Tutto sui medicinali. Interferoni e loro ruolo nella medicina clinica. Dalla cura dell'influenza alla cura delle infezioni virali e batteriche complesse Interferone alfa 2b farmaci ricombinanti umani

Incluso nei preparativi

Incluso nell'elenco (Ordinanza del Governo della Federazione Russa n. 2782-r del 30 dicembre 2014):

VED

ONLS

ATX:

L.03.A.B.05 Interferone alfa-2b

Farmacodinamica:

Interferone. È un ricombinante altamente purificato con un peso molecolare di 19.300 dalton. Derivato da un clone Escherichia coli ibridando plasmidi batterici con il gene dei leucociti umani che codifica per la sintesi dell'interferone. A differenza dell'interferone, l'alfa-2a si trova in posizione 23.

Ha un effetto antivirale, dovuto all'interazione con specifici recettori di membrana e all'induzione della sintesi dell'RNA e, in definitiva, delle proteine. Questi ultimi, a loro volta, impediscono la normale riproduzione del virus o la sua diffusione.

Ha attività immunomodulante, che è associata all'attivazione della fagocitosi, alla stimolazione della formazione di anticorpi e linfochine.

Ha un effetto antiproliferativo sulle cellule tumorali.

Il farmaco aumenta l'attività fagocitaria dei macrofagi e potenzia l'effetto citotossico dei linfociti.

Farmacocinetica:

Penetra nel flusso sanguigno sistemico attraverso la mucosa delle vie respiratorie, subisce una degradazione nel corpo e viene parzialmente escreto immodificato, principalmente attraverso i reni. L'uso locale per il trattamento delle infezioni virali fornisce un'alta concentrazione di interferone nel sito dell'infiammazione. Metabolizzato dal fegato, l'emivita è di 2-6 ore.

Indicazioni:

Epatite cronica B;

Leucemia a cellule capellute;

Carcinoma a cellule renali;

Pelle T -linfoma cellulare (micosi fungoide e sindrome di Sezary);

IN epatite virale B;

IN epatite C virale attiva;

Leucemia mieloide cronica;

Sarcoma di Kaposi dovuto all'AIDS;

Melanoma maligno;

- trombocitosi primaria (essenziale) e secondaria;

- forma transitoria di leucemia granulocitica cronica e mielofibrosi;

- mieloma multiplo;

Cancro al rene;

- reticolosarcoma;

- sclerosi multipla;

- prevenzione e trattamento dell'influenza e delle infezioni virali respiratorie acute.

I.B15-B19.B16 Epatite acuta B

I.B15-B19.B18.1 Epatite virale cronica B senza agente delta

I.B15-B19.B18.2 Epatite virale cronica C

I.B20-B24.B21.0 Malattia causata dall'HIV con manifestazioni del sarcoma di Kaposi

II.C43-C44.C43.9 Melanoma maligno della pelle, non specificato

II.C64-C68.C64 Tumori maligni del rene diverso dalla pelvi renale

II.C81-C96.C84 Linfomi a cellule T periferici e cutanei

II.C81-C96.C84.0 Micosi fungoide

II.C81-C96.C84.1 Malattia di Sézary

II.C81-C96.C91.4 Leucemia a cellule capellute (reticoloendoteliosi leucemica)

II.C81-C96.C92.1 Leucemia mieloide cronica

Controindicazioni:

D cirrosi epatica non compensata;

Psicosi;

P maggiore sensibilità all'interferone alfa-2 B;

- gravi malattie cardiovascolari;

T grave depressione;

UN dipendenza da alcol o droghe;

- Malattie autoimmuni;

- infarto miocardico acuto;

- gravi disturbi del sistema ematopoietico;

-epilessia e/o altri disturbi del sistema nervoso centrale;

-epatite cronica in pazienti sottoposti o recentemente sottoposti a terapia immunosoppressiva (ad eccezione del pretrattamento a breve termine con steroidi).

Accuratamente:

-malattie del fegato;

Z nefropatia;

-violazione dell'ematopoiesi del midollo osseo;

-tendenza alle malattie autoimmuni;

-tendenza ai tentativi di suicidio.

Gravidanza e allattamento:

Raccomandazione FDA categoria C. Nessun dato di sicurezza disponibile. Non usare! L'uso durante la gravidanza è possibile solo se il potenziale beneficio per la madre supera il potenziale danno per il bambino.

Durante l'utilizzo del farmaco è necessario utilizzare un metodo contraccettivo.

Non ci sono informazioni sulla penetrazione nel latte materno. Non usare durante l'allattamento.

Istruzioni per l'uso e il dosaggio:

Somministrato per via endovenosa o sottocutanea. La dose viene stabilita individualmente in base alla diagnosi e alle caratteristiche individuali del paziente.

Somministrazione sottocutanea alla dose di 0,5-1 mcg/kg una volta alla settimana per 6 mesi. La dose viene selezionata tenendo conto dell'efficacia e della sicurezza previste. Se dopo 6 mesi l'RNA del virus viene eliminato dal siero, il trattamento viene continuato fino a un anno. Se durante il trattamento si verificano reazioni indesiderate, la dose viene ridotta di 2 volte. Se gli effetti indesiderati persistono o si ripresentano dopo la modifica della dose, il trattamento viene interrotto. Si raccomanda inoltre di ridurre la dose se la conta dei neutrofili diminuisce a meno di 0,75×10 9 /l o la conta delle piastrine diminuisce a meno di 50×10 9 /l. La terapia viene interrotta quando il numero dei neutrofili scende a meno di 0,5×10 9 /l o delle piastrine a meno di 25×10 9 /l. In caso di grave disfunzione renale (clearance inferiore a 50 ml/min), i pazienti devono essere costantemente monitorati. Se necessario, la dose settimanale del farmaco viene ridotta. Non è richiesto alcun aggiustamento della dose in base all’età.

Preparazione della soluzione: il contenuto polveroso del flacone viene sciolto in 0,7 ml di acqua per preparazioni iniettabili, il flacone viene agitato delicatamente fino a completa dissoluzione della polvere. La soluzione finita deve essere ispezionata prima della somministrazione; Se il colore cambia, non deve essere utilizzato. Per la somministrazione utilizzare fino a 0,5 ml di soluzione, il resto viene smaltito.

Per il trattamento dell'influenza e dell'ARVI- aerosol per uso topico 100.000 UI, somministrato 7 volte al giorno, ogni 2 ore (dose giornaliera - fino a 20.000 UI) nei primi due giorni di malattia, poi 3 volte al giorno (dose giornaliera - fino a 10.000 UI) per cinque giorni o fino alla completa scomparsa dei sintomi della malattia.

La terapia con interferone viene effettuata sullo sfondo della terapia sintomatica tradizionale, compreso l'uso di farmaci antinfiammatori non steroidei (,) quando la temperatura supera i 38,5 ° C, antistaminici (diazolina, suprastin, tavegil), antitosse (codelac), farmaci mucolitici (medicinali per la tosse), agenti rinforzanti generali (gluconato di calcio, vitamine).

Effetti collaterali:

Dal tratto gastrointestinale: diminuzione dell'appetito, vomito, stitichezza, secchezza delle fauci, lieve dolore addominale, nausea, diarrea,disturbo del gusto, perdita di peso corporeo, lievi cambiamenti negli indicatori di funzionalità epatica.

Dal sistema nervoso: vertigini, disturbi del sonno, ansia, aggressività, depressione, neuropatia, tendenze suicide, deterioramento mentale,disturbi della memoria, nervosismo, euforia, parestesia, tremore, sonnolenza.

Dal sistema circolatorio: ipotensione arteriosa o ipertensione, disturbi del sistema cardiovascolare, infarto del miocardio, trombocitopenia, tachicardia,aritmia, malattia coronarica, leucopenia, granulocitopenia.

Dal sistema respiratorio: tosse, polmonite, dolore toracico,lieve mancanza di respiro, edema polmonare.

Dalla pelle: alopecia reversibile, prurito.

Altri: anticorpi contro interferoni naturali o ricombinanti, rigidità muscolare, sintomi simil-influenzali.

Overdose:

Nessun dato.

Interazione:

Il farmaco inibisce il metabolismo della teofillina.

Istruzioni speciali:

Durante il periodo di utilizzo del farmaco è necessario monitorare lo stato mentale e neurologico del paziente.

Nei pazienti con malattie del sistema cardiovascolare, è possibile l'aritmia. Se l'aritmia non diminuisce o non aumenta, la dose deve essere ridotta di 2 volte o il trattamento deve essere interrotto.

In caso di grave soppressione dell'ematopoiesi del midollo osseo, è necessario un esame regolare della composizione del sangue periferico.

Impatto sulla capacità di guidare veicoli e altri dispositivi tecnici

Il farmaco sotto forma di aerosol non influisce sulla capacità di guidare veicoli e mantenere i meccanismi di movimento.

Istruzioni

La composizione dei preparati di interferone dipende dalla loro forma di rilascio.

Modulo per il rilascio

I preparati di interferone hanno le seguenti forme di rilascio:

• polvere liofilizzata per la preparazione di gocce oculari e nasali, soluzione iniettabile;
• soluzione iniettabile;
• lacrime;
• pellicole per gli occhi;
• gocce e spray nasali;
• unguento;
• gel dermatologico;
• liposomi;
• aerosol;
• soluzione orale;
• supposte rettali;
• supposte vaginali;
• impianti;
• microclisteri;
• compresse (le compresse di interferone sono disponibili con il marchio Entalferon).

effetto farmacologico

I farmaci IFN appartengono al gruppo di farmaci con effetti antivirali e immunomodulatori.

