anamnesi contiene chiare indicazioni sull'etiolo, sul significato di un determinato allergene e K. P. fornisce risultati negativi con esso, allora tali risposte sono chiamate false negative. Le ragioni delle reazioni false negative possono essere le seguenti: 1) perdita delle proprietà allergeniche degli estratti a causa di una conservazione a lungo termine e impropria o durante il processo di produzione (gli allergeni alimentari vengono inattivati ​​particolarmente rapidamente); 2) assenza o diminuzione della sensibilità del paziente, causata da: a) deplezione di anticorpi durante o dopo una grave esacerbazione della malattia, b) assenza di anticorpi sensibilizzanti la pelle in alcuni tipi di allergie, ad esempio allergie alimentari ( vedi), c) diminuzione della reattività cutanea associata a disturbi circolatori, edema, disidratazione, influenza delle radiazioni ultraviolette, con cachessia generale e vecchiaia, d) il paziente ha assunto antistaminici, adrenalina ed efedrina poco prima del test.

Tavolo. INTENSITÀ DELLA REAZIONE DELLA PELLE DURANTE ALCUNE TECNICHE DI TEST SULLA PELLE (La tabella è illustrata con disegni a colori)

Bibliografia: Adrianova N.V. e Titova S.M. Ufficio allergologico, p. 11, M., 1970; Malattie allergiche nei bambini, ed. M. Ya. Studenikin e T. S. Sokolova, p. 78, M.,’1971; Allergologia pratica moderna, ed. A. D. Ado e A. A. Polner, p. 23, M., 1963; Sherman W.W.

Ipersensibilità, meccanismi e gestione, p. 141, Filadelfia a. o., 1968.

I test cutanei sono il metodo più semplice e sicuro per diagnosticare le allergie alimentari, consentendo di identificare non solo allergeni causalmente significativi, ma anche di suggerire l'uno o l'altro tipo di reazione allergica, che è associata ad una esacerbazione della malattia.

La disponibilità dei test cutanei è dovuta non solo alla tecnica semplice ed economica per eseguirli, ma anche ad un elenco relativamente piccolo di controindicazioni alla loro attuazione. Il valore e la sicurezza dei test cutanei sono ampiamente dibattuti in letteratura. A questo proposito, l'Associazione degli allergologi e immunologi infantili della Russia ha pubblicato le principali disposizioni sui test cutanei, che gli allergologi e

I pediatri pratici sono guidati nel loro lavoro da:

1. L'esecuzione di test cutanei è uno dei compiti principali di un allergologo.

2. I test cutanei vengono eseguiti su bambini di qualsiasi età.

3. I test cutanei possono essere eseguiti con quasi tutti gli allergeni prodotti dall'industria medica.

4. I test cutanei non vengono eseguiti durante un'esacerbazione della malattia.

(la remissione incompleta della dermatite atopica non lo è

controindicazione).

5. 7 giorni prima del test cutaneo, non assumere

antistaminici, 2 settimane prima - prendi

glucocorticoidi topici sull'area della pelle in cui deve essere eseguito il test.

6. Una controindicazione per i test cutanei con determinati allergeni è una storia di reazioni anafilattiche a questi o ad allergeni cross-reattivi.

La domanda che spesso sorge spontanea è a che età si può

fare test cutanei? Non esiste un limite di età per i test cutanei. Tuttavia, bisogna tenere conto del fatto che la reattività cutanea dei bambini sotto i due anni è ridotta, quindi la sensibilità dei loro campioni è inferiore a quella degli adulti.

A seconda della tecnica di introduzione dell'allergene si distingue tra prick test cutanei, test di scarificazione, test intradermici e patch test. In Russia, i test antigraffio sono ancora ampiamente utilizzati per diagnosticare le allergie, anche se gli esperti dell'Accademia europea di allergia e immunologia clinica non ne consigliano l'uso a causa delle frequenti reazioni false positive e del basso contenuto informativo. Attualmente, il principale metodo raccomandato per il test cutaneo è il prick test. La tecnica del prick test è standardizzata, il che rende più facile confrontare i risultati tra loro, anche se sono stati ottenuti in cliniche diverse. Questo metodo di diagnosi delle allergie presenta numerosi vantaggi rispetto ai test cutanei di scarificazione:

> meno traumatico;

> quando viene effettuato, nell'organismo entra una quantità minima di allergeni, per cui il paziente viene sottoposto a un numero maggiore di test;

> le reazioni false positive si verificano molto meno frequentemente;

> bassa probabilità di reazioni sistemiche.

