Interferoni e loro ruolo nella medicina clinica. Dalla cura dell'influenza alla cura delle infezioni virali e batteriche complesse. Tutto sui medicinali Medicinali contenenti interferone alfa 2b

La composizione dei preparati di interferone dipende dalla loro forma di rilascio.

Modulo per il rilascio

I preparati di interferone hanno le seguenti forme di rilascio:

• polvere liofilizzata per la preparazione di gocce oculari e nasali, soluzione iniettabile;
• soluzione iniettabile;
• lacrime;
• pellicole per gli occhi;
• gocce e spray nasali;
• unguento;
• gel dermatologico;
• liposomi;
• aerosol;
• soluzione orale;
• supposte rettali;
• supposte vaginali;
• impianti;
• microclisteri;
• compresse (le compresse di interferone sono disponibili con il marchio Entalferon).

effetto farmacologico

I farmaci IFN appartengono al gruppo di farmaci con effetti antivirali e immunomodulatori.

Tutti gli IFN hanno effetti antivirali e antitumorali. Non meno importante è la loro proprietà di azione stimolante. macrofagi - cellule che svolgono un ruolo importante nell'iniziazione.

Gli IFN contribuiscono ad aumentare la resistenza dell'organismo alla penetrazione virus e blocca anche la riproduzione virus quando penetrano nella cellula. Quest'ultimo è dovuto alla capacità di soppressione dell'IFN traduzione dell’RNA messaggero del virus .

Tuttavia, l'effetto antivirale dell'IFN non è diretto contro alcuni virus , cioè gli IFN non sono caratterizzati dalla specificità del virus. Questo è esattamente ciò che spiega la loro versatilità e l’ampia gamma di attività antivirale.

Interferone: che cos'è?

Gli interferoni sono una classe con proprietà simili glicoproteine , che sono prodotti dalle cellule dei vertebrati in risposta all'influenza di vari tipi di induttori, sia di natura virale che non virale.

Secondo Wikipedia, affinché una sostanza biologicamente attiva possa essere qualificata come interferone, deve essere di natura proteica e avere un pronunciato attività antivirale in relazione a vari virus , come minimo, in cellule omologhe (simili), "mediate da processi metabolici cellulari tra cui l'RNA e la sintesi proteica".

La classificazione degli IFN proposta dall'OMS e dal Comitato Interferone si basa sulle differenze nelle loro proprietà antigeniche, fisiche, chimiche e biologiche. Inoltre, tiene conto della loro specie e origine cellulare.

In base all'antigenicità (specificità dell'antigene), gli IFN sono solitamente suddivisi in acido-stabili e acido-labili. Quelli acido-resistenti includono gli interferoni alfa e beta (sono anche chiamati IFN di tipo I). L'interferone gamma (γ-IFN) è acido labile.

Viene prodotto l'α-IFN leucociti del sangue periferico (leucociti di tipo B e T), quindi in precedenza era designato come interferone leucocitario . Attualmente ne esistono almeno 14 varietà.

Viene prodotto il β-IFN fibroblasti , motivo per cui è anche chiamato fibroblastico .

La precedente designazione di γ-IFN è interferone immunitario , è prodotto da stimolato Linfociti di tipo T , cellule NK (assassini normali (naturali); dall'inglese “natural killer”) e (presumibilmente) macrofagi .

Proprietà di base e meccanismo d'azione dell'IFN

Senza eccezione, tutti gli IFN sono caratterizzati da un'attività multifunzionale contro le cellule bersaglio. La loro proprietà più comune è la capacità di indurre in loro stato antivirale .

L'interferone è usato come agente terapeutico e profilattico per vari infezione virale . Una caratteristica dei farmaci IFN è che il loro effetto si indebolisce con iniezioni ripetute.

Il meccanismo d'azione dell'IFN è legato alla sua capacità di inibire infezione virale . Come risultato del trattamento con farmaci interferone nel corpo del paziente in giro fonte di infezione si forma una sorta di barriera resistente a virus cellule non infette, che impediscono l’ulteriore diffusione dell’infezione.

Interagendo con le cellule ancora intatte (intese), impedisce l'attuazione del ciclo riproduttivo virus a causa dell'attivazione di alcuni enzimi cellulari ( chinasi proteiche ).

Le funzioni più importanti degli interferoni sono la capacità di sopprimere emopoiesi ; modulare la risposta immunitaria dell'organismo e la risposta infiammatoria; regolare i processi di proliferazione e differenziazione cellulare; sopprimono la crescita e impediscono la riproduzione cellule virali ; stimolare l'espressione della superficie antigeni ; sopprimere le singole funzioni Leucociti di tipo B e T , stimolare l'attività cellule NK eccetera..

Uso dell'IFN in biotecnologia

Sviluppo di metodi di sintesi e purificazione altamente efficienti leucociti e interferoni ricombinanti in quantità sufficienti per la produzione di farmaci, ha reso possibile l'uso di farmaci IFN per il trattamento dei pazienti con diagnosi Epatite virale .

Una caratteristica distintiva degli IFN ricombinanti è che vengono prodotti al di fuori del corpo umano.

Per esempio, interferone beta-1a ricombinante (IFN beta-1a) sono ottenuti da cellule di mammifero (in particolare da cellule ovariche di criceto cinese) e hanno proprietà simili interferone beta-1b (IFN β-1b) prodotto da un membro della famiglia delle Enterobacteriaceae coli (Escherichia coli).

Farmaci induttori dell'interferone: cosa sono?

Gli induttori dell'IFN sono farmaci che non contengono interferone, ma allo stesso tempo ne stimolano la produzione.

Farmacodinamica e farmacocinetica

Il principale effetto biologico dell'α-IFN è inibizione della sintesi proteica virale . Lo stato antivirale della cellula si sviluppa entro diverse ore dalla somministrazione del farmaco o dall'induzione della produzione di IFN nell'organismo.

Tuttavia, l’IFN non ha alcun effetto nelle fasi iniziali ciclo replicativo cioè nella fase di adsorbimento, penetrazione virus nella cellula (penetrazione) e rilascio del componente interno virus in procinto di “spogliarlo”.

Azione antivirus L'α-IFN appare anche quando le cellule sono infette RNA infettivi . L'IFN non penetra nella cellula, ma interagisce solo con recettori specifici membrane cellulari (gangliosidi o strutture simili contenenti oligozuccheri ).

Il meccanismo dell'attività dell'IFN alfa ricorda l'azione di alcuni ormoni glicopeptidici . Stimola l'attività geni , alcuni dei quali sono coinvolti nella codificazione della formazione dei prodotti con direct effetto antivirale .

Interferoni β avere anche effetto antivirale , che è associato a diversi meccanismi d'azione. Interferone beta attiva la NO sintetasi, che a sua volta aiuta ad aumentare la concentrazione di ossido nitrico all'interno della cellula. Quest'ultimo svolge un ruolo chiave nella soppressione della riproduzione virus .

Il β-IFN attiva le funzioni effettrici secondarie assassini naturaliV , Linfociti di tipo B , monociti del sangue , macrofagi tissutali (fagociti mononucleari) e neutrofilo , che sono caratterizzati da citotossicità anticorpo-dipendente e anticorpo-indipendente.

Inoltre, il β-IFN blocca il rilascio del componente interno virus e interrompe i processi di metilazione Virus dell'RNA .

Il γ-IFN è coinvolto nella regolazione della risposta immunitaria e ne regola l'espressione reazioni infiammatorie. Nonostante il fatto che sia indipendente antivirus E effetto antitumorale , interferone gamma molto debole. Allo stesso tempo, migliora significativamente l’attività dell’α- e del β-IFN.

Dopo la somministrazione parenterale, la concentrazione massima di IFN si osserva dopo 3-12 ore e l'indicatore di biodisponibilità è del 100% (sia dopo l'iniezione sotto la pelle che dopo l'iniezione nel muscolo).

L’emivita T½ varia da 2 a 7 ore. Tracce di concentrazione di IFN nel plasma sanguigno non sono rilevabili dopo 16-24 ore.

Indicazioni per l'uso

L'IFN è destinato al trattamento malattie virali , Impressionante vie respiratorie .

Inoltre, ai pazienti con forme croniche di interferone vengono prescritti preparati epatite e delta .

Per la cura malattie virali e, in particolare, viene utilizzato prevalentemente l'IFN-α (entrambe le sue forme, IFN-alfa 2b e IFN-alfa 2a). Il “gold standard” del trattamento epatite C sono considerati interferoni pegilati alfa-2b e alfa-2a. In confronto, gli interferoni convenzionali sono meno efficaci.