Tutti gli IFN hanno effetti antivirali e antitumorali. Non meno importante è la loro proprietà di azione stimolante. macrofagi - cellule che svolgono un ruolo importante nell'iniziazione.

Gli IFN contribuiscono ad aumentare la resistenza dell'organismo alla penetrazione virus e blocca anche la riproduzione virus quando penetrano nella cellula. Quest'ultimo è dovuto alla capacità di soppressione dell'IFN traduzione dell’RNA messaggero del virus .

Tuttavia, l'effetto antivirale dell'IFN non è diretto contro alcuni virus , cioè gli IFN non sono caratterizzati dalla specificità del virus. Questo è esattamente ciò che spiega la loro versatilità e l’ampia gamma di attività antivirale.

Interferone: che cos'è?

Gli interferoni sono una classe con proprietà simili glicoproteine , che sono prodotti dalle cellule dei vertebrati in risposta all'influenza di vari tipi di induttori, sia di natura virale che non virale.

Secondo Wikipedia, affinché una sostanza biologicamente attiva possa essere qualificata come interferone, deve essere di natura proteica e avere un pronunciato attività antivirale in relazione a vari virus , come minimo, in cellule omologhe (simili), "mediate da processi metabolici cellulari tra cui l'RNA e la sintesi proteica".

La classificazione degli IFN proposta dall'OMS e dal Comitato Interferone si basa sulle differenze nelle loro proprietà antigeniche, fisiche, chimiche e biologiche. Inoltre, tiene conto della loro specie e origine cellulare.

In base all'antigenicità (specificità dell'antigene), gli IFN sono solitamente suddivisi in acido-stabili e acido-labili. Quelli acido-resistenti includono gli interferoni alfa e beta (sono anche chiamati IFN di tipo I). L'interferone gamma (γ-IFN) è acido labile.

Viene prodotto l'α-IFN leucociti del sangue periferico (leucociti di tipo B e T), quindi in precedenza era designato come interferone leucocitario . Attualmente ne esistono almeno 14 varietà.

Viene prodotto il β-IFN fibroblasti , motivo per cui è anche chiamato fibroblastico .

La precedente designazione di γ-IFN è interferone immunitario , è prodotto da stimolato Linfociti di tipo T , cellule NK (assassini normali (naturali); dall'inglese “natural killer”) e (presumibilmente) macrofagi .

Proprietà di base e meccanismo d'azione dell'IFN

Senza eccezione, tutti gli IFN sono caratterizzati da un'attività multifunzionale contro le cellule bersaglio. La loro proprietà più comune è la capacità di indurre in loro stato antivirale .

L'interferone è usato come agente terapeutico e profilattico per vari infezione virale . Una caratteristica dei farmaci IFN è che il loro effetto si indebolisce con iniezioni ripetute.

Il meccanismo d'azione dell'IFN è legato alla sua capacità di inibire infezione virale . Come risultato del trattamento con farmaci interferone nel corpo del paziente in giro fonte di infezione si forma una sorta di barriera resistente a virus cellule non infette, che impediscono l’ulteriore diffusione dell’infezione.

Interagendo con le cellule ancora intatte (intese), impedisce l'attuazione del ciclo riproduttivo virus a causa dell'attivazione di alcuni enzimi cellulari ( chinasi proteiche ).

Le funzioni più importanti degli interferoni sono la capacità di sopprimere emopoiesi ; modulare la risposta immunitaria dell'organismo e la risposta infiammatoria; regolare i processi di proliferazione e differenziazione cellulare; sopprimono la crescita e impediscono la riproduzione cellule virali ; stimolare l'espressione della superficie antigeni ; sopprimere le singole funzioni Leucociti di tipo B e T , stimolare l'attività cellule NK eccetera..

Uso dell'IFN in biotecnologia

Sviluppo di metodi di sintesi e purificazione altamente efficienti leucociti e interferoni ricombinanti in quantità sufficienti per la produzione di farmaci, ha reso possibile l'uso di farmaci IFN per il trattamento dei pazienti con diagnosi Epatite virale .

Una caratteristica distintiva degli IFN ricombinanti è che vengono prodotti al di fuori del corpo umano.

Per esempio, interferone beta-1a ricombinante (IFN beta-1a) sono ottenuti da cellule di mammifero (in particolare da cellule ovariche di criceto cinese) e hanno proprietà simili interferone beta-1b (IFN β-1b) prodotto da un membro della famiglia delle Enterobacteriaceae coli (Escherichia coli).

Farmaci induttori dell'interferone: cosa sono?

Gli induttori dell'IFN sono farmaci che non contengono interferone, ma allo stesso tempo ne stimolano la produzione.

Farmacodinamica e farmacocinetica

Il principale effetto biologico dell'α-IFN è inibizione della sintesi proteica virale . Lo stato antivirale della cellula si sviluppa entro diverse ore dalla somministrazione del farmaco o dall'induzione della produzione di IFN nell'organismo.

Tuttavia, l’IFN non ha alcun effetto nelle fasi iniziali ciclo replicativo cioè nella fase di adsorbimento, penetrazione virus nella cellula (penetrazione) e rilascio del componente interno virus in procinto di “spogliarlo”.

Azione antivirus L'α-IFN appare anche quando le cellule sono infette RNA infettivi . L'IFN non penetra nella cellula, ma interagisce solo con recettori specifici membrane cellulari (gangliosidi o strutture simili contenenti oligozuccheri ).

Il meccanismo dell'attività dell'IFN alfa ricorda l'azione di alcuni ormoni glicopeptidici . Stimola l'attività geni , alcuni dei quali sono coinvolti nella codificazione della formazione dei prodotti con direct effetto antivirale .

Interferoni β avere anche effetto antivirale , che è associato a diversi meccanismi d'azione. Interferone beta attiva la NO sintetasi, che a sua volta aiuta ad aumentare la concentrazione di ossido nitrico all'interno della cellula. Quest'ultimo svolge un ruolo chiave nella soppressione della riproduzione virus .

Il β-IFN attiva le funzioni effettrici secondarie assassini naturaliV , Linfociti di tipo B , monociti del sangue , macrofagi tissutali (fagociti mononucleari) e neutrofilo , che sono caratterizzati da citotossicità anticorpo-dipendente e anticorpo-indipendente.

Inoltre, il β-IFN blocca il rilascio del componente interno virus e interrompe i processi di metilazione Virus dell'RNA .

Il γ-IFN è coinvolto nella regolazione della risposta immunitaria e ne regola l'espressione reazioni infiammatorie. Nonostante il fatto che sia indipendente antivirus E effetto antitumorale , interferone gamma molto debole. Allo stesso tempo, migliora significativamente l’attività dell’α- e del β-IFN.

Dopo la somministrazione parenterale, la concentrazione massima di IFN si osserva dopo 3-12 ore e l'indicatore di biodisponibilità è del 100% (sia dopo l'iniezione sotto la pelle che dopo l'iniezione nel muscolo).

L’emivita T½ varia da 2 a 7 ore. Tracce di concentrazione di IFN nel plasma sanguigno non sono rilevabili dopo 16-24 ore.

Indicazioni per l'uso

L'IFN è destinato al trattamento malattie virali , Impressionante vie respiratorie .

Inoltre, ai pazienti con forme croniche di interferone vengono prescritti preparati epatite e delta .

Per la cura malattie virali e, in particolare, viene utilizzato prevalentemente l'IFN-α (entrambe le sue forme, IFN-alfa 2b e IFN-alfa 2a). Il “gold standard” del trattamento epatite C sono considerati interferoni pegilati alfa-2b e alfa-2a. In confronto, gli interferoni convenzionali sono meno efficaci.

I polimorfismi genetici osservati nel gene IL28B, responsabile della codifica dell'IFN lambda-3, causano differenze significative nell'effetto del trattamento.

Pazienti con genotipo 1 epatite C con alleli comuni del gene specificato hanno maggiori probabilità di ottenere risultati terapeutici più prolungati e pronunciati rispetto ad altri pazienti.

L'IFN viene spesso prescritto anche ai pazienti con malattie oncologiche : maligno , tumori endocrini del pancreas , linfoma non-Hodgkin , tumori carcinoidi ; Sarcoma di Kaposi , condizionato; leucemia a cellule capellute ,mieloma multiplo , cancro al rene eccetera..

Controindicazioni

L'interferone non è prescritto ai pazienti con ipersensibilità ad esso, così come ai bambini e agli adolescenti che ne soffrono gravi disturbi mentali E disturbi del sistema nervoso , che sono accompagnati da pensieri di suicidio e tentativi di suicidio, gravi e prolungati.

In combinazione con farmaco antivirale ribavirina L'IFN è controindicato nei pazienti con diagnosi di compromissione grave rene (condizioni in cui la CC è inferiore a 50 ml/min).

I preparati a base di interferone sono controindicati (nei casi in cui la terapia appropriata non produce l'effetto clinico atteso).

Effetti collaterali

L'interferone appartiene alla categoria dei farmaci che possono causare un gran numero di reazioni avverse da vari sistemi e organi. Nella maggior parte dei casi, sono una conseguenza della somministrazione di interferone per via endovenosa, sottocutanea o intramuscolare, ma possono anche essere provocati da altre forme farmaceutiche del farmaco.

Le reazioni avverse più comuni legate all'assunzione di IFN sono:

• anoressia;
• nausea;
• brividi;
• tremore nel corpo.

Un po' meno comuni sono il vomito, l'aumento della pressione sanguigna, la sensazione di secchezza delle fauci, la caduta dei capelli (), astenia ; sintomi non specifici che ricordano sintomi influenzali ; mal di schiena, stati depressivi , dolore muscoloscheletrico , pensieri di suicidio e tentato suicidio, malessere generale, alterazione del gusto e della concentrazione, aumento dell'irritabilità, disturbi del sonno (spesso), ipotensione arteriosa , confusione.