Secondo la nostra ricerca, il contenuto informativo dei prick test supera significativamente il contenuto informativo dei test di scarificazione (Fig. 24).

Considerando che il test cutaneo con il metodo del prick test non è diffuso nel nostro Paese, soffermiamoci più in dettaglio su questa tecnica. Un prick test viene eseguito sulla parte interna dell'avambraccio o sulla parte superiore della schiena. Una goccia di liquido di controllo del test, soluzione di istamina (controllo negativo e positivo) ed estratti di allergeni vengono applicati sulla pelle pretrattata con una soluzione alcolica al 70% ad una distanza di 2-2,5 cm l'uno dall'altro, ad almeno 5 mm dal polso e 3 cm dalla fossa cubitale. Utilizzando scarificatori o lancette separati, vengono applicate iniezioni superficiali attraverso la goccia ad angolo (senza

danno ai vasi sanguigni della pelle) ad una profondità non superiore a 1-1,5 mm. La reazione viene valutata dopo 10-15 minuti (se si riscontra una risposta adeguata al controllo). La risposta al trauma cutaneo non è superiore a 2 mm, quindi la prova di sensibilizzazione è una dimensione della papula superiore a 2 mm e/o un'iperemia superiore a 3 mm. L'interpretazione del risultato del prick test è riportata nella Tabella 7. È stato stabilito che un aumento dell'area di reazione durante il prick test ha una chiara correlazione con la probabilità della comparsa di un'allergia alimentare clinica.

In base al momento in cui si manifesta la reazione si può ipotizzare l'uno o l'altro tipo di base immunopatologica per lo scatenamento della reazione allergica. Le reazioni IgE-mediate si manifestano come una risposta cutanea immediata (dopo 10-30 minuti), le reazioni del complesso immunitario si manifestano dopo 6-12 ore, le reazioni ritardate - dopo 24-48 ore.

Recentemente è stata sempre più segnalata una “nuova” tecnica nello studio delle allergie alimentari di tipo ritardato: i patch test alimentari (L1opy-Palc-me81).

Secondo la tecnica, vengono eseguiti come i patch test, ma con prodotti autoctoni come grano, latte, uova, soia. Si consiglia di inserire il test pa!c nel programma di esami per i bambini affetti da dermatite atopica, esofagite ed enterocolite. Il lavoro di E. Igolina (1995) dimostra che il pab test è negativo se si sviluppa una reazione allergica entro le prime due ore dalla provocazione, e positivo in caso di reazioni tardive. In uno studio di S. Coelr (2001) è stato osservato che con un pab test positivo e titoli positivi di anticorpi IgE, la correlazione con il test provocatorio è vicina al 100%. Pertanto, il metodo è considerato molto promettente, tuttavia, al momento, la metodologia per questi campioni non è ancora standardizzata, quindi la ricerca in questa direzione richiede di essere continuata.

I test intradermici vengono utilizzati principalmente per rilevare la sensibilizzazione agli allergeni di origine batterica e fungina. Con gli allergeni alimentari, vengono eseguiti solo quando i test cutanei sono negativi o dubbi e l'anamnesi è chiaramente positiva. Tuttavia, bisogna tenere presente che questi test aumentano il rischio di complicanze.

Non c’è consenso sul valore diagnostico dei test cutanei, soprattutto in base all’allergene alimentare o alla forma clinica dell’allergia alimentare. Un sondaggio condotto su pazienti con allergie alimentari ha dimostrato che la percentuale di test cutanei positivi ai prodotti alimentari viene determinata più spesso nei bambini di età compresa tra 3 e 7 anni, un po' meno spesso nei bambini di età superiore ai 7 anni e nei bambini di età inferiore ai 3 anni. Tra le forme cliniche di allergia alimentare, la percentuale di risultati positivi dei test cutanei è determinata più spesso nei pazienti con sindrome dermorespiratoria e molto meno spesso nei pazienti con dermatite atopica. I principali problemi riscontrati durante il test cutaneo sono:

1. Risultati falsi negativi dei test, i cui motivi sono:

> assenza di reazioni IgE-mediate;

> reazioni pseudo-allergiche;

> piccola gamma di allergeni studiati;

> allergeni di bassa qualità;

> diminuzione della reattività cutanea (prima infanzia).