I polimorfismi genetici osservati nel gene IL28B, responsabile della codifica dell'IFN lambda-3, causano differenze significative nell'effetto del trattamento.

Pazienti con genotipo 1 epatite C con alleli comuni del gene specificato hanno maggiori probabilità di ottenere risultati terapeutici più prolungati e pronunciati rispetto ad altri pazienti.

L'IFN viene spesso prescritto anche ai pazienti con malattie oncologiche : maligno , tumori endocrini del pancreas , linfoma non-Hodgkin , tumori carcinoidi ; Sarcoma di Kaposi , condizionato; leucemia a cellule capellute ,mieloma multiplo , cancro al rene eccetera..

Controindicazioni

L'interferone non è prescritto ai pazienti con ipersensibilità ad esso, così come ai bambini e agli adolescenti che ne soffrono gravi disturbi mentali E disturbi del sistema nervoso , che sono accompagnati da pensieri di suicidio e tentativi di suicidio, gravi e prolungati.

In combinazione con farmaco antivirale ribavirina L'IFN è controindicato nei pazienti con diagnosi di compromissione grave rene (condizioni in cui la CC è inferiore a 50 ml/min).

I preparati a base di interferone sono controindicati (nei casi in cui la terapia appropriata non produce l'effetto clinico atteso).

Effetti collaterali

L'interferone appartiene alla categoria dei farmaci che possono causare un gran numero di reazioni avverse da vari sistemi e organi. Nella maggior parte dei casi, sono una conseguenza della somministrazione di interferone per via endovenosa, sottocutanea o intramuscolare, ma possono anche essere provocati da altre forme farmaceutiche del farmaco.

Le reazioni avverse più comuni legate all'assunzione di IFN sono:

• anoressia;
• nausea;
• brividi;
• tremore nel corpo.

Un po' meno comuni sono il vomito, l'aumento della pressione sanguigna, la sensazione di secchezza delle fauci, la caduta dei capelli (), astenia ; sintomi non specifici che ricordano sintomi influenzali ; mal di schiena, stati depressivi , dolore muscoloscheletrico , pensieri di suicidio e tentato suicidio, malessere generale, alterazione del gusto e della concentrazione, aumento dell'irritabilità, disturbi del sonno (spesso), ipotensione arteriosa , confusione.

Gli effetti collaterali rari includono: dolore nella parte destra dell'addome superiore, eruzioni cutanee sul corpo (eritematose e maculopapulari), aumento del nervosismo, dolore e grave infiammazione nel sito di iniezione del farmaco, infezione virale secondaria (compresa l'infezione virus dell'herpes simplex ), aumento della secchezza della pelle, , dolore agli occhi , congiuntivite , visione offuscata, disfunzione ghiandole lacrimali , ansia, labilità dell'umore; disturbi psicotici , inclusa una maggiore aggressività, ecc.; ipertermia , sintomi dispeptici , disturbi respiratori, perdita di peso, feci non formate, iper- o ipotiroidismo , disturbi dell'udito (fino alla sua completa perdita), formazione di infiltrati nei polmoni, aumento dell'appetito, sanguinamento delle gengive alle estremità, dispnea , disfunzione renale e sviluppo di insufficienza renale , ischemia periferica , iperuricemia , neuropatia eccetera..

Il trattamento con farmaci IFN può causare disfunzione riproduttiva . Studi sui primati hanno dimostrato che l'interferone interrompe il ciclo mestruale nelle donne . Inoltre, nelle donne in trattamento con farmaci IFN-α, il livello di .

Per questo motivo, se viene prescritto l'interferone, dovrebbero usarlo le donne in età fertile contraccezione di barriera . Si consiglia inoltre agli uomini in età riproduttiva di essere informati sui potenziali effetti collaterali.

In rari casi, il trattamento con interferone può essere accompagnato da disturbi oftalmologici, che si esprimono come emorragie nella retina dell'occhio , retinopatia (incluso ma non limitato a edema maculare ), cambiamenti focali nella retina, diminuzione dell'acuità visiva e/o campi visivi limitati, papilledema , neurite del nervo ottico (secondo cranico). , ostruzione arteriosa O vene retiniche .

A volte, durante l'assunzione di interferone, possono svilupparsi iperglicemia , sintomi della sindrome nefrosica , . Nei pazienti con diabete mellito il quadro clinico della malattia può peggiorare.

La possibilità che si verifichi non può essere esclusa emorragia cerebrovascolare , eritema multiforme , necrosi dei tessuti nel sito di iniezione, ischemia cardiaca e cerebrovascolare , ipertrigliceridermia , sarcoidosi (o aggravamento del suo decorso), Le sindromi di Lyell E Stevens-Johnson .

L'uso dell'interferone in monoterapia o in combinazione con Ribavirina in casi isolati può provocare anemia aplastica (AA) o anche PAKKM ( aplasia completa del midollo osseo rosso ).

Ci sono stati anche casi in cui, durante il trattamento con farmaci a base di interferone, un paziente ha sviluppato vari disturbi autoimmune E disturbi immunomediati (Compreso La malattia di Werlhof E Malattia di Moschkowitz ).

Interferone, istruzioni per l'uso (metodo e dosaggio)

Le istruzioni per l'uso degli interferoni alfa, beta e gamma indicano che prima di prescrivere il farmaco al paziente, si consiglia di determinare la sensibilità del paziente ad esso , che ha causato la malattia.

Il metodo di somministrazione dell'interferone leucocitario umano è determinato in base alla diagnosi data al paziente. Nella maggior parte dei casi, viene prescritto come iniezione sottocutanea, ma in alcuni casi il farmaco può essere iniettato nel muscolo o nella vena.

La dose di trattamento, la dose di mantenimento e la durata del trattamento vengono determinate in base alla situazione clinica e alla risposta del paziente alla terapia prescrittagli.

Per interferone “per bambini” intendiamo un farmaco sotto forma di supposte, gocce e unguenti.

Le istruzioni per l'uso dell'interferone per i bambini raccomandano l'uso di questo farmaco sia come agente terapeutico che come agente profilattico. La dose per neonati e bambini più grandi viene selezionata dal medico curante.

A scopo preventivo, l'INF viene utilizzato sotto forma di soluzione, per la preparazione della quale viene utilizzata acqua distillata o bollita a temperatura ambiente. La soluzione finita è colorata di rosso e opalescente. Dovrebbe essere conservato in frigorifero per non più di 24-48 ore. Il farmaco viene instillato nel naso di bambini e adulti.

A malattie oftalmiche virali il farmaco viene prescritto sotto forma di collirio.

Non appena la gravità dei sintomi della malattia diminuisce, il volume delle instillazioni deve essere ridotto a una goccia. Il corso del trattamento dura da 7 a 10 giorni.

Per il trattamento delle lesioni causate da virus dell'herpes , l'unguento viene applicato in uno strato sottile sulle zone interessate della pelle e delle mucose due volte al giorno, mantenendo intervalli di 12 ore. Il corso del trattamento dura da 3 a 5 giorni (fino al completo ripristino dell'integrità della pelle e delle mucose danneggiate).

Per la prevenzione infezioni respiratorie acute e deve essere lubrificato con un unguento passaggi nasali . La frequenza delle procedure durante la 1a e la 3a settimana del corso è 2 volte al giorno. Si consiglia di fare una pausa durante la 2a settimana. A scopo preventivo, l'interferone dovrebbe essere utilizzato durante l'intero periodo epidemie di malattie respiratorie .

La durata del corso di riabilitazione nei bambini che spesso sperimentano infezioni virali-batteriche ricorrenti delle vie respiratorie , Organi ORL , infezione ricorrente , causato virus dell'herpes simplex , è di due mesi.

Come diluire e come usare l'interferone nelle fiale?

Le istruzioni per l'uso dell'interferone in fiale indicano che prima dell'uso è necessario aprire la fiala, versare acqua (distillata o bollita) a temperatura ambiente fino al segno sulla fiala corrispondente a 2 ml.

Il contenuto viene agitato delicatamente fino a completa dissoluzione. La soluzione viene iniettata in ciascuno cavità nasale due gocce al giorno, cinque gocce, mantenendo intervalli di almeno sei ore tra le somministrazioni.

A scopo terapeutico, l'IFN inizia ad essere assunto alla comparsa dei primi sintomi. sintomi influenzali . Prima il paziente inizia a prenderlo, maggiore è l'efficacia del farmaco.

Il metodo di inalazione (attraverso il naso o la bocca) è considerato il più efficace. Per un'inalazione si consiglia di assumere il contenuto di tre fiale del farmaco, sciolto in 10 ml di acqua.