Gli effetti collaterali rari includono: dolore nella parte destra dell'addome superiore, eruzioni cutanee sul corpo (eritematose e maculopapulari), aumento del nervosismo, dolore e grave infiammazione nel sito di iniezione del farmaco, infezione virale secondaria (compresa l'infezione virus dell'herpes simplex ), aumento della secchezza della pelle, , dolore agli occhi , congiuntivite , visione offuscata, disfunzione ghiandole lacrimali , ansia, labilità dell'umore; disturbi psicotici , inclusa una maggiore aggressività, ecc.; ipertermia , sintomi dispeptici , disturbi respiratori, perdita di peso, feci non formate, iper- o ipotiroidismo , disturbi dell'udito (fino alla sua completa perdita), formazione di infiltrati nei polmoni, aumento dell'appetito, sanguinamento delle gengive alle estremità, dispnea , disfunzione renale e sviluppo di insufficienza renale , ischemia periferica , iperuricemia , neuropatia eccetera..

Il trattamento con farmaci IFN può causare disfunzione riproduttiva . Studi sui primati hanno dimostrato che l'interferone interrompe il ciclo mestruale nelle donne . Inoltre, nelle donne in trattamento con farmaci IFN-α, il livello di .

Per questo motivo, se viene prescritto l'interferone, dovrebbero usarlo le donne in età fertile contraccezione di barriera . Si consiglia inoltre agli uomini in età riproduttiva di essere informati sui potenziali effetti collaterali.

In rari casi, il trattamento con interferone può essere accompagnato da disturbi oftalmologici, che si esprimono come emorragie nella retina dell'occhio , retinopatia (incluso ma non limitato a edema maculare ), cambiamenti focali nella retina, diminuzione dell'acuità visiva e/o campi visivi limitati, papilledema , neurite del nervo ottico (secondo cranico). , ostruzione arteriosa O vene retiniche .

A volte, durante l'assunzione di interferone, possono svilupparsi iperglicemia , sintomi della sindrome nefrosica , . Nei pazienti con diabete mellito il quadro clinico della malattia può peggiorare.

La possibilità che si verifichi non può essere esclusa emorragia cerebrovascolare , eritema multiforme , necrosi dei tessuti nel sito di iniezione, ischemia cardiaca e cerebrovascolare , ipertrigliceridermia , sarcoidosi (o aggravamento del suo decorso), Le sindromi di Lyell E Stevens-Johnson .

L'uso dell'interferone in monoterapia o in combinazione con Ribavirina in casi isolati può provocare anemia aplastica (AA) o anche PAKKM ( aplasia completa del midollo osseo rosso ).

Ci sono stati anche casi in cui, durante il trattamento con farmaci a base di interferone, un paziente ha sviluppato vari disturbi autoimmune E disturbi immunomediati (Compreso La malattia di Werlhof E Malattia di Moschkowitz ).

Interferone, istruzioni per l'uso (metodo e dosaggio)

Le istruzioni per l'uso degli interferoni alfa, beta e gamma indicano che prima di prescrivere il farmaco al paziente, si consiglia di determinare la sensibilità del paziente ad esso , che ha causato la malattia.

Il metodo di somministrazione dell'interferone leucocitario umano è determinato in base alla diagnosi data al paziente. Nella maggior parte dei casi, viene prescritto come iniezione sottocutanea, ma in alcuni casi il farmaco può essere iniettato nel muscolo o nella vena.

La dose di trattamento, la dose di mantenimento e la durata del trattamento vengono determinate in base alla situazione clinica e alla risposta del paziente alla terapia prescrittagli.

Per interferone “per bambini” intendiamo un farmaco sotto forma di supposte, gocce e unguenti.

Le istruzioni per l'uso dell'interferone per i bambini raccomandano l'uso di questo farmaco sia come agente terapeutico che come agente profilattico. La dose per neonati e bambini più grandi viene selezionata dal medico curante.

A scopo preventivo, l'INF viene utilizzato sotto forma di soluzione, per la preparazione della quale viene utilizzata acqua distillata o bollita a temperatura ambiente. La soluzione finita è colorata di rosso e opalescente. Dovrebbe essere conservato in frigorifero per non più di 24-48 ore. Il farmaco viene instillato nel naso di bambini e adulti.

A malattie oftalmiche virali il farmaco viene prescritto sotto forma di collirio.

Non appena la gravità dei sintomi della malattia diminuisce, il volume delle instillazioni deve essere ridotto a una goccia. Il corso del trattamento dura da 7 a 10 giorni.

Per il trattamento delle lesioni causate da virus dell'herpes , l'unguento viene applicato in uno strato sottile sulle zone interessate della pelle e delle mucose due volte al giorno, mantenendo intervalli di 12 ore. Il corso del trattamento dura da 3 a 5 giorni (fino al completo ripristino dell'integrità della pelle e delle mucose danneggiate).

Per la prevenzione infezioni respiratorie acute e deve essere lubrificato con un unguento passaggi nasali . La frequenza delle procedure durante la 1a e la 3a settimana del corso è 2 volte al giorno. Si consiglia di fare una pausa durante la 2a settimana. A scopo preventivo, l'interferone dovrebbe essere utilizzato durante l'intero periodo epidemie di malattie respiratorie .

La durata del corso di riabilitazione nei bambini che spesso sperimentano infezioni virali-batteriche ricorrenti delle vie respiratorie , Organi ORL , infezione ricorrente , causato virus dell'herpes simplex , è di due mesi.

Come diluire e come usare l'interferone nelle fiale?

Le istruzioni per l'uso dell'interferone in fiale indicano che prima dell'uso è necessario aprire la fiala, versare acqua (distillata o bollita) a temperatura ambiente fino al segno sulla fiala corrispondente a 2 ml.

Il contenuto viene agitato delicatamente fino a completa dissoluzione. La soluzione viene iniettata in ciascuno cavità nasale due gocce al giorno, cinque gocce, mantenendo intervalli di almeno sei ore tra le somministrazioni.

A scopo terapeutico, l'IFN inizia ad essere assunto alla comparsa dei primi sintomi. sintomi influenzali . Prima il paziente inizia a prenderlo, maggiore è l'efficacia del farmaco.

Il metodo di inalazione (attraverso il naso o la bocca) è considerato il più efficace. Per un'inalazione si consiglia di assumere il contenuto di tre fiale del farmaco, sciolto in 10 ml di acqua.

L'acqua viene preriscaldata ad una temperatura non superiore a +37 °C. Le procedure di inalazione vengono eseguite due volte al giorno, mantenendo un intervallo di almeno una o due ore tra di loro.

Quando spruzzato o instillato, il contenuto della fiala viene sciolto in due ml di acqua e 0,25 ml (o cinque gocce) vengono somministrati in ciascun passaggio nasale da tre a sei volte al giorno. La durata del trattamento è di 2-3 giorni.

A scopo preventivo, le gocce nasali per i bambini vengono instillate (5 gocce) due volte al giorno; nella fase iniziale della malattia, la frequenza delle instillazioni viene aumentata: il farmaco deve essere somministrato almeno da cinque a sei volte al giorno ogni ora o due .

Molte persone sono interessate a sapere se la soluzione di interferone può essere gocciolata negli occhi. La risposta a questa domanda è sì.

Overdose

Non sono stati descritti casi di sovradosaggio di interferone.

Interazione

β-IFN è compatibile con farmaci corticosteroidi e ACTH. Non deve essere assunto durante il trattamento farmaci mielosoppressivi , incluso citostatici (questo potrebbe causare effetto additivo ).

Il beta-IFN deve essere somministrato con cautela con agenti la cui eliminazione dipende in gran parte sistema del citocromo P450 (farmaci antiepilettici , Alcuni antidepressivi e così via.).

Non dovresti prendere α-IFN e Telbivudin . L'uso simultaneo di α-IFN provoca un reciproco potenziamento dell'azione in relazione a. Se utilizzato insieme a fosfazide possono aumentare reciprocamente mielotossicità entrambi i farmaci (si consiglia di monitorare attentamente le variazioni della quantità granulociti E;

A sepsi ;

per il trattamento dei bambini infezione virale (ad esempio, o);

per la cura epatite virale cronica .

L'IFN viene utilizzato anche in terapia, il cui scopo è la riabilitazione di persone frequentemente malate. Infezioni respiratorie bambini.

L'opzione più ottimale per i bambini sono le gocce nasali: se usato in questo modo, l'interferone non penetra nel tratto gastrointestinale (prima di diluire il farmaco per il naso, l'acqua deve essere riscaldata ad una temperatura di 37°C).

Per i neonati, l'interferone viene prescritto sotto forma di supposte (150mila UI). Le supposte per i bambini devono essere somministrate una alla volta 2 volte al giorno, mantenendo intervalli di 12 ore tra le somministrazioni. Il corso del trattamento è di 5 giorni. Per curare completamente un bambino ARVI Di norma, un corso è sufficiente.

Per il trattamento, dovresti assumere 0,5 g di unguento due volte al giorno. Il trattamento dura in media 2 settimane. Nelle successive 2-4 settimane, l'unguento viene utilizzato 3 volte a settimana.

Numerose recensioni positive sul farmaco indicano che in questa forma di dosaggio si è affermato anche come trattamento efficace per stomatite E tonsille infiammate . Le inalazioni di interferone per i bambini non sono meno efficaci.

L'effetto dell'uso del farmaco aumenta notevolmente se per somministrarlo si utilizza un nebulizzatore (è necessario utilizzare un dispositivo che nebulizzi particelle con un diametro superiore a 5 micron). Le inalazioni attraverso un nebulizzatore hanno le loro specifiche.