2. Risultati dei test falsi positivi, le cui ragioni sono:

> reazioni pseudo-allergiche (cambiamenti nelle proprietà degli allergeni, utilizzo di diverse concentrazioni dello stesso allergene);

> aumento della sensibilità cutanea;

> allergeni con reazione crociata (tipici soprattutto per allergeni appartenenti allo stesso tipo: latte - manzo; uovo - pollo).

L'analisi dei risultati dei nostri studi ha dimostrato che il significato diagnostico dei prick test cutanei e dell'anamnesi medica per i test provocatori positivi per diversi allergeni è diverso (Fig. 25). Il più alto contenuto di informazioni dei test cutanei è tipico degli allergeni a tutti gli effetti (per lo più stabili al calore), come latte vaccino, uova di gallina, pesce, grano, noci. E abbiamo trovato un valore diagnostico completamente diverso dei test cutanei per gli allergeni vegetali (per lo più termolabili), come frutta e verdura. Nei pazienti con risultati positivi ai test cutanei per questi allergeni, i test provocativi erano molto spesso negativi. Di norma, ciò è stato osservato in pazienti con concomitante sensibilizzazione ai pollini, che è spiegata dalla presenza

determinanti antigenici comuni tra allergeni pollinici e prodotti alimentari con sviluppo di reazioni allergiche crociate.

Con la scoperta delle reagine come IgE, è diventato possibile rilevare la sensibilizzazione utilizzando metodi in vitro. La diagnosi clinica delle malattie atopiche è consentita solo in laboratori specializzati. Di un certo valore sono i test cutanei effettuati sia nei pazienti esaminati che nei soggetti passivamente sensibilizzati. Per la prima volta, una reazione allergica locale fu riprodotta da Blackley nel 1873 sulla congiuntiva e sulla pelle di un paziente sensibilizzato al polline. I test allergici si basano sul fatto che applicando basse dosi di un allergene è possibile indurre una reazione antigene-anticorpo. I test sugli allergeni possono essere riprodotti sugli organi d'urto, in particolare nella rinite allergica - sulla mucosa nasale, nell'asma bronchiale - sui bronchi. Tuttavia, questi metodi richiedono molto lavoro e non sono sempre sicuri. I più accessibili sono i test cutanei e i test delle mucose. Questi ultimi sono considerati test provocatori, poiché imitano il percorso naturale di penetrazione dell'allergene nel corpo.

Test cutanei. La loro impostazione si basa sul fatto che nei pazienti con atopia, nonostante l'elevata produzione di reagine sulle mucose e nel tessuto linfoide delle vie respiratorie e gastrointestinali, una parte significativa degli anticorpi entra in circolazione. Ciò determina lo stato di sensibilizzazione di altri organi e tessuti. Lo scopo dello studio è indurre una reazione antigene-anticorpo attraverso l'applicazione locale di una bassa dose di allergene senza il rischio di disturbi funzionali nel corpo o lo sviluppo di una reazione generale. I vantaggi di questo metodo includono la possibilità di somministrazione simultanea di una quantità significativa di allergeni.

A seconda del tipo di applicazione dell'allergene, esistono diversi test: prick test e scratch test, intracutaneo e intracutaneo.

Test cutaneo con puntura- Questo è il metodo di scelta durante l'esame iniziale del paziente. Una goccia della soluzione allergenica viene aggiunta all'area pretrattata con un antisettico (lato palmo dell'avambraccio, schiena). La puntura viene eseguita con una lancetta, un ago o una cannula. Per facilitare il processo di assorbimento dell'allergene, viene utilizzata una modifica del test: dopo l'iniezione, la pelle viene sollevata e vengono praticate leggere incisioni nel sito di iniezione. La puntura deve essere superficiale per non causare sanguinamento. La distanza tra le aree del test è di almeno 4 cm Dopo ogni test, lo strumento deve essere cambiato o sterilizzato accuratamente per evitare una reazione falsa positiva. Le soluzioni utilizzate per preparare gli estratti servono come controlli (la reazione dovrebbe essere negativa) e come soluzione di istamina appena preparata per valutare la reattività cutanea.

I risultati vengono presi in considerazione dopo 20 minuti. Il criterio di valutazione è il diametro medio della vescica e della zona eritematosa.