L'acqua viene preriscaldata ad una temperatura non superiore a +37 °C. Le procedure di inalazione vengono eseguite due volte al giorno, mantenendo un intervallo di almeno una o due ore tra di loro.

Quando spruzzato o instillato, il contenuto della fiala viene sciolto in due ml di acqua e 0,25 ml (o cinque gocce) vengono somministrati in ciascun passaggio nasale da tre a sei volte al giorno. La durata del trattamento è di 2-3 giorni.

A scopo preventivo, le gocce nasali per i bambini vengono instillate (5 gocce) due volte al giorno; nella fase iniziale della malattia, la frequenza delle instillazioni viene aumentata: il farmaco deve essere somministrato almeno da cinque a sei volte al giorno ogni ora o due .

Molte persone sono interessate a sapere se la soluzione di interferone può essere gocciolata negli occhi. La risposta a questa domanda è sì.

Overdose

Non sono stati descritti casi di sovradosaggio di interferone.

Interazione

β-IFN è compatibile con farmaci corticosteroidi e ACTH. Non deve essere assunto durante il trattamento farmaci mielosoppressivi , incluso citostatici (questo potrebbe causare effetto additivo ).

Il beta-IFN deve essere somministrato con cautela con agenti la cui eliminazione dipende in gran parte sistema del citocromo P450 (farmaci antiepilettici , Alcuni antidepressivi e così via.).

Non dovresti prendere α-IFN e Telbivudin . L'uso simultaneo di α-IFN provoca un reciproco potenziamento dell'azione in relazione a. Se utilizzato insieme a fosfazide possono aumentare reciprocamente mielotossicità entrambi i farmaci (si consiglia di monitorare attentamente le variazioni della quantità granulociti E;

A sepsi ;

per il trattamento dei bambini infezione virale (ad esempio, o);

per la cura epatite virale cronica .

L'IFN viene utilizzato anche in terapia, il cui scopo è la riabilitazione di persone frequentemente malate. Infezioni respiratorie bambini.

L'opzione più ottimale per i bambini sono le gocce nasali: se usato in questo modo, l'interferone non penetra nel tratto gastrointestinale (prima di diluire il farmaco per il naso, l'acqua deve essere riscaldata ad una temperatura di 37°C).

Per i neonati, l'interferone viene prescritto sotto forma di supposte (150mila UI). Le supposte per i bambini devono essere somministrate una alla volta 2 volte al giorno, mantenendo intervalli di 12 ore tra le somministrazioni. Il corso del trattamento è di 5 giorni. Per curare completamente un bambino ARVI Di norma, un corso è sufficiente.

Per il trattamento, dovresti assumere 0,5 g di unguento due volte al giorno. Il trattamento dura in media 2 settimane. Nelle successive 2-4 settimane, l'unguento viene utilizzato 3 volte a settimana.

Numerose recensioni positive sul farmaco indicano che in questa forma di dosaggio si è affermato anche come trattamento efficace per stomatite E tonsille infiammate . Le inalazioni di interferone per i bambini non sono meno efficaci.

L'effetto dell'uso del farmaco aumenta notevolmente se per somministrarlo si utilizza un nebulizzatore (è necessario utilizzare un dispositivo che nebulizzi particelle con un diametro superiore a 5 micron). Le inalazioni attraverso un nebulizzatore hanno le loro specifiche.

Innanzitutto, l'interferone deve essere inalato attraverso il naso. In secondo luogo, prima di utilizzare l'apparecchio, è necessario disattivare la funzione di riscaldamento (l'IFN è una proteina; a temperature superiori a 37°C viene distrutta).

Per l'inalazione in un nebulizzatore, il contenuto di una fiala viene diluito in 2-3 ml di acqua distillata o minerale (per questi scopi è possibile utilizzare anche la soluzione salina). Il volume risultante è sufficiente per una procedura. La frequenza delle procedure durante il giorno va da 2 a 4.

È importante ricordare che il trattamento a lungo termine dei bambini con interferone non è raccomandato, poiché si sviluppa dipendenza e, quindi, l'effetto atteso non si sviluppa.

Interferone durante la gravidanza

Un'eccezione può essere rappresentata dai casi in cui il beneficio atteso della terapia per la futura mamma supera il rischio di reazioni avverse e effetti dannosi sullo sviluppo del feto.

Non si può escludere la possibilità di isolare componenti ricombinanti dell’IFN nel latte materno. A causa della possibilità di esposizione del feto attraverso il latte, l'IFN non è prescritto alle donne che allattano.

Come ultima risorsa, quando non è possibile evitare la somministrazione di IFN, si consiglia alla donna di non allattare durante la terapia. Per mitigare gli effetti collaterali del farmaco (la comparsa di sintomi simil-influenzali), si consiglia la somministrazione simultanea con IFN. .

Incluso nei preparativi

Incluso nell'elenco (Ordinanza del Governo della Federazione Russa n. 2782-r del 30 dicembre 2014):

VED

ONLS

ATX:

L.03.A.B.05 Interferone alfa-2b

Farmacodinamica:

Interferone. È un ricombinante altamente purificato con un peso molecolare di 19.300 dalton. Derivato da un clone Escherichia coli ibridando plasmidi batterici con il gene dei leucociti umani che codifica per la sintesi dell'interferone. A differenza dell'interferone, l'alfa-2a si trova in posizione 23.

Ha un effetto antivirale, dovuto all'interazione con specifici recettori di membrana e all'induzione della sintesi dell'RNA e, in definitiva, delle proteine. Questi ultimi, a loro volta, impediscono la normale riproduzione del virus o la sua diffusione.

Ha attività immunomodulante, che è associata all'attivazione della fagocitosi, alla stimolazione della formazione di anticorpi e linfochine.

Ha un effetto antiproliferativo sulle cellule tumorali.

Il farmaco aumenta l'attività fagocitaria dei macrofagi e potenzia l'effetto citotossico dei linfociti.

Farmacocinetica:

Penetra nel flusso sanguigno sistemico attraverso la mucosa delle vie respiratorie, subisce una degradazione nel corpo e viene parzialmente escreto immodificato, principalmente attraverso i reni. L'uso locale per il trattamento delle infezioni virali fornisce un'alta concentrazione di interferone nel sito dell'infiammazione. Metabolizzato dal fegato, l'emivita è di 2-6 ore.

Indicazioni:

Epatite cronica B;

Leucemia a cellule capellute;

Carcinoma a cellule renali;

Pelle T -linfoma cellulare (micosi fungoide e sindrome di Sezary);

IN epatite virale B;

IN epatite C virale attiva;

Leucemia mieloide cronica;

Sarcoma di Kaposi dovuto all'AIDS;

Melanoma maligno;

- trombocitosi primaria (essenziale) e secondaria;

- forma transitoria di leucemia granulocitica cronica e mielofibrosi;

- mieloma multiplo;

Cancro al rene;

- reticolosarcoma;

- sclerosi multipla;

- prevenzione e trattamento dell'influenza e delle infezioni virali respiratorie acute.

I.B15-B19.B16 Epatite acuta B

I.B15-B19.B18.1 Epatite virale cronica B senza agente delta

I.B15-B19.B18.2 Epatite virale cronica C

I.B20-B24.B21.0 Malattia causata dall'HIV con manifestazioni del sarcoma di Kaposi

II.C43-C44.C43 Melanoma maligno della pelle

II.C64-C68.C64 Tumori maligni del rene diverso dalla pelvi renale

II.C81-C96.C84 Linfomi a cellule T periferici e cutanei

II.C81-C96.C84.0 Micosi fungoide

II.C81-C96.C84.1 Malattia di Sézary

II.C81-C96.C91.4 Leucemia a cellule capellute (reticoloendoteliosi leucemica)

II.C81-C96.C92.1 Leucemia mieloide cronica

Controindicazioni:

D cirrosi epatica non compensata;

Psicosi;

-maggiore sensibilità all'interferone alfa-2 B;

- gravi malattie cardiovascolari;

T grave depressione;

UN dipendenza da alcol o droghe;

- Malattie autoimmuni;

-Oinfarto miocardico acuto;

- gravi disturbi del sistema ematopoietico;

-epilessia e/o altri disturbi del sistema nervoso centrale;

-epatite cronica in pazienti sottoposti o recentemente sottoposti a terapia immunosoppressiva (ad eccezione del pretrattamento a breve termine con steroidi).

Accuratamente:

-malattie del fegato;

-malattie renali;

-violazione dell'ematopoiesi del midollo osseo;

-tendenza alle malattie autoimmuni;

-tendenza ai tentativi di suicidio.