Innanzitutto, l'interferone deve essere inalato attraverso il naso. In secondo luogo, prima di utilizzare l'apparecchio, è necessario disattivare la funzione di riscaldamento (l'IFN è una proteina; a temperature superiori a 37°C viene distrutta).

Per l'inalazione in un nebulizzatore, il contenuto di una fiala viene diluito in 2-3 ml di acqua distillata o minerale (per questi scopi è possibile utilizzare anche la soluzione salina). Il volume risultante è sufficiente per una procedura. La frequenza delle procedure durante il giorno va da 2 a 4.

È importante ricordare che il trattamento a lungo termine dei bambini con interferone non è raccomandato, poiché si sviluppa dipendenza e, quindi, l'effetto atteso non si sviluppa.

Interferone durante la gravidanza

Un'eccezione può essere rappresentata dai casi in cui il beneficio atteso della terapia per la futura mamma supera il rischio di reazioni avverse e effetti dannosi sullo sviluppo del feto.

Non si può escludere la possibilità di isolare componenti ricombinanti dell’IFN nel latte materno. A causa della possibilità di esposizione del feto attraverso il latte, l'IFN non è prescritto alle donne che allattano.

Come ultima risorsa, quando non è possibile evitare la somministrazione di IFN, si consiglia alla donna di non allattare durante la terapia. Per mitigare gli effetti collaterali del farmaco (la comparsa di sintomi simil-influenzali), si consiglia la somministrazione simultanea con IFN. .

L'invenzione riguarda l'ingegneria genetica, la biotecnologia, la medicina, la farmacologia. Un nuovo DNA plasmidico ricombinante multicopia pSX50, che codifica la sintesi dell'interferone alfa-2b dei leucociti umani, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore della trascrizione. Come risultato della trasformazione delle cellule del ceppo ricevente E. coli BL21 con DNA plasmidico ricombinante pSX50, è stato ottenuto il ceppo E. coli SX50, un produttore di interferone alfa-2b umano leucocitario ricombinante con una produttività fino a 0,9-1,0 g di interferone alfa-2b da 1 litro di terreno di coltura. Il metodo per la produzione dell'interferone alfa-2b ricombinante si basa sull'uso di un ceppo ricombinante creato di E. coli SX50 e prevede la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un contenuto ridotto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi nel processo di biosintesi , distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione della proteina aggregata in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato, seguita da rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e sua purificazione mediante purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su Resine chelanti Sepharose Fast Flow immobilizzate con ioni Cu +2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come Sephsrose Fast Flow SM e cromatografia per filtrazione su gel su resine tipo Superdex 75. Il metodo consente di ottenere una sostanza di interferone superiore al 99% purezza secondo elettroforesi in condizioni riducenti e non riducenti durante la colorazione di gel con argento e superiore al 98% secondo RF HPLC e privo di pirogeni (test LAL) in quantità di almeno 400-800 mg per 1 litro di terreno di coltura. 3 n. e 3 posizioni salariali, 6 ill.

Disegni per il brevetto RF 2242516

L'invenzione riguarda i medicinali geneticamente modificati ottenuti mediante biotecnologia, vale a dire i metodi per la produzione industriale dell'interferone alfa-2b ricombinante dei leucociti umani per scopi medici (di seguito denominato interferone), nonché i ceppi produttori di Escherichia coli (E. coli) e DNA plasmidico, che codifica per la sintesi dell'interferone.

Gli interferoni sono molecole proteiche con un peso molecolare compreso tra 15.000 e 21.000 dalton prodotte e secrete dalle cellule in risposta a infezioni virali o altri agenti patogeni. Esistono tre gruppi principali di interferoni: alfa, beta e gamma. Questi gruppi stessi non sono omogenei e possono contenere diverse specie molecolari di interferone. Pertanto, sono state identificate più di 14 varietà genetiche di interferone alfa, che sono interessanti e ampiamente utilizzate in medicina come agenti antivirali, antiproliferativi e immunomodulatori.

Sono noti metodi per ottenere interferone leucocitario umano da leucociti di sangue di donatori umani indotti da virus e altri induttori (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Lo svantaggio principale di questi metodi per la produzione di interferoni è la probabilità di contaminazione del prodotto finale con virus umani, come il virus dell'epatite B e C, il virus dell'immunodeficienza, ecc.

Attualmente, il metodo di produzione dell'interferone mediante sintesi microbiologica è stato riconosciuto come più promettente, il che consente di ottenere il prodotto target con una resa significativamente più elevata da materiali di partenza relativamente economici. Gli approcci qui utilizzati consentono di creare varianti di un gene strutturale ottimali per l’espressione batterica, nonché elementi regolatori che ne controllano l’espressione.

Come microrganismi di origine vengono utilizzati vari tipi di ceppi di Pichia pastoris, Pseudomonas putida ed Escherichia coli.

Lo svantaggio di utilizzare P. pastoris come produttore di interferone (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //High level express of human IFN-2b in Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), Le condizioni di fermentazione di questo tipo di lievito sono estremamente difficili, la necessità di mantenere rigorosamente la concentrazione dell'induttore, in particolare del metanolo, durante il processo di biosintesi. Lo svantaggio di usare Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) è la complessità del processo di fermentazione a basso livello di espressione (10 mg di interferone per 1 litro di terreno di coltura). Più produttivo è l'utilizzo di ceppi di Escherichia coli (Semin. Oncol., 1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Sono noti un gran numero di plasmidi e ceppi di E. coli creati sulla loro base che esprimono interferone: ceppi di E. coli ATCC 31633 e 31644 con plasmidi Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 o Z-pBR 322(Pstl)/ HclN SN 35 -AHL6 (SU 1764515), ceppo di E. coli pINF-AP2 (SU 1312961), ceppo di E. coli pINF-F-Pa (AU 1312962), ceppo di E. Coli SG 20050 con plasmide p280/21FN (Kravchenko V.V. e altri, Chimica bioorganica, 1987, v. 13, n. 9, pp. 1186-1193), ceppo E. coli SG 20050 con plasmide pINF14 (SU 1703691), ceppo E. coli SG 20050 con plasmide pINF16 (RU 2054041) e così via. Lo svantaggio delle tecnologie basate sull'uso di questi ceppi è la loro instabilità, nonché il livello insufficiente di espressione dell'interferone.

Oltre alle caratteristiche dei ceppi utilizzati, l'efficienza del processo dipende in gran parte dalla tecnologia utilizzata per l'isolamento e la purificazione dell'interferone.

Esiste un metodo noto per produrre interferone, che include la coltura di cellule Ps. putida, distruzione della biomassa, trattamento con polietilenimmina, frazionamento con solfato di ammonio, cromatografia idrofobica su fenilsilocromo C-80, frazionamento a pH del lisato, sua concentrazione e diafiltrazione, cromatografia a scambio ionico su cellulosa DE-52, eluizione in gradiente di pH, ione cromatografia a scambio dell'eluente risultante su cellulosa SM -52, concentrazione mediante passaggio attraverso una cassetta per filtri e filtrazione su gel su Sephadex G-100 (SU 1640996). Lo svantaggio di questo metodo, oltre alla complessa fermentazione in più fasi, è il processo in più fasi per ottenere il prodotto finale.

Esiste anche un metodo noto per produrre interferone, che prevede la coltivazione del ceppo di E. coli SG 20050/pIF16 in brodo LB in beute in un agitatore termostatato, la centrifugazione della biomassa, il lavaggio con una soluzione tampone e un trattamento ad ultrasuoni per distruggere le cellule. Il lisato risultante viene centrifugato, lavato con una soluzione di urea 3M in tampone, sciolto in una soluzione di cloruro di guanidina in tampone, trattato con ultrasuoni, centrifugato, solfitolisi ossidativa, dialisi contro urea 8 M, rinaturazione e cromatografia finale a due stadi su CM- 52 cellulosa e Sephadex G-50 (RU 2054041). Gli svantaggi di questo metodo sono la produttività relativamente bassa delle fasi principali del processo di isolamento e purificazione. Ciò vale soprattutto per il trattamento ad ultrasuoni del prodotto, la dialisi e la solfitolisi ossidativa, che porta all'instabilità della resa dell'interferone, nonché all'impossibilità di utilizzare questo metodo per la produzione industriale dell'interferone.

Come analogo più vicino (prototipo), può essere indicato un metodo per ottenere l'interferone leucocitario umano, che consiste nel coltivare un ceppo ricombinante di E. coli, congelare la biomassa risultante a una temperatura non superiore a -70°C, scongelare e distruggere le cellule dei microrganismi con lisozima, rimozione di DNA e RNA mediante introduzione nel lisato di DNAsi e purificazione della forma insolubile isolata di interferone mediante lavaggio con una soluzione tampone con detergenti, dissoluzione del precipitato di interferone in una soluzione di guanidina cloridrato, rinaturazione e purificazione in una sola fase mediante ioni cromatografia di scambio. Come produttore viene utilizzato il ceppo di E. coli SS5 ottenuto utilizzando il plasmide ricombinante pSS5 contenente tre promotori: P lac , P t7 e P trp, ed il gene dell'interferone alfa con sostituzioni nucleotidiche introdotte.

L'espressione dell'interferone da parte del ceppo di E. coli SS5 contenente questo plasmide è controllata da tre promotori: P lac , P t7 e P trp . Il livello di espressione dell'interferone è di circa 800 mg per 1 litro di sospensione cellulare (RU 2165455).