Prova di scarificazione. Utilizzando una lancetta si praticano sulla superficie della pelle delle incisioni lunghe circa 0,5 cm nelle quali si introduce l'allergene e lo si strofina leggermente con una certa precauzione (cercando di non provocare sanguinamento). La contabilizzazione della reazione è simile a quella sopra. È importante tenere presente che con la scarificazione sono inevitabili vari gradi di danno alla pelle, quindi il processo di assorbimento degli allergeni è difficile da controllare.

Entrambi i campioni presentano numerosi vantaggi. Quindi non richiedono spese particolari, sono relativamente sicuri e indolori. Ciò è particolarmente importante quando si somministrano test ai bambini piccoli.

Test della finestra cutanea- Questa è in realtà una modifica del test di scarificazione. Vengono praticate delle incisioni sulla superficie della pelle, l'allergene viene aggiunto e coperto con un coprioggetto. Dopo 24 ore, il vetrino viene rimosso e colorato per identificare le cellule migranti. Un indicatore di una reazione allergica è l'eosinofilia superiore al 5%. Gli svantaggi del test includono il fatto che i suoi risultati non sono sempre riproducibili.

Test intradermico serve come metodo di esame primario se non vi è indicazione di un elevato grado di sensibilizzazione. Il test viene solitamente eseguito sulla spalla o sulla schiena del paziente. La pelle viene trattata con alcool e quindi circa 0,2 ml di estratto allergenico vengono iniettati rigorosamente per via intradermica. A questo scopo è conveniente utilizzare le cannule n. 18 o 20. A causa dell'elevata sensibilità della pelle, in alcuni pazienti non è possibile determinare la dose esatta dell'allergene. Inoltre, l'uso di dosi elevate di allergene è associato a traumi per il paziente. Come controlli servono: una soluzione per la preparazione dell'estratto (reazione negativa) e una soluzione di istamina appena preparata. Dopo soli 20 minuti è possibile tenere conto dei risultati della reazione. Un test positivo è accompagnato dalla formazione di una vescica con una zona di iperemia lungo la periferia. Una reazione positiva con controllo negativo è la formazione di una vescica e di una zona di iperemia con diametro rispettivamente di 7 e 15 mm. Un'analisi comparativa del diametro delle manifestazioni cutanee e delle concentrazioni di allergeni o istamina ha rivelato un certo schema.

Risultati dei test cutanei e loro interpretazione.

1. Reazioni locali. a) La reazione precoce avviene dopo 10 minuti e raggiunge il massimo dopo 20-30 minuti (diametro della vescica 1 mm, zona eritematosa - 15 mm). b) Ad una maggiore concentrazione di antigene si osserva spesso una reazione di tipo ritardato (con raffreddore da fieno, sensibilizzazione causata dal pelo degli animali). In alcuni dei soggetti esaminati è causata dalla produzione di precipitine. È stato dimostrato che gli anticorpi IgE possono provocare una reazione di tipo ritardato con formazione di eritema e gonfiore dopo 4-12 ore, accompagnati da prurito e talvolta dolore. L'analisi istologica rivela infiltrazione di eosinofili, neutrofili e cellule mononucleate insieme ad edema. Con ogni probabilità giocano un ruolo fattori come la callicreina e la FCN-A.

2. Reazioni generali. I pazienti spesso manifestano reazioni focali accompagnate da sintomi della malattia di base. Ciò è facilitato dal fatto che gli organi d'urto vengono preparati per una risposta immunitaria. Questa reazione è certamente indesiderabile. D'altro canto, la sua manifestazione può essere considerata una prova del significato patogenetico di questa sensibilizzazione.

Forme gravi di complicanze si osservano principalmente con un alto grado di sensibilizzazione. Il più pericoloso è lo shock anafilattico.

Scelta dell'allergene. In linea di principio, ci sono tre possibili opzioni di test cutaneo:

- “Test di conferma” (vengono somministrati quegli allergeni che si ritiene abbiano significato patogenetico). In questo caso, il medico fa affidamento sulla storia medica.

Il test di “ricerca” viene prescritto ai pazienti che non hanno nella loro anamnesi dati che richiedano conferma o revisione. Tuttavia, la scelta degli allergeni non è limitata.