Gravidanza e allattamento:

Raccomandazione FDA categoria C. Nessun dato di sicurezza disponibile. Non usare! L'uso durante la gravidanza è possibile solo se il potenziale beneficio per la madre supera il potenziale danno per il bambino.

Durante l'utilizzo del farmaco è necessario utilizzare un metodo contraccettivo.

Non ci sono informazioni sulla penetrazione nel latte materno. Non usare durante l'allattamento.

Istruzioni per l'uso e il dosaggio:

Somministrato per via endovenosa o sottocutanea. La dose viene stabilita individualmente in base alla diagnosi e alle caratteristiche individuali del paziente.

Somministrazione sottocutanea alla dose di 0,5-1 mcg/kg una volta alla settimana per 6 mesi. La dose viene selezionata tenendo conto dell'efficacia e della sicurezza previste. Se dopo 6 mesi l'RNA del virus viene eliminato dal siero, il trattamento viene continuato fino a un anno. Se durante il trattamento si verificano reazioni indesiderate, la dose viene ridotta di 2 volte. Se gli effetti indesiderati persistono o si ripresentano dopo la modifica della dose, il trattamento viene interrotto. Si raccomanda inoltre di ridurre la dose se la conta dei neutrofili diminuisce a meno di 0,75×10 9 /l o la conta delle piastrine diminuisce a meno di 50×10 9 /l. La terapia viene interrotta quando il numero dei neutrofili scende a meno di 0,5×10 9 /l o delle piastrine a meno di 25×10 9 /l. In caso di grave disfunzione renale (clearance inferiore a 50 ml/min), i pazienti devono essere costantemente monitorati. Se necessario, la dose settimanale del farmaco viene ridotta. Non è richiesto alcun aggiustamento della dose in base all’età. Preparazione della soluzione: il contenuto polveroso del flacone viene sciolto in 0,7 ml di acqua per preparazioni iniettabili, il flacone viene agitato delicatamente fino a completa dissoluzione della polvere. La soluzione finita deve essere ispezionata prima della somministrazione; Se il colore cambia, non deve essere utilizzato. Per la somministrazione utilizzare fino a 0,5 ml di soluzione, il resto viene smaltito.

Per il trattamento dell'influenza e dell'ARVI -aerosol per uso topico 100.000 UI, somministrato 7 volte al giorno, ogni 2 ore (dose giornaliera - fino a 20.000 UI) nei primi due giorni di malattia, poi 3 volte al giorno (dose giornaliera - fino a 10.000 UI) per cinque giorni o fino alla completa scomparsa dei sintomi.

La terapia con interferone viene effettuata sullo sfondo della terapia sintomatica tradizionale, compreso l'uso di farmaci antinfiammatori non steroidei (,) quando la temperatura supera i 38,5 ° C, antistaminici (diazolina, suprastin, tavegil), antitosse (codelac), farmaci mucolitici (miscela per la tosse), agenti rinforzanti generali (gluconato di calcio, vitamine).

Effetti collaterali:

Dal tratto gastrointestinale: diminuzione dell'appetito, vomito, stitichezza, secchezza delle fauci, lieve dolore addominale, nausea, diarrea,disturbo del gusto, perdita di peso corporeo, lievi cambiamenti negli indicatori di funzionalità epatica.

Dal sistema nervoso: vertigini, disturbi del sonno, ansia, aggressività, depressione, neuropatia, tendenze suicide, deterioramento mentale,disturbi della memoria, nervosismo, euforia, parestesia, tremore, sonnolenza.

Dal sistema circolatorio: ipotensione arteriosa o ipertensione, disturbi del sistema cardiovascolare, infarto del miocardio, trombocitopenia, tachicardia,aritmia, malattia coronarica, leucopenia, granulocitopenia.

Dal sistema respiratorio: tosse, polmonite, dolore toracico,lieve mancanza di respiro, edema polmonare.

Dalla pelle: alopecia reversibile, prurito.

Altri: anticorpi contro interferoni naturali o ricombinanti, rigidità muscolare, sintomi simil-influenzali.

Overdose:

Nessun dato.

Interazione:

Il farmaco inibisce il metabolismo della teofillina.

Istruzioni speciali:

Durante il periodo di utilizzo del farmaco è necessario monitorare lo stato mentale e neurologico del paziente.

Nei pazienti con malattie del sistema cardiovascolare, è possibile l'aritmia. Se l'aritmia non diminuisce o non aumenta, la dose deve essere ridotta di 2 volte o il trattamento deve essere interrotto.

In caso di grave soppressione dell'ematopoiesi del midollo osseo, è necessario un esame regolare della composizione del sangue periferico.

Impatto sulla capacità di guidare veicoli e altri dispositivi tecnici

Il farmaco sotto forma di aerosol non influisce sulla capacità di guidare veicoli e mantenere i meccanismi di movimento.

Istruzioni

Forma di rilascio, composizione e confezionamento

Iniezione trasparente, incolore.

Eccipienti:

0,5 ml - fiale (5) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - fiale (5) - confezione di cellule contour (2) - confezioni di cartone.
0,5 ml - flaconi (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - flaconi (5) - confezione contour cell (1) - pacchi di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (1) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (1) - confezione di cellule contour (3) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (3) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
0,5 ml - siringhe di vetro (3) - confezione di cellule contour (3) - confezioni di cartone.

Iniezione trasparente, incolore.

Eccipienti: acetato di sodio, cloruro di sodio, sale disodico dell'acido etilendiamminotetraacetico, Tween-80, destrano 40, acqua per preparazioni iniettabili.

1 ml - fiale (5) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
1 ml - fiale (5) - confezione di cellule di contorno (2) - confezioni di cartone.
1 ml - flaconi (1) - confezioni di cartone.
1 ml - flaconi (5) - confezione contour cell (1) - pacchi di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (1) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (1) - confezione di cellule contour (3) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (3) - confezione di cellule contour (1) - confezioni di cartone.
1 ml - siringhe di vetro (3) - confezione di cellule contour (3) - confezioni di cartone.

Gruppo clinico e farmacologico

Interferone. Farmaco antitumorale, antivirale e immunomodulatore

effetto farmacologico

Interferone. Altevir ® ha effetti antivirali, immunomodulatori, antiproliferativi e antitumorali.

L'interferone alfa-2b, interagendo con specifici recettori sulla superficie cellulare, avvia una complessa catena di cambiamenti all'interno della cellula, inclusa l'induzione della sintesi di un numero di citochine ed enzimi specifici, e interrompe la sintesi dell'RNA virale e delle proteine ​​virali nella cellula. la cellula. Il risultato di questi cambiamenti è un'attività antivirale e antiproliferativa non specifica associata alla prevenzione della replicazione virale nella cellula, all'inibizione della proliferazione cellulare e all'effetto immunomodulatore dell'interferone. L'interferone alfa-2b stimola il processo di presentazione dell'antigene alle cellule immunocompetenti, ha la capacità di stimolare l'attività fagocitica dei macrofagi, nonché l'attività citotossica delle cellule T e delle cellule “natural killer” coinvolte nell'immunità antivirale.

Previene la proliferazione cellulare, in particolare delle cellule tumorali. Ha un effetto inibitorio sulla sintesi di alcuni oncogeni, portando all'inibizione della crescita del tumore.

Farmacocinetica

Aspirazione

Con la somministrazione sottocutanea o intramuscolare dell'interferone alfa-2b, la sua biodisponibilità varia dall'80% al 100%. Dopo la somministrazione di interferone alfa-2b, il T max nel plasma sanguigno è di 4-12 ore, T 1/2 - 2-6 ore, 16-24 ore dopo la somministrazione, l'interferone ricombinante non viene rilevato nel siero del sangue.

Metabolismo

Il metabolismo avviene nel fegato.

Gli interferoni alfa possono interrompere i processi metabolici ossidativi, riducendo l'attività degli enzimi epatici microsomiali del sistema del citocromo P450.

Rimozione

Viene escreto principalmente dai reni mediante filtrazione glomerulare.

Indicazioni per l'uso del farmaco

Come parte della terapia complessa negli adulti:

- con epatite virale cronica B senza segni di cirrosi epatica;

- per l'epatite virale cronica C in assenza di sintomi di insufficienza epatica (monoterapia o terapia di associazione con ribavirina);

- con papillomatosi della laringe;

- per le verruche genitali;

- per leucemia a cellule capellute, leucemia mieloide cronica, linfoma non Hodgkin, melanoma, mieloma multiplo, sarcoma di Kaposi sullo sfondo dell'AIDS, cancro renale progressivo.