Lo svantaggio di questo metodo è la bassa efficienza tecnologica dell'utilizzo della distruzione enzimatica delle cellule, del DNA e dell'RNA del microrganismo e della purificazione cromatografica in una fase dell'interferone. Ciò provoca instabilità nel processo di rilascio dell'interferone, porta ad una diminuzione della sua qualità e limita la possibilità di utilizzare lo schema di cui sopra per la produzione industriale di interferone. Gli svantaggi di questo plasmide e del ceppo basato su di esso sono l'uso nel plasmide di un forte promotore non regolato del fago T7 nel ceppo di E. coli BL21 (DE3), in cui il gene della RNA polimerasi T7 si trova sotto il promotore di l'operone lac e che è sempre “scorrevole”. Di conseguenza, la sintesi dell'interferone avviene continuamente nella cellula, il che porta alla dissociazione del plasmide e ad una diminuzione della vitalità delle cellule del ceppo e, di conseguenza, ad una diminuzione della resa dell'interferone.

L'obiettivo della presente invenzione è costruire un ceppo produttore industriale ricombinante di E. coli utilizzando un nuovo DNA plasmidico ricombinante, che ha un alto livello di biosintesi dell'interferone, e sviluppare un'efficace tecnologia industriale per la produzione di una sostanza interferonica per uso medico, corrispondente in qualità alla "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b.

Questo problema è stato risolto creando il DNA plasmidico ricombinante pSX50 e il ceppo di Escherichia coli SX50, depositato nella Collezione tutta russa di ceppi industriali dell'Istituto statale di ricerca genetica dell'impresa unitaria dello Stato federale, numero VKPM B-8550,

nonché un metodo per la produzione di interferone alfa-2b ricombinante, basato sull'uso di un ceppo ricombinante di E. coli SX50 e che prevede la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un contenuto ridotto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi nel processo della biosintesi, distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione delle proteine ​​aggregate in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato, seguita dalla rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine quali come Chelante Sepharose Fast Flow, immobilizzato con ioni Cu+2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come CM Sepharose Fast Flow e cromatografia con filtrazione su gel su resine come Superdex 75.

Secondo l'invenzione viene proposto un nuovo DNA plasmidico ricombinante multicopia pSX50, che codifica la sintesi dell'interferone alfa-2b dei leucociti umani, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore della trascrizione. Il plasmide pSX50 ha 3218 paia di basi (bp) ed è caratterizzato dalla presenza dei seguenti frammenti:

La sequenza dal nucleotide 1 al nucleotide (nt) 176 include un frammento di DNA di 176 bp contenente il promotore del triptofano (P trp);

Sequenza da 177 nt. al 194 n. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente la sequenza Shine Delgarno, responsabile dell'inizio della traduzione;

Sequenza da 195 nt. al 695 n. include un frammento di DNA di 501 bp di dimensione contenente la sequenza del gene dell'interferone con le seguenti sostituzioni nucleotidiche: in posizione 37, sostituzione di A con C, in posizione 39, sostituzione di G con T, in posizione 40, sostituzione di A con C, alla posizione 42, sostituzione di G con T , alla posizione 67, sostituzione di A con C, alla posizione 69, sostituzione di G con T, alla posizione 70, sostituzione di A con C, alla posizione 72, sostituzione di A con T, in posizione 96, sostituzione di G con A, in posizione 100, sostituzione di A con C, in in posizione 102, sostituzione di A con T, in posizione 114, sostituzione di A con C, in posizione 120, sostituzione di C con G, alla posizione 126, sostituzione di G con A, alla posizione 129, sostituzione di G con A, alla posizione 330, sostituzione di C con G, alla posizione 339 sostituzione di G con A, alla posizione 342 sostituzione di G con A, in posizione 487 sostituire A con C, in posizione 489 sostituire A con T, in posizione 495 sostituire G con A;

Sequenza da 696 nt. secondo 713 n. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polilinker sintetico;

Sequenza da 714 nt. al 1138 n. include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 con 4129 nt. al 4553 n. 425 bp, contenente la sequenza del terminatore stretto di trascrizione rrnBT 1 T 2;

Sequenza dal 1139 a.C. al 1229 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 con 2487 nt. al 2577 n. 91 bp, contenente il promotore del gene della β-lattomasi (gene della resistenza all'ampicillina - Amp R);

Sequenza dal 1230 a.C. al 2045 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 nt. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan;

Sequenza dal 2046 a.C. al 3218 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 nt. 1173 bp, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).

Le Figure 1-5 mostrano i diagrammi di costruzione e una mappa fisica del plasmide pSX50.

La Figura 6 mostra la sequenza nucleotidica completa determinata per il plasmide pSX50.

Il ceppo di Escherichia coli SX50 è stato ottenuto trasformando le cellule di Escherichia coli BL21 con il plasmide pSX50 utilizzando la tradizionale tecnologia di ingegneria genetica. Il ceppo E.Coli SX50 è caratterizzato dalle seguenti caratteristiche.

Caratteristiche culturali e morfologiche

Le cellule sono piccole, diritte, ispessite, a forma di bastoncino, Gram-negative, prive di spore. Le cellule crescono bene su terreni nutritivi semplici. Quando si coltiva su agar Difco si formano colonie rotonde, lisce, convesse, torbide, lucide, grigie con bordi lisci. Quando coltivato in terreno liquido (in terreno minimo con glucosio o in brodo LB), si forma una torbidità intensa e uniforme.

Caratteristiche fisiche e biologiche

Aerobio. L'intervallo di temperatura per la crescita è 4-42°C con un pH ottimale di 6,5-7,5.

Come fonte di azoto vengono utilizzati sia i sali minerali sotto forma di ammonio e nitrato, sia i composti organici sotto forma di aminoacidi, peptone, triptone, estratto di lievito, ecc.

Come fonte di carbonio vengono utilizzati aminoacidi, glicerolo e carboidrati. Resistenza agli antibiotici. Le cellule mostrano resistenza alla kanamicina (fino a 100 μg/ml).

Il ceppo Escherichia coli 8X50 è un produttore di interferone.

Metodo, condizioni e composizione del mezzo di conservazione dei ceppi

In L-arape con l'aggiunta di kanamicina ad una concentrazione di 20 mcg/ml sotto olio, in L-brodo contenente il 15% di glicerolo e antibiotici appropriati in fiale a una temperatura di meno 70°C, allo stato liofilizzato in fiale a temperatura di più 4°C.

Il ceppo di Escherichia coli SX50 è stato identificato secondo la Guida di Bergey (1974) come un ceppo della specie Escherichia coli.

Metodo per la produzione industriale dell'interferone alfa-2b

Una caratteristica del metodo proposto è lo sviluppo di una tecnologia che consente l'isolamento dell'interferone da una forma insolubile che si accumula durante la fermentazione, che consente di semplificare significativamente lo schema tecnologico del processo di isolamento e aumentare la resa del prodotto target.

Il metodo consiste nel coltivare il ceppo Escherichia coli SH50 in un mezzo nutritivo, con l'aggiunta costante di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito, nel processo di biosintesi, preferibilmente con un contenuto ridotto di triptofano, distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione 700-900 bar, dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato, rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici, seguita da purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine chelanti tipo Sepharose Fast Flow immobilizzate con Cu+2 ioni, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico di tipo CM Sepharose Fast Flow e cromatografia a filtrazione su gel su resine come Superdex 75.

Le condizioni ottimali per lo svolgimento delle singole fasi della produzione di interferone sono le seguenti:

La fermentazione viene effettuata con l'aggiunta continua di substrati durante tutto il processo, che provoca un elevato livello di espressione di interferone;

La distruzione cellulare viene effettuata in un disintegratore tipo Gaulin ad una pressione di 900 bar;

La rimozione dei componenti cellulari solubili (DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, ecc.) viene effettuata lavando la forma insolubile dell'interferone con soluzioni tampone contenenti detergenti (Triton XI00, urea, ecc.);

Il precipitato risultante contenente interferone viene sciolto in una soluzione tampone di guanidina cloridrato 6 M;

La rinaturazione dell'interferone viene effettuata in una soluzione tampone fisiologica contenente agenti caotropici;

La purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone viene effettuata su Chelating Sepharose Fast Flow, immobilizzato con ioni Cu+2, su resina a scambio cationico SM Sepharose Fast Flow e cromatografia di filtrazione su gel su resina tipo Superdex 75;

Dopo ogni purificazione cromatografica, viene effettuata la filtrazione sterilizzante attraverso filtri apirogeni con dimensioni dei pori di 0,22 micron.

La resa di interferone come risultato dell'utilizzo del metodo descritto è di circa 400-800 mg di interferone per 1 litro di terreno di coltura. La qualità del prodotto risultante è conforme agli standard e ai requisiti della "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b.

Differenze significative tra il metodo proposto e il prototipo sono:

L'uso di un design di ceppo con maggiore produttività, che consente di ottenere una maggiore quantità di interferone da 1 litro di terreno di coltura durante la biosintesi;

L'uso di un'efficace distruzione meccanica della biomassa cellulare, che consente di ottenere un estratto più puro della forma insolubile dell'interferone in un tempo più breve, con minori perdite;

L'utilizzo di soluzioni tampone fisiologiche durante la rinaturazione in presenza di agenti caotropici consente di aumentare la resa della forma di interferone correttamente rinaturata;

La purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone consente di ottenere una sostanza interferone con una purezza superiore al 99% secondo l'elettroforesi in condizioni riducenti e non riducenti durante la colorazione dei gel con argento e superiore al 98% secondo RF HPLC e praticamente priva di pirogeni (prova LAL).

L'essenza e i vantaggi del gruppo di invenzioni rivendicato sono illustrati dai seguenti esempi.