Determinazione del grado di sensibilizzazione. Viene eseguita la cosiddetta titolazione cutanea, cioè viene introdotta una certa quantità di allergene per selezionare la dose utilizzata nel test provocatorio o la dose iniziale durante la desensibilizzazione, nonché per controllare quest'ultima. Questi test indicatori sono importanti per selezionare l'estratto e il dosaggio appropriati dell'allergene. Le reazioni non coinvolgono sostanze con le quali il paziente non è stato in contatto. È possibile utilizzare miscele di estratti. Ecco perché il test allergenico dovrebbe essere eseguito da un medico che conosca bene la storia e la natura della malattia.

Diamo un'occhiata ai gruppi più comuni di allergeni.

A) Polline: graminacee (coda di volpe, blatta, rosmarino, ctenoforo, erba di grano, ortica, festuca, piantaggine, acetosa, segale perenne); fiori (margherita, fireweed, papavero, tulipano, verga d'oro, chistyak, dente di leone, cuore di prato, ranuncolo); cereali (segale); arbusti (rosa canina, sambuco, rosa canina, lillà, nocciola); alberi (betulla, tiglio, acacia bianca, salice, pino, ontano, castagno, ciliegio).

B) Elementi dell'epidermide degli animali e dell'uomo: forfora (coniglio, gatto, cane, montone, toro, capra, maiale, cavallo); piume (oca, anatra e pollo); forfora umana.

B) Polvere domestica.

D) Zecche.

E) Muffe: Penicillium, Aspergillus, Mucor, Cladosporium, Hormodendrum, Alternaria.

E) Alimentazione: pesci d'acqua dolce (trote, lucci, carpe, tinche, lucioperca); specie ittiche marine e oceaniche (merluzzo, ruffa, aringa, sgombro); carne (maiale, manzo, agnello, cavallo, capra, pollame); latte (mucca e capra, fresco e bollito), uova (albume e tuorlo); cereali (farina e crusca di frumento, segale, orzo, avena, mais); frutta e legumi.

I seguenti fattori non specifici influenzano i risultati delle reazioni del test:

1. Rifornimento di sangue locale. Durante la stagione fredda, il paziente può manifestare disturbi vascolari, in questi casi è necessario riportare la temperatura cutanea alla normalità (a tale scopo, la pelle viene pulita con alcool o etere). Una conseguenza indesiderabile del test cutaneo è una reazione pronunciata sotto forma di iperemia.

2. Sito di introduzione dell'allergene. Si nota che le reazioni provocate sulla schiena sono più pronunciate che sulla spalla. Tuttavia, non ne consegue che la reazione sulla spalla possa essere un falso negativo. I risultati possono essere influenzati dalle condizioni atmosferiche, dall'esposizione ai raggi ultravioletti e ai raggi X.

3. Contatto naturale con l'allergene. Immediatamente dopo le reazioni causate da dosi massicce di allergene, si osserva una leggera diminuzione dei livelli anticorpali. Anche l'eliminazione a lungo termine dell'allergene (più di 1 anno) dà questo effetto. In confronto, l’esposizione prolungata ad un allergene, come durante la stagione della fioritura dell’erba, può portare ad un aumento della reazione.

4. Medicinali. Gli antistaminici in dosi appropriate possono sopprimere la reazione del test, quindi dovrebbero essere interrotti 2-7 giorni e i derivati ​​dell'adrenalina - un giorno prima del test cutaneo. L'isoprenalina somministrata per inalazione non ha effetti significativi. Anche l'effetto dell'aminofillina è debole. I corticosteroidi e l'ACTH a dosi terapeutiche hanno scarso effetto sulla risposta immediata. Solo alte dosi di corticosteroidi o corticosteroidi topici possono ridurre la reazione. È stata osservata la soppressione della fase ritardata (tardiva) della reazione da parte dei corticoidi.

5. Età. Un'analisi comparativa ha mostrato che nei bambini piccoli le reazioni cutanee sono meno pronunciate rispetto agli adulti. Ciò non è dovuto solo alle basse concentrazioni di reagina. È stato stabilito che con la sensibilizzazione cutanea passiva con lo stesso siero, la gravità delle reazioni nei bambini è molto inferiore. Un basso livello di sensibilizzazione è stato riscontrato anche nei bambini durante il 1° anno di vita. Di norma, non ci sono differenze tra i gruppi di persone giovani e di mezza età. Solo alcuni pazienti di età superiore ai 50 anni riscontrano una diminuzione della risposta all'allergene e, contemporaneamente, della concentrazione di IgE specifiche.