Regime di dosaggio

Applicare per via sottocutanea, intramuscolare e endovenosa. Il trattamento deve essere iniziato da un medico. Successivamente, con il permesso del medico, il paziente può somministrare autonomamente una dose di mantenimento (nei casi in cui il farmaco viene prescritto per via sottocutanea o intramuscolare).

Epatite B cronica: Altevir ® viene somministrato per via sottocutanea o intramuscolare alla dose di 5-10 milioni UI 3 volte a settimana per 16-24 settimane. Il trattamento viene interrotto dopo 3-4 mesi di utilizzo in assenza di dinamica positiva (secondo uno studio sul DNA del virus dell'epatite B).

Epatite C cronica: Altevir ® viene somministrato per via sottocutanea o intramuscolare alla dose di 3 milioni UI 3 volte a settimana per 24-48 settimane. Nei pazienti con decorso recidivante della malattia e nei pazienti che non hanno precedentemente ricevuto un trattamento con interferone alfa-2b, l'efficacia del trattamento aumenta con la terapia di associazione con ribavirina. La durata della terapia di combinazione è di almeno 24 settimane. La terapia con Altevir deve essere effettuata per 48 settimane nei pazienti con epatite cronica C e con il 1° genotipo del virus ad alta carica virale, nei quali l'RNA del virus dell'epatite C non viene rilevato nel siero entro la fine delle prime 24 settimane di trattamento.

Papillomatosi laringea: Altevir ® viene somministrato per via sottocutanea alla dose di 3 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana. Il trattamento inizia dopo la rimozione chirurgica (o laser) del tessuto tumorale. La dose viene selezionata tenendo conto della tollerabilità del farmaco. Il raggiungimento di una risposta positiva può richiedere un trattamento per 6 mesi.

Leucemia a cellule capellute: La dose raccomandata di Altevir per la somministrazione sottocutanea a pazienti dopo splenectomia o senza splenectomia è di 2 milioni UI/m 2 3 volte a settimana. Nella maggior parte dei casi, la normalizzazione di uno o più parametri ematologici avviene dopo 1-2 mesi di trattamento; è possibile aumentare la durata del trattamento a 6 mesi. Questo regime posologico deve essere seguito continuamente a meno che non si verifichi una rapida progressione della malattia o sintomi di grave intolleranza al farmaco.

Leucemia mieloide cronica: La dose raccomandata di Altevir in monoterapia è di 4-5 milioni UI/m2 al giorno per via sottocutanea ogni giorno. Per mantenere il numero dei leucociti può essere necessaria una dose di 0,5-10 milioni UI/m2. Se il trattamento consente di controllare il numero dei leucociti, per mantenere la remissione ematologica il farmaco deve essere utilizzato alla dose massima tollerata (4-10 milioni UI/m2 al giorno). Il farmaco deve essere sospeso dopo 8-12 settimane se la terapia non porta ad una remissione ematologica parziale o ad una diminuzione clinicamente significativa del numero dei leucociti.

Linfoma non-Hodgkin: Altevir ® è utilizzato come terapia adiuvante in combinazione con regimi chemioterapici standard. Il farmaco viene somministrato per via sottocutanea alla dose di 5 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana per 2-3 mesi. La dose deve essere aggiustata in base alla tollerabilità del farmaco.

Melanoma: Altevir ® viene utilizzato come terapia adiuvante quando esiste un alto rischio di recidiva negli adulti dopo la rimozione del tumore. Altevir ® viene somministrato per via endovenosa alla dose di 15 milioni UI/m 2 5 volte alla settimana per 4 settimane, quindi per via sottocutanea alla dose di 10 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana per 48 settimane. La dose deve essere aggiustata in base alla tollerabilità del farmaco.

Mieloma multiplo: Altevir ® viene prescritto durante il periodo in cui si raggiunge una remissione stabile alla dose di 3 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana per via sottocutanea.

Sarcoma di Kaposi dovuto all'AIDS: la dose ottimale non è stata stabilita. Il farmaco può essere utilizzato in dosi di 10-12 milioni UI/m2/giorno per via sottocutanea o intramuscolare. Se la malattia si stabilizza o risponde al trattamento, la terapia viene continuata fino alla regressione del tumore o fino alla sospensione del farmaco.

Cancro al rene: La dose e il regime ottimali non sono stati stabiliti. Si consiglia di utilizzare il farmaco per via sottocutanea in dosi comprese tra 3 e 10 milioni UI/m 2 3 volte alla settimana.

Preparazione della soluzione per amministrazione endovenosa

Prelevare il volume di soluzione di Altevir necessario per preparare la dose necessaria, aggiungerlo a 100 ml di soluzione sterile di cloruro di sodio allo 0,9% e somministrarlo nell'arco di 20 minuti.

Effetto collaterale

Reazioni generali: molto spesso - febbre, debolezza (sono reazioni dose-dipendenti e reversibili, scompaiono entro 72 ore dopo l'interruzione del trattamento o la sua cessazione), brividi; meno spesso - malessere.

Dal lato del sistema nervoso centrale: molto spesso - mal di testa; meno spesso - astenia, sonnolenza, vertigini, irritabilità, insonnia, depressione, pensieri e tentativi di suicidio; raramente - nervosismo, ansia.

Dal sistema muscolo-scheletrico: molto spesso - mialgia; meno spesso - artralgia.

Dal sistema digestivo: molto spesso - perdita di appetito, nausea; meno spesso - vomito, diarrea, secchezza delle fauci, alterazione del gusto; raramente - dolore addominale, dispepsia; è possibile un aumento reversibile dell'attività degli enzimi epatici.

Dal sistema cardiovascolare: spesso - diminuzione della pressione sanguigna; raramente - tachicardia.

Reazioni dermatologiche: meno spesso - alopecia, aumento della sudorazione; raramente - eruzione cutanea, prurito.

Dal sistema emopoietico: possibile leucopenia reversibile, granulocitopenia, diminuzione dei livelli di emoglobina, trombocitopenia.

Altri: raramente - perdita di peso, tiroidite autoimmune.

Controindicazioni all'uso del farmaco

- storia di gravi malattie cardiovascolari (insufficienza cardiaca cronica non controllata, recente infarto miocardico, gravi disturbi del ritmo cardiaco);

- grave insufficienza renale e/o epatica (comprese quelle causate dalla presenza di metastasi);

- epilessia, nonché grave disfunzione del sistema nervoso centrale, espressa soprattutto da depressione, pensieri e tentativi di suicidio (inclusa una storia);

- epatite cronica con cirrosi epatica scompensata e in pazienti sottoposti o recentemente sottoposti a trattamento con immunosoppressori (ad eccezione del trattamento completato a breve termine con corticosteroidi);

— epatite autoimmune o altra malattia autoimmune;

- trattamento con immunosoppressori dopo il trapianto;

- una malattia della tiroide che non può essere controllata con metodi terapeutici generalmente accettati;

— malattie polmonari scompensate (compresa la BPCO);

— diabete mellito scompensato;

- ipercoagulazione (inclusa tromboflebite, embolia polmonare);

- grave mielodepressione;

- gravidanza;

- periodo di allattamento (allattamento al seno);

- ipersensibilità ai componenti del farmaco.

Uso del farmaco durante la gravidanza e l'allattamento

Il farmaco è controindicato durante la gravidanza e l'allattamento (allattamento al seno).

Utilizzare per la disfunzione epatica

Utilizzare per insufficienza renale

Il farmaco è controindicato in caso di grave insufficienza renale e/o epatica (comprese quelle causate dalla presenza di metastasi).

istruzioni speciali

Prima del trattamento con Altevir per l'epatite virale cronica B e C, si raccomanda di eseguire una biopsia epatica per valutare l'entità del danno epatico (segni di processo infiammatorio attivo e/o fibrosi). L'efficacia del trattamento dell'epatite cronica C aumenta con la terapia di combinazione con Altevir e ribavirina. L'uso di Altevir non è efficace nello sviluppo di cirrosi epatica scompensata o di coma epatico.

Se durante il trattamento con Altevir si verificano effetti collaterali, la dose del farmaco deve essere ridotta del 50% oppure il farmaco deve essere temporaneamente sospeso fino alla loro scomparsa. Se gli effetti collaterali persistono o si ripresentano dopo la riduzione della dose, o se si osserva una progressione della malattia, il trattamento con Altevir deve essere interrotto.

Se il livello delle piastrine scende al di sotto di 50x10 9 /l o il livello dei granulociti al di sotto di 0,75x10 9 /l, si raccomanda di ridurre la dose di Altevir di 2 volte monitorando gli esami del sangue dopo 1 settimana. Se questi cambiamenti persistono, il farmaco deve essere sospeso.