Esempio 1. Costruzione del plasmide ricombinante pSH50

Il metodo per costruire il plasmide pSX50 comprende i seguenti passaggi:

Costruzione del plasmide vettoriale pSX10;

1. costruzione del plasmide pSX3 (2641 bp)

2. costruzione del plasmide vettoriale pSX10 (2553 bp)

Costruzione del plasmide ricombinante pSX41 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX43 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX45 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX50 (3218 bp).

Costruzione del plasmide vettoriale pSX10

Il plasmide vettoriale pSX10 è un vettore pUC19 in cui la sequenza codificante del gene della beta lattomasi, che fornisce resistenza all'ampicillina, è sostituita dalla sequenza codificante del gene kan e contiene il terminatore della trascrizione del plasmide pKK223-3.

La costruzione del plasmide vettore pSS10 avviene in due fasi:

Preparazione del plasmide pSX3 (2641 bp), ovvero il plasmide pUC19, in cui la regione codificante del gene amp è sostituita dalla regione codificante del gene kan;

Preparazione del plasmide vettore pSX10 (2553 bp), che è un plasmide pSX3 in cui un frammento di DNA codificante per il terminatore di trascrizione rBT 1 T 2 è inserito dietro il sito BamHI.

Per ottenere il plasmide pSX3, vengono eseguiti cinque cicli di amplificazione del DNA mediante PCR (reazione a catena della polimerasi). Durante il primo ciclo, utilizzando il DNA plasmidico pUC19 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 1828 bp. (frammento PU1-PU2) utilizzando primer:

Questa e le successive reazioni PCR vengono eseguite nelle seguenti condizioni: Tis-HCl 20 mM, pH 8,8, 2 SO 4 10 mM (NH 4), KCl 10 mM, MgCl 2 2 tM, Triton X100 0,1%, 0,1 mg/ml BSA, 0,2 mM di ciascun dNTP, 1,25 unità. Pfu DNA polimerasi, 100 ng di DNA. Il processo di amplificazione prevede le seguenti fasi: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 35 cicli di PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 2 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Dopo l'amplificazione (e dopo le successive amplificazioni), il frammento di DNA viene purificato mediante elettroforesi in gel di agarosio all'1%. Durante il secondo e il terzo ciclo, utilizzando il DNA plasmidico pUC4K come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 555 bp. (frammento KM1-KM2) utilizzando primer:

e amplificazione di un frammento di DNA di 258 bp. (KMZ-KM4) dai primer

Nel quinto ciclo di PCR, i frammenti (PU1-PU2) e (KM1-KM4) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, viene isolato il DNA plasmidico e viene effettuata l'analisi di restrizione. Di conseguenza, si ottiene il plasmide pSX3 con una dimensione di 2641 bp.

Per ottenere il plasmide vettore pSX10, vengono eseguiti tre cicli di amplificazione del DNA utilizzando la PCR. Nel primo turno, utilizzando il DNA plasmidico pSX3 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 2025 bp. (frammento 10.1-10.2) utilizzando primer:

Durante il secondo ciclo, utilizzando il DNA del plasmide pKK223-3 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 528 bp. (frammento KK1-KK2) utilizzando primer:

Nel terzo ciclo di PCR, i frammenti (10.1-10.2) e (KK1-KK2) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, viene isolato il DNA plasmidico e viene effettuata l'analisi di restrizione. Come risultato si ottiene il plasmide pSX10 con una dimensione di 2553 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX41

Il plasmide ricombinante pSX41 è un frammento di DNA Hind III - BamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp), frammento di DNA Hind III - EcoRI di 168 bp, codificante il promotore dell'operone triptofano di E. coli (P trp), EcoRI-XbaI un frammento sintetico Un frammento di DNA di 20 bp che codifica la sequenza SD (Shine-Delgarno) e un frammento di DNA XbaI-BamHI di 501 bp che codifica il gene dell'interferone alfa 2b umano.

Per ottenere il frammento di DNA Hind III - BamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp), il DNA del plasmide pSX3 viene trattato con gli enzimi di restrizione HindIII e BamHI, seguito da purificazione elettroforetica in gel di agarosio all'1%. Il frammento di DNA Hind III EcoRI di 168 bp che codifica il promotore dell'operone del triptofano (P trp) è ottenuto mediante PCR utilizzando DNA totale di E. coli come modello e primer TRP1 e PRP2, seguito dal trattamento del frammento amplificato con restrizione Hindll ed EcoRI enzimi:

Per ottenere EcoRI-Xbal un frammento di DNA sintetico di 20 bp codificante la sequenza SD (Shine-Delgarno), vengono sintetizzati i seguenti oligonucleotidi complementari:

Il frammento di DNA XbaI-BamIII di 501 bp, che codifica per il gene dell'interferone alfa 2b umano, è ottenuto mediante PCR utilizzando il DNA umano totale come modello e i primer IFN1 e IFN2, seguiti dall'elaborazione del frammento amplificato con gli enzimi di restrizione Xbal e BamIII:

Successivamente, i frammenti purificati elettroforeticamente vengono combinati, legati con l'enzima fago ligasi T4, il DNA viene trasformato in cellule del ceppo E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX41 con una dimensione di 3218 bp. Successivamente, viene eseguita la mutagenesi passo passo del gene dell'interferone per aumentare il livello di espressione del prodotto bersaglio. La mutagenesi del gene dell'interferone consiste nella sostituzione di triplette che si trovano raramente in E. coli, che codificano per gli amminoacidi corrispondenti, con triplette che si trovano spesso in E. coli, che codificano per gli stessi amminoacidi. La mutagenesi del DNA del gene dell'interferone viene effettuata utilizzando il metodo PCR.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX43

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX43, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX41 come modello e primer IFN3 e IFN4:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX43 con una dimensione di 3218 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX45

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX45, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX43 come modello e primer IFN5 e IFN6:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX45 con una dimensione di 3218 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX50.

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX50, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX45 come modello e primer IFN7 e IFN8:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX50 con una dimensione di 3218 bp.

Esempio 2. Preparazione del ceppo di E. coli SX50 - produttore di interferone

Il ceppo produttore di interferone di E. coli SX50 viene ottenuto trasformando cellule del ceppo di E. coli BL21 con il plasmide ricombinante pSX50. Il ceppo produttore di interferone viene coltivato in un fermentatore da 30 litri fino ad una densità ottica di 25,0-30,0 p.u. in terreno M9 contenente 1% idrolizzato acido di caseina (Difco), 1% glucosio, 40 µg/ml kanamicina, ad una temperatura di 38-39°C. Durante il processo di fermentazione viene effettuata un'aggiunta continua di substrato nutritivo utilizzando un controller gravimetrico.

Esempio 3. Metodo per isolare l'interferone dal ceppo SX50 di E. coli

L'interferone è stato ottenuto in 4 fasi:

Fase 1. Coltivazione di E. coli ceppo SX50.

Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone.

Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone.

Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone.

Fase 1. Coltivazione di E. coli ceppo SX50

L'inoculo coltivato di E. coli ceppo SX50 in un volume di 3 litri di terreno ricco LB per 12 ore a 26°C viene introdotto asetticamente in un fermentatore contenente 27 litri di terreno sterile contenente M9, 1% idrolizzato acido di caseina, 1% glucosio, 1 mM MgCl 2, 0,1 mM CaCl 2, 40 mg/ml kanamicina. La coltivazione in fermentatore viene effettuata ad una temperatura di 38-39°C, mantenendo un pH di 7±0,15 mediante titolazione automatica con una soluzione di idrossido di sodio al 40%. La concentrazione di ossigeno disciolto nell'intervallo (50±10)% della saturazione viene mantenuta modificando la velocità dell'agitatore da 100 a 800 giri/min e l'alimentazione d'aria da 1 a 15 l/min. La concentrazione dei substrati, in particolare glucosio ed estratto di lievito, viene misurata durante la fermentazione e la loro concentrazione viene mantenuta variando la velocità di erogazione delle soluzioni concentrate attraverso pompe peristaltiche utilizzando un controller gravimetrico.

L'accumulo di interferone nella forma insolubile viene monitorato utilizzando la microscopia a contrasto di fase, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide al 15% (SDS-PAAG) e la cromatografia ad alta prestazione in fase inversa (RF HPLC). La fermentazione viene interrotta quando viene raggiunta la massima densità ottica (~ 25-30 p.u.) e la sintesi dell'interferone si arresta. Al termine della fermentazione, il liquido colturale viene separato mediante centrifugazione in un rotore a flusso con una velocità di rotazione di 5000-10000 giri/min. La biomassa viene confezionata in sacchetti di plastica e congelata a meno 70°C.

Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone

300-400 g di biomassa congelata di E. coli ceppo SX50 vengono sospesi in 3000 ml di tampone 1 (Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, EDTA 10 mM, Triton X100 0,1%). La sospensione viene fatta passare attraverso un omogeneizzatore a flusso di tipo Gaulin, mantenuta ad una pressione di 900 bar e centrifugata in un rotore a flusso a 15.000 giri al minuto. Il precipitato risultante viene lavato in condizioni simili in sequenza con il tampone 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA, 3 M urea) e il tampone 3 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA) e infine l'interferone il precipitato viene sospeso in 200 ml di tampone 3. In questo caso, il tempo per l'isolamento e la purificazione della forma insolubile dell'interferone non è superiore a 5 ore.

Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone

Alla sospensione della forma insolubile di interferone ottenuta nella fase precedente, aggiungere guanidina cloridrato secca a una concentrazione di 6 M, aggiungere ditiotreitolo a una concentrazione di 50 mM, Tris-HCl pH 8,0 a una concentrazione di 50 mM, NaCl a una concentrazione di 50 mM concentrazione di 150 mM e Triton X100 ad una concentrazione di 0,1%, incubare a temperatura ambiente per 2 ore. Il materiale non disciolto viene separato mediante filtrazione sterilizzante attraverso membrane con diametro dei pori di 0,22 micron.