6. I bioritmi giornalieri possono anche influenzare le prestazioni del test cutaneo (sono state notate fluttuazioni della risposta entro il 5-71% del livello medio). Le deviazioni minime si osservano intorno alle 11:00, le massime alle 23:00. Si ritiene che questo fenomeno sia associato alla produzione di ormoni, in particolare di 17-idrossicorticosteroidi.

Se escludiamo tutti i possibili errori del metodo, i risultati positivi dei test cutanei dimostrano il fatto della sensibilizzazione, specifica in senso immunologico. Tuttavia, non sempre possono confermare la diagnosi della malattia. Anche una reazione negativa non esclude la possibilità di sensibilizzazione. Inoltre, in base alla gravità della reazione, è impossibile trarre una conclusione sul significato patogenetico dei risultati di questo test.

Una reazione falsa negativa può essere causata dai seguenti errori:

Superamento della durata di conservazione degli estratti che hanno perso l'attività allergenica;

Assenza di un allergene specifico (questo è particolarmente vero se si sospetta un'allergia alla polvere domestica);

Un metodo non fisiologico per introdurre un allergene (un certo numero di allergeni entrano nel corpo con cibo e farmaci); in caso di reazione negativa, viene prescritto un test provocatorio;

Primi stadi di sensibilizzazione (manifestazioni cliniche di allergia sono possibili già nelle prime fasi della malattia, poiché le reagine sintetizzate si legano rapidamente alla superficie cellulare; tuttavia, la concentrazione di queste ultime potrebbe non essere sufficientemente elevata da provocare una reazione positiva);

Ridotta capacità di risposta immunitaria associata all'assunzione di farmaci, all'età del paziente, ecc. In questi casi anche gli indicatori del test di controllo con istamina sono ridotti.

Una reazione falsa positiva può essere causata dai seguenti motivi:

Effetto irritante degli allergeni (sulla base dei risultati dei test cutanei su individui sani, sono state selezionate e raccomandate dosi individuali ottimali di allergeni);

Aumento della sensibilità cutanea (irritazione meccanica, orticaria, reazione di controllo positivo).

L'analisi dei dati anamnestici e dei risultati dei test cutanei ha rivelato i seguenti modelli:

1) Se il test cutaneo è positivo e l'allergene è noto, il fatto della sensibilizzazione è fuori dubbio.

2) Se la reazione è negativa e l'allergene non viene identificato, è improbabile che l'allergene in questione causi la malattia.

3) Se con un test positivo non ci sono informazioni sull'allergene, è necessario rivedere i dati dell'anamnesi e accertarsi anche del vero motivo dei risultati della reazione positiva. Esiste una condizione nota denominata “sensibilizzazione latente”. Inoltre, dopo la guarigione clinica, i pazienti spesso mantengono un test cutaneo positivo per un lungo periodo. In alcuni casi viene rilevata una “sensibilizzazione subclinica”. Dovrebbero essere prese in considerazione queste possibili ragioni per un test positivo.

Complicazioni con i test cutanei. Il pericolo principale sorge quando si applicano dosi elevate di allergene: è molto probabile lo sviluppo di reazioni tardive e generali. Insieme alla minaccia di esacerbazione delle condizioni del paziente, possono comparire tutti i sintomi delle condizioni allergiche, incluso lo shock anafilattico.

Un test provocatorio è un metodo affidabile per testare un allergene, in cui i sintomi caratteristici sono causati dall'applicazione della sostanza sospetta in modo fisiologico. Diverse versioni del test devono soddisfare due requisiti: 1 - se possibile, l'allergene testato deve essere somministrato in dosi diverse all'organo corrispondente, 2 - la valutazione della reazione antigene-anticorpo deve essere obiettiva.

La condizione per l'esecuzione del test è l'assenza di contatto naturale con l'allergene, altrimenti ciò complicherebbe notevolmente l'interpretazione dei risultati. È consigliabile che il paziente non sappia quale allergene gli viene somministrato (metodo “cieco”). Il controllo è un test che utilizza una soluzione per preparare l'estratto (placebo).

Un test per escludere il sospetto allergene responsabile della reazione atopica. Solitamente basato su dati anamnestici. Questo test viene utilizzato per diagnosticare gli stadi avanzati della malattia per determinare le possibilità di recupero del paziente.