Se il livello delle piastrine scende al di sotto di 25x10 9 /l o il livello dei granulociti al di sotto di 0,5 x10 9 /l, si consiglia di interrompere il farmaco Altevir ® monitorando gli esami del sangue dopo 1 settimana.

Nei pazienti che ricevono preparazioni di interferone alfa-2b, nel siero del sangue possono essere rilevati anticorpi che neutralizzano la sua attività antivirale. In quasi tutti i casi, i titoli anticorpali sono bassi, la loro comparsa non porta ad una diminuzione dell'efficacia del trattamento o alla comparsa di altri disturbi autoimmuni.

Overdose

I dati su overdose della medicina Altevir ® non sono provvisti.

Interazioni farmacologiche

Le interazioni farmacologiche tra Altevir e altri farmaci non sono state completamente studiate. Altevir deve essere usato con cautela contemporaneamente ad ipnotici e sedativi, analgesici narcotici e farmaci che potenzialmente hanno un effetto mielosoppressivo.

Quando Altevir e teofillina vengono prescritti contemporaneamente, la concentrazione di quest'ultima nel siero del sangue deve essere monitorata e, se necessario, il suo regime posologico deve essere modificato.

Quando Altevir viene utilizzato in combinazione con farmaci chemioterapici (citarabina, ciclofosfamide, doxorubicina, teniposide), aumenta il rischio di sviluppare effetti tossici.

Condizioni per la dispensazione dalle farmacie

Il farmaco è disponibile con prescrizione medica.

Condizioni e periodi di conservazione

Il farmaco deve essere conservato fuori dalla portata dei bambini, in conformità con SP 3.3.2-1248-03 ad una temperatura compresa tra 2° e 8°C; non congelare. Durata di conservazione: 18 mesi.

Trasporto a temperature da 2° a 8°C; non congelare.

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L'invenzione riguarda l'ingegneria genetica, la biotecnologia, la medicina, la farmacologia. Un nuovo DNA plasmidico ricombinante multicopia pSX50, che codifica la sintesi dell'interferone alfa-2b dei leucociti umani, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore della trascrizione. Come risultato della trasformazione delle cellule del ceppo ricevente E. coli BL21 con DNA plasmidico ricombinante pSX50, è stato ottenuto il ceppo E. coli SX50, un produttore di interferone alfa-2b umano leucocitario ricombinante con una produttività fino a 0,9-1,0 g di interferone alfa-2b da 1 litro di terreno di coltura. Il metodo per la produzione dell'interferone alfa-2b ricombinante si basa sull'uso di un ceppo ricombinante creato di E. coli SX50 e prevede la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un contenuto ridotto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi nel processo di biosintesi , distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione della proteina aggregata in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato, seguita da rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e sua purificazione mediante purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su Resine chelanti Sepharose Fast Flow immobilizzate con ioni Cu +2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come Sephsrose Fast Flow SM e cromatografia per filtrazione su gel su resine tipo Superdex 75. Il metodo consente di ottenere una sostanza di interferone superiore al 99% purezza secondo elettroforesi in condizioni riducenti e non riducenti durante la colorazione di gel con argento e superiore al 98% secondo RF HPLC e privo di pirogeni (test LAL) in quantità di almeno 400-800 mg per 1 litro di terreno di coltura. 3 n. e 3 posizioni salariali, 6 ill.

Disegni per il brevetto RF 2242516

L'invenzione riguarda i medicinali geneticamente modificati ottenuti mediante biotecnologia, vale a dire i metodi per la produzione industriale dell'interferone alfa-2b ricombinante dei leucociti umani per scopi medici (di seguito denominato interferone), nonché i ceppi produttori di Escherichia coli (E. coli) e DNA plasmidico, che codifica per la sintesi dell'interferone.

Gli interferoni sono molecole proteiche con un peso molecolare compreso tra 15.000 e 21.000 dalton prodotte e secrete dalle cellule in risposta a infezioni virali o altri agenti patogeni. Esistono tre gruppi principali di interferoni: alfa, beta e gamma. Questi gruppi stessi non sono omogenei e possono contenere diverse specie molecolari di interferone. Pertanto, sono state identificate più di 14 varietà genetiche di interferone alfa, che sono interessanti e ampiamente utilizzate in medicina come agenti antivirali, antiproliferativi e immunomodulatori.

Sono noti metodi per ottenere interferone leucocitario umano da leucociti di sangue di donatori umani indotti da virus e altri induttori (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873).

Lo svantaggio principale di questi metodi per la produzione di interferoni è la probabilità di contaminazione del prodotto finale con virus umani, come il virus dell'epatite B e C, il virus dell'immunodeficienza, ecc.

Attualmente, il metodo di produzione dell'interferone mediante sintesi microbiologica è stato riconosciuto come più promettente, il che consente di ottenere il prodotto target con una resa significativamente più elevata da materiali di partenza relativamente economici. Gli approcci qui utilizzati consentono di creare varianti di un gene strutturale ottimali per l’espressione batterica, nonché elementi regolatori che ne controllano l’espressione.

Come microrganismi di origine vengono utilizzati vari tipi di ceppi di Pichia pastoris, Pseudomonas putida ed Escherichia coli.

Lo svantaggio di utilizzare P. pastoris come produttore di interferone (J.N. Garcia, J.A. Aguiar et. al. //High level express of human IFN-2b in Pichia pastoris.//Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), Le condizioni di fermentazione di questo tipo di lievito sono estremamente difficili, la necessità di mantenere rigorosamente la concentrazione dell'induttore, in particolare del metanolo, durante il processo di biosintesi. Lo svantaggio di usare Ps. putida (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) è la complessità del processo di fermentazione a basso livello di espressione (10 mg di interferone per 1 litro di terreno di coltura). Più produttivo è l'utilizzo di ceppi di Escherichia coli (Semin. Oncol., 1997, Iun; 24 (3 Suppl. 9): S9-41-S9-51).

Sono noti un gran numero di plasmidi e ceppi di E. coli creati sulla loro base che esprimono interferone: ceppi di E. coli ATCC 31633 e 31644 con plasmidi Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 o Z-pBR 322(Pstl)/ HclN SN 35 -AHL6 (SU 1764515), ceppo di E. coli pINF-AP2 (SU 1312961), ceppo di E. coli pINF-F-Pa (AU 1312962), ceppo di E. Coli SG 20050 con plasmide p280/21FN (Kravchenko V.V. e altri, Chimica bioorganica, 1987, v. 13, n. 9, pp. 1186-1193), ceppo E. coli SG 20050 con plasmide pINF14 (SU 1703691), ceppo E. coli SG 20050 con plasmide pINF16 (RU 2054041) e così via. Lo svantaggio delle tecnologie basate sull'uso di questi ceppi è la loro instabilità, nonché il livello insufficiente di espressione dell'interferone.

Oltre alle caratteristiche dei ceppi utilizzati, l'efficienza del processo dipende in gran parte dalla tecnologia utilizzata per l'isolamento e la purificazione dell'interferone.

Esiste un metodo noto per produrre interferone, che include la coltura di cellule Ps. putida, distruzione della biomassa, trattamento con polietilenimmina, frazionamento con solfato di ammonio, cromatografia idrofobica su fenilsilocromo C-80, frazionamento a pH del lisato, sua concentrazione e diafiltrazione, cromatografia a scambio ionico su cellulosa DE-52, eluizione in gradiente di pH, ione cromatografia a scambio dell'eluente risultante su cellulosa SM -52, concentrazione mediante passaggio attraverso una cassetta per filtri e filtrazione su gel su Sephadex G-100 (SU 1640996). Lo svantaggio di questo metodo, oltre alla complessa fermentazione in più fasi, è il processo in più fasi per ottenere il prodotto finale.

Esiste anche un metodo noto per produrre interferone, che prevede la coltivazione del ceppo di E. coli SG 20050/pIF16 in brodo LB in beute in un agitatore termostatato, la centrifugazione della biomassa, il lavaggio con una soluzione tampone e un trattamento ad ultrasuoni per distruggere le cellule. Il lisato risultante viene centrifugato, lavato con una soluzione di urea 3M in tampone, sciolto in una soluzione di cloruro di guanidina in tampone, trattato con ultrasuoni, centrifugato, solfitolisi ossidativa, dialisi contro urea 8 M, rinaturazione e cromatografia finale a due stadi su CM- 52 cellulosa e Sephadex G-50 (RU 2054041). Gli svantaggi di questo metodo sono la produttività relativamente bassa delle fasi principali del processo di isolamento e purificazione. Ciò vale soprattutto per il trattamento ad ultrasuoni del prodotto, la dialisi e la solfitolisi ossidativa, che porta all'instabilità della resa dell'interferone, nonché all'impossibilità di utilizzare questo metodo per la produzione industriale dell'interferone.