La rinaturazione dell'interferone viene effettuata diluendo lentamente la soluzione risultante 100-200 volte con tampone 4 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA). Dopodiché la miscela di rinaturazione viene incubata sotto costante agitazione per 12-15 ore ad una temperatura di 4-8°C. Viene quindi aggiunto solfato di magnesio ad una concentrazione di 1 mM e il materiale aggregato viene rimosso mediante filtrazione sterilizzante attraverso un filtro a membrana con un diametro dei pori di 0,22 micron.

Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone

La purificazione cromatografica dell'interferone viene effettuata in tre fasi.

1. L'interferone rinaturato risultante viene prima purificato mediante cromatografia di affinità su una resina chelante Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) immobilizzata con ioni Cu+2. Per fare ciò, la soluzione di interferone viene applicata ad una colonna con Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow e l'interferone viene eluito con un tampone di acido citrico 0,1 M a pH 2,2.

2. Nella seconda fase della purificazione cromatografica, la soluzione di interferone viene applicata a una resina a scambio cationico di tipo CM Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) e l'interferone viene eluito con un gradiente di soluzioni (0,0-0,5 M NaCl) in una soluzione da 50 mM. Tampone Na(CH3COO), pH 5,5.

3. La purificazione della forma monomerica dell'interferone dai resti delle forme polimeriche dell'interferone viene effettuata nella terza fase della purificazione dell'interferone mediante filtrazione su gel su resina Superdex 75 (Amersham Biosciences). La cromatografia viene eseguita in un tampone di Na(CH 3 COO) 50 mM, pH 5,0, contenente NaCl 0,15 M.

Il metodo descritto per isolare e purificare l'interferone consente di ottenere 4-8 g di interferone altamente purificato in un ciclo di isolamento nell'arco di 7-10 giorni dalla biomassa ottenuta da 10 litri di terreno di coltura. La qualità dell'interferone risultante è pienamente conforme ai requisiti della "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b, vale a dire:

La concentrazione di interferone non è inferiore a 2×10 8 UI/ml;

L'attività specifica dell'interferone non è inferiore a 2,0×10 8 UI/mg;

La purezza elettroforetica del farmaco è almeno del 99% in condizioni riducenti e non riducenti quando si colorano i gel con argento;

Il punto isoelettrico dell'interferone isolato è nell'ordine del pH 5,8-6,3;

La mappa peptidica dell'interferone isolato non è fondamentalmente diversa dalla mappa peptidica dell'interferone alfa 2b CRS standard europeo;

Come risulta dagli esempi forniti, il gruppo di invenzioni rivendicato consente di ottenere interferone alfa-2b con resa elevata utilizzando una tecnologia relativamente semplice ed affidabile.

RECLAMO

1. DNA plasmidico ricombinante pSX50, codificante per la sintesi dell'interferone alfa-2b umano ricombinante, caratterizzato dal fatto di avere una dimensione di 3218 paia di basi (bp) e di essere costituito dai seguenti frammenti: la sequenza da 1 a 176 nucleotidi (bp) comprende un frammento di DNA di 176 bp contenente il promotore del triptofano (P trp), sequenza da 177 a 194 nt. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp di dimensione contenente la sequenza Shine Delgarno, responsabile dell'inizio della traduzione, sequenza da 195 a 695 nt. comprende un frammento di DNA di 501 bp contenente il gene dell'interferone alfa-2b con sostituzioni nucleotidiche: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A> C), 69 (Sol>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (Sol>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A >С ), 120 (C>G), 126 (Sol>A), 129 (Sol>A), 330 (C>G), 339 (Sol>A), 342 (Sol>A), 487 (A>C) , 489 (A>T), 495 (G>A), sequenza da 696 a 713 nt. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polylinker sintetico, sequenza da 714 a 1138 nt. include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 da 4129 a 4553 nt. 425 bp, contenente la sequenza del terminatore stretto di trascrizione rrnBT 1 T 2, sequenza da 1139 a 1229 nt. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 2487 a 2577 nt. 91 bp, contenente il promotore del gene -lattomasi (gene di resistenza all'ampicillina -Amp R), sequenza da 1230 a 2045 nt. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 nt. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan, sequenza con 2046 bp. al 3218 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 nt. 1173 bp, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).

2. Il ceppo batterico Eschcerichia coli SX50 trasformato con il plasmide ricombinante secondo la rivendicazione 1 è produttore di interferone alfa-2b leucocitario umano ricombinante.

3. Metodo per produrre interferone alfa-2b umano, comprendente la coltivazione del ceppo di Escherichia coli SX5 secondo la rivendicazione 2 in un mezzo nutritivo con l'aggiunta costante di substrati nutritivi durante il processo di biosintesi, distruzione meccanica di cellule di microrganismi ad una pressione di 700- 900 bar, dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato, rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici, purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine chelanti tipo Sepharose Fast Flow immobilizzate con ioni Cu+2, scambio ionico cromatografia su resine a scambio ionico tipo CM Sepharose Fast Flow e cromatografia con filtrazione su gel su resine tipo Superdex 75 .

4. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui la coltura viene effettuata su un mezzo nutritivo a ridotto contenuto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito.

5. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui prima di sciogliere l'interferone, esso viene purificato rimuovendo componenti cellulari solubili, tra cui DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, lavaggio con soluzioni tampone contenenti detergenti quali Triton XI 00, urea.

6. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui dopo ciascuna purificazione cromatografica viene effettuata una filtrazione sterilizzante attraverso filtri con dimensioni dei pori di 0,22 micron.

Il farmaco è sintetizzato da cellule batteriche del ceppo di Escherichia coli SG-20050/pIF16, nel cui apparato genetico è integrato il gene dell'interferone umano alfa-2b. Il farmaco è una proteina che contiene 165 aminoacidi; è identico per proprietà e caratteristiche all'interferone alfa-2b dei leucociti umani. L'effetto antivirale si manifesta durante la riproduzione del virus, il farmaco è attivamente coinvolto nei processi metabolici delle cellule. Reagendo con recettori specifici sulla superficie delle cellule, il farmaco avvia una serie di cambiamenti intracellulari, inclusa la produzione di enzimi specifici (proteina chinasi e 2-5-adenilato sintetasi) e citochine, la cui azione rallenta la sintesi dell'enzima ribonucleico virale acido nella cellula e nella proteina virale. Aumenta l'attività fagocitica dei macrofagi, migliora l'effetto citotossico specifico dei linfociti sulle cellule bersaglio. Modifica l'attività funzionale delle cellule immunocompetenti, la composizione qualitativa e quantitativa delle citochine escrete, la formazione e la secrezione di proteine ​​intracellulari. Sopprime la proliferazione delle cellule tumorali e la formazione di alcuni oncogeni, che inibiscono la crescita del tumore.
La concentrazione massima del farmaco quando somministrato per via parenterale viene raggiunta dopo 2 - 4 ore. 20 - 24 ore dopo la somministrazione, il farmaco non viene rilevato nel plasma sanguigno. La concentrazione del farmaco nel siero del sangue dipende direttamente dalla frequenza e dalla dose di somministrazione. Metabolizzato nel fegato, escreto principalmente attraverso i reni, in parte invariato.

Indicazioni

Terapia e prevenzione dell'influenza e delle infezioni virali respiratorie acute; prevenzione d'emergenza dell'encefalite trasmessa da zecche insieme a immunoglobuline antizecche; malattie atopiche, rinocongiuntivite allergica, asma bronchiale durante immunoterapia specifica.
Trattamento complesso negli adulti: epatite virale acuta B (forme moderate e gravi all'inizio del periodo itterico fino al quinto giorno dell'ittero (nelle fasi successive il farmaco è meno efficace; nella malattia colestatica e nello sviluppo di coma epatico il farmaco non è efficace) ; epatite acuta prolungata B e C, epatite cronica attiva B e C, epatite cronica B con agente delta; leucemia a cellule capellute, cancro renale allo stadio IV, linfomi cutanei maligni (reticolosi primaria, micosi fungoide, reticolosarcomatosi), cellule basali e squamose intestinali cancro, sarcoma di Kaposi, mielosi subleucemica, cheratoacantoma, istiocitosi da cellule di Langerhans, leucemia mieloide cronica, trombocitemia essenziale; congiuntivite virale, cheratite, cheratocongiuntivite, cheratouveite, cheratoiridociclite; infezione urogenitale da clamidia; forma febbrile e meningea di encefalite da zecche.
Trattamento complesso per i bambini di età superiore a 1 anno: papillomatosi respiratoria della laringe, a partire dal giorno successivo alla rimozione dei papillomi; leucemia linfoblastica acuta in remissione dopo la fine della chemioterapia di induzione (a 4-5 mesi di remissione).