Come analogo più vicino (prototipo), può essere indicato un metodo per ottenere l'interferone leucocitario umano, che consiste nel coltivare un ceppo ricombinante di E. coli, congelare la biomassa risultante a una temperatura non superiore a -70°C, scongelare e distruggere le cellule dei microrganismi con lisozima, rimozione di DNA e RNA mediante introduzione nel lisato di DNAsi e purificazione della forma insolubile isolata di interferone mediante lavaggio con una soluzione tampone con detergenti, dissoluzione del precipitato di interferone in una soluzione di guanidina cloridrato, rinaturazione e purificazione in una sola fase mediante ioni cromatografia di scambio. Come produttore viene utilizzato il ceppo di E. coli SS5 ottenuto utilizzando il plasmide ricombinante pSS5 contenente tre promotori: P lac , P t7 e P trp, ed il gene dell'interferone alfa con sostituzioni nucleotidiche introdotte.

L'espressione dell'interferone da parte del ceppo di E. coli SS5 contenente questo plasmide è controllata da tre promotori: P lac , P t7 e P trp . Il livello di espressione dell'interferone è di circa 800 mg per 1 litro di sospensione cellulare (RU 2165455).

Lo svantaggio di questo metodo è la bassa efficienza tecnologica dell'utilizzo della distruzione enzimatica delle cellule, del DNA e dell'RNA del microrganismo e della purificazione cromatografica in una fase dell'interferone. Ciò provoca instabilità nel processo di rilascio dell'interferone, porta ad una diminuzione della sua qualità e limita la possibilità di utilizzare lo schema di cui sopra per la produzione industriale di interferone. Gli svantaggi di questo plasmide e del ceppo basato su di esso sono l'uso nel plasmide di un forte promotore non regolato del fago T7 nel ceppo di E. coli BL21 (DE3), in cui il gene della RNA polimerasi T7 si trova sotto il promotore di l'operone lac e che è sempre “scorrevole”. Di conseguenza, la sintesi dell'interferone avviene continuamente nella cellula, il che porta alla dissociazione del plasmide e ad una diminuzione della vitalità delle cellule del ceppo e, di conseguenza, ad una diminuzione della resa dell'interferone.

L'obiettivo della presente invenzione è costruire un ceppo produttore industriale ricombinante di E. coli utilizzando un nuovo DNA plasmidico ricombinante con un elevato livello di biosintesi dell'interferone e sviluppare un'efficace tecnologia industriale per la produzione di una sostanza interferonica per uso medico, corrispondente in termini di qualità alla "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b.

Questo problema è stato risolto creando il DNA plasmidico ricombinante pSX50 e il ceppo di Escherichia coli SX50, depositato nella Collezione tutta russa di ceppi industriali dell'Istituto statale di ricerca genetica dell'impresa unitaria dello Stato federale, numero VKPM B-8550,

nonché un metodo per la produzione di interferone alfa-2b ricombinante, basato sull'uso di un ceppo ricombinante di E. coli SX50 e che prevede la sua coltivazione profonda su un mezzo nutritivo con un contenuto ridotto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi nel processo della biosintesi, distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione, dissoluzione delle proteine ​​aggregate in una soluzione concentrata di guanidina cloridrato, seguita dalla rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici e purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine quali come Chelante Sepharose Fast Flow, immobilizzato con ioni Cu+2, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico come CM Sepharose Fast Flow e cromatografia con filtrazione su gel su resine come Superdex 75.

Secondo l'invenzione viene proposto un nuovo DNA plasmidico ricombinante multicopia pSX50, che codifica la sintesi dell'interferone alfa-2b dei leucociti umani, la cui espressione è sotto il controllo dei promotori del lattosio e del triptofano e di un terminatore della trascrizione. Il plasmide pSX50 ha 3218 paia di basi (bp) ed è caratterizzato dalla presenza dei seguenti frammenti:

La sequenza dal nucleotide 1 al nucleotide (nt) 176 include un frammento di DNA di 176 bp contenente il promotore del triptofano (P trp);

Sequenza da 177 nt. al 194 n. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente la sequenza Shine Delgarno, responsabile dell'inizio della traduzione;

Sequenza da 195 nt. al 695 n. include un frammento di DNA di 501 bp di dimensione contenente la sequenza del gene dell'interferone con le seguenti sostituzioni nucleotidiche: in posizione 37, sostituzione di A con C, in posizione 39, sostituzione di G con T, in posizione 40, sostituzione di A con C, alla posizione 42, sostituzione di G con T , alla posizione 67, sostituzione di A con C, alla posizione 69, sostituzione di G con T, alla posizione 70, sostituzione di A con C, alla posizione 72, sostituzione di A con T, in posizione 96, sostituzione di G con A, in posizione 100, sostituzione di A con C, in in posizione 102, sostituzione di A con T, in posizione 114, sostituzione di A con C, in posizione 120, sostituzione di C con G, alla posizione 126, sostituzione di G con A, alla posizione 129, sostituzione di G con A, alla posizione 330, sostituzione di C con G, alla posizione 339 sostituzione di G con A, alla posizione 342 sostituzione di G con A, in posizione 487 sostituire A con C, in posizione 489 sostituire A con T, in posizione 495 sostituire G con A;

Sequenza da 696 nt. secondo 713 n. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polilinker sintetico;

Sequenza da 714 nt. al 1138 n. include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 con 4129 nt. al 4553 n. 425 bp, contenente la sequenza del terminatore stretto di trascrizione rrnBT 1 T 2;

Sequenza dal 1139 a.C. al 1229 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 con 2487 nt. al 2577 n. 91 bp, contenente il promotore del gene della β-lattomasi (gene della resistenza all'ampicillina - Amp R);

Sequenza dal 1230 a.C. al 2045 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 nt. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan;

Sequenza dal 2046 a.C. al 3218 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 nt. 1173 bp, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).

Le Figure 1-5 mostrano i diagrammi di costruzione e una mappa fisica del plasmide pSX50.

La Figura 6 mostra la sequenza nucleotidica completa determinata per il plasmide pSX50.

Il ceppo di Escherichia coli SX50 è stato ottenuto trasformando le cellule di Escherichia coli BL21 con il plasmide pSX50 utilizzando la tradizionale tecnologia di ingegneria genetica. Il ceppo E.Coli SX50 è caratterizzato dalle seguenti caratteristiche.

Caratteristiche culturali e morfologiche

Le cellule sono piccole, diritte, ispessite, a forma di bastoncino, Gram-negative, prive di spore. Le cellule crescono bene su terreni nutritivi semplici. Quando si coltiva su agar Difco si formano colonie rotonde, lisce, convesse, torbide, lucide, grigie con bordi lisci. Quando coltivato in terreno liquido (in terreno minimo con glucosio o in brodo LB), si forma una torbidità intensa e uniforme.

Caratteristiche fisiche e biologiche

Aerobio. L'intervallo di temperatura per la crescita è 4-42°C con un pH ottimale di 6,5-7,5.

Come fonte di azoto vengono utilizzati sia i sali minerali sotto forma di ammonio e nitrato, sia i composti organici sotto forma di aminoacidi, peptone, triptone, estratto di lievito, ecc.

Come fonte di carbonio vengono utilizzati aminoacidi, glicerolo e carboidrati. Resistenza agli antibiotici. Le cellule mostrano resistenza alla kanamicina (fino a 100 μg/ml).

Il ceppo Escherichia coli 8X50 è un produttore di interferone.

Metodo, condizioni e composizione del mezzo di conservazione dei ceppi

In L-arape con l'aggiunta di kanamicina ad una concentrazione di 20 mcg/ml sotto olio, in L-brodo contenente il 15% di glicerolo e antibiotici appropriati in fiale a una temperatura di meno 70°C, allo stato liofilizzato in fiale a temperatura di più 4°C.

Il ceppo di Escherichia coli SX50 è stato identificato secondo la Guida di Bergey (1974) come un ceppo della specie Escherichia coli.

Metodo per la produzione industriale dell'interferone alfa-2b

Una caratteristica del metodo proposto è lo sviluppo di una tecnologia che consente l'isolamento dell'interferone da una forma insolubile che si accumula durante la fermentazione, che consente di semplificare significativamente lo schema tecnologico del processo di isolamento e aumentare la resa del prodotto target.