Metodo d'uso dell'interferone umano ricombinante alfa-2b e dosaggio

L'interferone alfa-2b ricombinante umano viene somministrato per via intramuscolare, sottocutanea, nella lesione, sottocongiuntivalmente, assunto per via orale e utilizzato localmente. Il metodo di somministrazione, la dose, il regime e la durata del trattamento sono stabiliti individualmente in base alle indicazioni, all'età, alle condizioni del paziente e alla tollerabilità del farmaco.
Durante il trattamento, gli esami del sangue clinici generali devono essere eseguiti ogni 2 settimane, i test biochimici ogni 4 settimane. Se il numero assoluto di neutrofili diminuisce a meno di 0,50 X 10^9/l e il numero di piastrine a meno di 25 X 10^9/l, la terapia deve essere interrotta. Se il numero assoluto di neutrofili diminuisce a meno di 0,75 X 10^9/l e il numero di piastrine a meno di 50 X 10^9/l, si consiglia di ridurre temporaneamente la dose del farmaco di 2 volte e ripetere la procedura. analisi dopo 1 - 2 settimane; Se i cambiamenti persistono si consiglia di interrompere la terapia.
Il paziente deve essere attentamente monitorato se compaiono segni di disfunzione epatica. L'uso del farmaco deve essere interrotto se i sintomi peggiorano.
Se si sviluppano reazioni di ipersensibilità (angioedema, orticaria, anafilassi, broncospasmo), il farmaco viene sospeso e viene immediatamente prescritto un trattamento farmacologico appropriato.
È necessario monitorare attentamente lo stato funzionale dei reni in presenza di insufficienza renale da lieve a moderata.
Con l'uso prolungato del farmaco è possibile lo sviluppo di polmonite e polmonite. Il sollievo delle sindromi polmonari è facilitato dalla tempestiva sospensione del farmaco e dalla prescrizione di glucocorticosteroidi.
Se si verificano cambiamenti nel sistema nervoso centrale e/o nella psiche, inclusa la depressione, è necessaria l'osservazione da parte di uno psichiatra durante il trattamento e per sei mesi dopo il suo completamento. Dopo la sospensione del trattamento, questi disturbi sono generalmente rapidamente reversibili, ma a volte sono necessarie fino a 3 settimane per regredire completamente. Si raccomanda di consultare uno psichiatra e di interrompere la terapia farmacologica se compaiono comportamenti aggressivi diretti verso altre persone o pensieri suicidi, i sintomi di un disturbo mentale peggiorano o non regrediscono. Pensieri e tentativi di suicidio sono più comuni nei bambini e negli adolescenti che negli adulti. Se il trattamento con il farmaco è considerato necessario in pazienti adulti con gravi disturbi mentali (inclusa un'anamnesi), esso deve essere iniziato solo se viene effettuato il trattamento per il disturbo mentale e un appropriato screening individuale. L'uso del farmaco in pazienti di età inferiore a 18 anni con gravi disturbi mentali (inclusa una storia) è controindicato.
Nei pazienti con patologia tiroidea, prima di iniziare la terapia, è necessario determinare il livello dell'ormone stimolante la tiroide, in futuro il suo contenuto dovrebbe essere monitorato almeno una volta ogni 6 mesi, così come quando compaiono segni di disfunzione della ghiandola tiroidea. apparire. L'uso del farmaco in tali pazienti deve essere effettuato sotto la supervisione di un endocrinologo. Se si verifica una disfunzione tiroidea o peggiorano malattie esistenti che non possono essere trattate, il farmaco deve essere sospeso.
Con l'uso prolungato del farmaco sono possibili disturbi visivi. Si consiglia di effettuare una visita oftalmologica prima di iniziare il trattamento. Per eventuali reclami riguardanti l'organo della vista è necessaria la consultazione immediata con un oculista. I pazienti con malattie che possono causare alterazioni della retina (ipertensione arteriosa, diabete mellito, ecc.) devono sottoporsi ad una visita oftalmologica almeno una volta ogni sei mesi. Se i disturbi visivi peggiorano o compaiono, si deve prendere in considerazione la sospensione della terapia.
I pazienti con malattie oncologiche progressive e/o patologie del sistema cardiovascolare richiedono un'attenta osservazione e monitoraggio dell'elettrocardiogramma. Se si verifica ipotensione, devono essere forniti un trattamento appropriato e un'adeguata idratazione.
Nei pazienti anziani che ricevono il farmaco ad alte dosi, sono possibili coma, disturbi della coscienza, encefalopatia e convulsioni. Se si sviluppano questi disturbi e la riduzione della dose risulta inefficace, la terapia viene interrotta.
Con l'uso prolungato del farmaco, alcuni pazienti possono sviluppare anticorpi contro l'interferone. In genere, i titoli anticorpali sono bassi e la loro comparsa non riduce l'efficacia del trattamento.
Nei pazienti sottoposti a trapianto, l’immunosoppressione farmacologica può essere meno efficace perché l’interferone stimola il sistema immunitario.
Prescrivere con cautela a pazienti con predisposizione alle malattie autoimmuni. Se si sviluppano sintomi di una malattia autoimmune, è necessario condurre un esame approfondito e valutare la possibilità di continuare il trattamento con interferone. A volte il trattamento con il farmaco è associato ad esacerbazione o alla comparsa di psoriasi e sarcoidosi.
Durante il trattamento, è necessario prestare cautela quando si intraprendono attività potenzialmente pericolose che richiedono maggiore attenzione e velocità delle reazioni psicomotorie (inclusa la guida), e se si sviluppano affaticamento, sonnolenza, disorientamento o altre reazioni avverse, tali attività devono essere abbandonate.

Controindicazioni per l'uso

Ipersensibilità, gravi malattie del sistema cardiovascolare (infarto miocardico recente, insufficienza cardiaca scompensata, gravi disturbi del ritmo cardiaco), gravi malattie allergiche, grave insufficienza epatica o renale, epatite autoimmune, epatite cronica con cirrosi epatica scompensata, malattie mentali e disturbi del bambini e adolescenti, epilessia e altre disfunzioni del sistema nervoso centrale, una storia di malattie autoimmuni, l'uso di immunosoppressori dopo il trapianto, patologie della tiroide che non possono essere controllate con metodi terapeutici generalmente accettati; gravidanza, periodo di allattamento al seno, uso negli uomini le cui partner sono incinte.

Restrizioni d'uso

Grave mielosoppressione, insufficienza epatica e/o renale, malattie della tiroide, psoriasi, sarcoidosi, malattia polmonare cronica ostruttiva, diabete mellito, tendenza alla chetoacidosi, disturbi emorragici, disturbi mentali, espressi soprattutto da depressione, pensieri suicidi e una storia di tentativi di suicidio.

Utilizzare durante la gravidanza e l'allattamento

L'uso del farmaco è controindicato durante la gravidanza e l'allattamento.

Effetti collaterali dell'interferone ricombinante umano alfa-2b

Sistema cardiovascolare e sangue: cardiomiopatia transitoria reversibile, aritmie, ipotensione arteriosa, infarto del miocardio, leucopenia, linfopenia, trombocitopenia, anemia.
Apparato digerente: secchezza delle fauci, dolore addominale, nausea, dispepsia, perdita di peso, disturbi dell'appetito, diarrea, vomito, pancreatite, epatotossicità, aumento dell'attività dell'alanina aminotransferasi, fosfatasi alcalina.
Sistema nervoso e organi sensoriali: irritabilità, depressione, nervosismo, astenia, ansia, insonnia, ridotta capacità di concentrazione, aggressività, pensieri suicidi, neuropatie, psicosi, disturbi dell'udito, gonfiore della congiuntiva del fornice inferiore, iperemia e singoli follicoli della mucosa dell'occhio, cambiamenti focali nel fondo, diminuzione dell'acuità visiva, neurite ottica, emorragie retiniche, trombosi delle arterie e delle vene retiniche, papilledema.
Pelle: aumento della sudorazione, eruzione cutanea, prurito, perdita di capelli, reazione infiammatoria locale.
Sistema endocrino: cambiamenti nella ghiandola tiroidea, diabete mellito.
Sistema muscoloscheletrico: rabdomiolisi, mal di schiena, crampi alle gambe, miosite, mialgia.
Sistema respiratorio: faringite, dispnea, tosse, polmonite.
Sistema urinario: insufficienza renale, aumento delle concentrazioni di creatinina, urea.
Il sistema immunitario: patologia autoimmune (artrite reumatoide, vasculite, sindrome simil-lupus), sarcoidosi, anafilassi, angioedema, edema allergico, edema facciale.
Altri: sindrome simil-influenzale (febbre, brividi, astenia, affaticamento, stanchezza, artralgia, mialgia, mal di testa).

Interazione dell'interferone alfa-2b ricombinante umano con altre sostanze

Il farmaco riduce la clearance e raddoppia la concentrazione di aminofillina nel plasma.
Se usato insieme all'amfotericina B, aumenta il rischio di sviluppare danni renali, ipotensione e broncospasmo; con busulfan - malattia epatica veno-occlusiva; con dacarbazina - epatotossicità; con zidovudina - neutropenia.
Il farmaco aumenta la tossicità della doxorubicina.
Se usato insieme a levotiroxina sodica, l’effetto cambia e può essere necessario un aggiustamento della dose.
Se usato insieme a pegaspargasi, il rischio di effetti collaterali aumenta reciprocamente.
Il farmaco può ridurre l'attività degli isoenzimi del citocromo P-450 e, quindi, influenzare il metabolismo di fenitoina, cimetidina, carillon, diazepam, warfarin, teofillina, propranololo e alcuni citostatici.
Può aumentare gli effetti mielotossici, neurotossici e cardiotossici di farmaci precedentemente prescritti o co-somministrati.
Evitare l'uso simultaneo di farmaci che deprimono il sistema nervoso centrale, farmaci immunosoppressori (compresi i glucocorticosteroidi).
Il consumo di alcol non è raccomandato durante la terapia.
Se usato insieme all'idrossiurea, l'incidenza di vasculite cutanea può aumentare.
Se usato insieme alla teofillina, è necessario monitorare la concentrazione di teofillina nel plasma sanguigno e, se necessario, adattare il regime posologico.

Overdose

In caso di sovradosaggio del farmaco, gli effetti collaterali aumentano. È necessario sospendere il farmaco ed effettuare un trattamento sintomatico e di supporto.

Nomi commerciali di farmaci contenenti il ​​principio attivo interferone alfa-2b umano ricombinante

Farmaci combinati:
Interferone alfa-2b umano ricombinante + Difenidramina: Ophthalmoferon®.