Il metodo consiste nel coltivare il ceppo Escherichia coli SH50 in un mezzo nutritivo, con l'aggiunta costante di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito, nel processo di biosintesi, preferibilmente con un contenuto ridotto di triptofano, distruzione meccanica delle cellule di microrganismi ad alta pressione 700-900 bar, dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato, rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici, seguita da purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine chelanti tipo Sepharose Fast Flow immobilizzate con Cu+2 ioni, cromatografia a scambio ionico su resine a scambio ionico di tipo CM Sepharose Fast Flow e cromatografia a filtrazione su gel su resine come Superdex 75.

Le condizioni ottimali per lo svolgimento delle singole fasi della produzione di interferone sono le seguenti:

La fermentazione viene effettuata con l'aggiunta continua di substrati durante tutto il processo, che provoca un elevato livello di espressione di interferone;

La distruzione cellulare viene effettuata in un disintegratore tipo Gaulin ad una pressione di 900 bar;

La rimozione dei componenti cellulari solubili (DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, ecc.) viene effettuata lavando la forma insolubile dell'interferone con soluzioni tampone contenenti detergenti (Triton XI00, urea, ecc.);

Il precipitato risultante contenente interferone viene sciolto in una soluzione tampone di guanidina cloridrato 6 M;

La rinaturazione dell'interferone viene effettuata in una soluzione tampone fisiologica contenente agenti caotropici;

La purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone viene effettuata su Chelating Sepharose Fast Flow, immobilizzato con ioni Cu+2, su resina a scambio cationico SM Sepharose Fast Flow e cromatografia di filtrazione su gel su resina tipo Superdex 75;

Dopo ogni purificazione cromatografica, viene effettuata la filtrazione sterilizzante attraverso filtri apirogeni con dimensioni dei pori di 0,22 micron.

La resa di interferone come risultato dell'utilizzo del metodo descritto è di circa 400-800 mg di interferone per 1 litro di terreno di coltura. La qualità del prodotto risultante è conforme agli standard e ai requisiti della "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b.

Differenze significative tra il metodo proposto e il prototipo sono:

L'uso di un design di ceppo con maggiore produttività, che consente di ottenere una maggiore quantità di interferone da 1 litro di terreno di coltura durante la biosintesi;

L'uso di un'efficace distruzione meccanica della biomassa cellulare, che consente di ottenere un estratto più puro della forma insolubile dell'interferone in un tempo più breve, con minori perdite;

L'utilizzo di soluzioni tampone fisiologiche durante la rinaturazione in presenza di agenti caotropici consente di aumentare la resa della forma di interferone correttamente rinaturata;

La purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone consente di ottenere una sostanza interferone con una purezza superiore al 99% secondo l'elettroforesi in condizioni riducenti e non riducenti durante la colorazione dei gel con argento e superiore al 98% secondo RF HPLC e praticamente priva di pirogeni (prova LAL).

L'essenza e i vantaggi del gruppo di invenzioni rivendicato sono illustrati dai seguenti esempi.

Esempio 1. Costruzione del plasmide ricombinante pSH50

Il metodo per costruire il plasmide pSX50 comprende i seguenti passaggi:

Costruzione del plasmide vettoriale pSX10;

1. costruzione del plasmide pSX3 (2641 bp)

2. costruzione del plasmide vettoriale pSX10 (2553 bp)

Costruzione del plasmide ricombinante pSX41 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX43 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX45 (3218 bp);

Costruzione del plasmide ricombinante pSX50 (3218 bp).

Costruzione del plasmide vettoriale pSX10

Il plasmide vettoriale pSX10 è un vettore pUC19 in cui la sequenza codificante del gene beta lattomasi, che fornisce resistenza all'ampicillina, è sostituita dalla sequenza codificante del gene kan e contiene il terminatore della trascrizione del plasmide pKK223-3.

La costruzione del plasmide vettore pSS10 avviene in due fasi:

Preparazione del plasmide pSX3 (2641 bp), ovvero il plasmide pUC19, in cui la regione codificante del gene amp è sostituita dalla regione codificante del gene kan;

Preparazione del plasmide vettore pSX10 (2553 bp), che è un plasmide pSX3 in cui un frammento di DNA codificante per il terminatore di trascrizione rBT 1 T 2 è inserito dietro il sito BamHI.

Per ottenere il plasmide pSX3, vengono eseguiti cinque cicli di amplificazione del DNA mediante PCR (reazione a catena della polimerasi). Durante il primo ciclo, utilizzando il DNA plasmidico pUC19 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 1828 bp. (frammento PU1-PU2) utilizzando primer:

Questa e le successive reazioni PCR vengono eseguite nelle seguenti condizioni: Tis-HCl 20 mM, pH 8,8, 2 SO 4 10 mM (NH 4), KCl 10 mM, MgCl 2 2 tM, Triton X100 0,1%, 0,1 mg/ml BSA, 0,2 mM di ciascun dNTP, 1,25 unità. Pfu DNA polimerasi, 100 ng di DNA. Il processo di amplificazione prevede le seguenti fasi: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 35 cicli di PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 2 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Dopo l'amplificazione (e dopo le successive amplificazioni), il frammento di DNA viene purificato mediante elettroforesi in gel di agarosio all'1%. Durante il secondo e il terzo ciclo, utilizzando il DNA plasmidico pUC4K come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 555 bp. (frammento KM1-KM2) utilizzando primer:

e amplificazione di un frammento di DNA di 258 bp. (KMZ-KM4) dai primer

Nel quinto ciclo di PCR, i frammenti (PU1-PU2) e (KM1-KM4) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 min, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, viene isolato il DNA plasmidico e viene effettuata l'analisi di restrizione. Di conseguenza, si ottiene il plasmide pSX3 con una dimensione di 2641 bp.

Per ottenere il plasmide vettore pSX10, vengono eseguiti tre cicli di amplificazione del DNA utilizzando la PCR. Nel primo turno, utilizzando il DNA plasmidico pSX3 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 2025 bp. (frammento 10.1-10.2) utilizzando primer:

Durante il secondo ciclo, utilizzando il DNA del plasmide pKK223-3 come modello, viene amplificato un frammento di DNA di 528 bp. (frammento KK1-KK2) utilizzando primer:

Nel terzo ciclo di PCR, i frammenti (10.1-10.2) e (KK1-KK2) vengono combinati nelle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 5 cicli PCR (30 sec 95°C, 30 sec 56°C , 10 minuti a 72°C) e incubazione per 10 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo l'ultima PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, viene isolato il DNA plasmidico e viene effettuata l'analisi di restrizione. Come risultato si ottiene il plasmide pSX10 con una dimensione di 2553 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX41

Il plasmide ricombinante pSX41 è un frammento di DNA Hind III - BamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp), frammento di DNA Hind III - EcoRI di 168 bp, codificante il promotore dell'operone triptofano di E. coli (P trp), EcoRI-XbaI un frammento sintetico Un frammento di DNA di 20 bp che codifica la sequenza SD (Shine-Delgarno) e un frammento di DNA XbaI-BamHI di 501 bp che codifica il gene dell'interferone alfa 2b umano.

Per ottenere il frammento di DNA Hind III - BamHI del plasmide vettore pSX3 (2529 bp), il DNA del plasmide pSX3 viene trattato con gli enzimi di restrizione HindIII e BamHI, seguito da purificazione elettroforetica in gel di agarosio all'1%. Il frammento di DNA Hind III EcoRI di 168 bp che codifica il promotore dell'operone del triptofano (P trp) è ottenuto mediante PCR utilizzando DNA totale di E. coli come modello e primer TRP1 e PRP2, seguito dal trattamento del frammento amplificato con restrizione Hindll ed EcoRI enzimi:

Per ottenere EcoRI-Xbal un frammento di DNA sintetico di 20 bp codificante la sequenza SD (Shine-Delgarno), vengono sintetizzati i seguenti oligonucleotidi complementari:

Il frammento di DNA XbaI-BamIII di 501 bp, che codifica per il gene dell'interferone alfa 2b umano, è ottenuto mediante PCR utilizzando il DNA umano totale come modello e i primer IFN1 e IFN2, seguiti dall'elaborazione del frammento amplificato con gli enzimi di restrizione Xbal e BamIII:

Successivamente, i frammenti purificati elettroforeticamente vengono combinati, legati con l'enzima fago ligasi T4, il DNA viene trasformato in cellule del ceppo E. coli DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX41 con una dimensione di 3218 bp. Successivamente, viene eseguita la mutagenesi passo passo del gene dell'interferone per aumentare il livello di espressione del prodotto bersaglio. La mutagenesi del gene dell'interferone consiste nella sostituzione di triplette che si trovano raramente in E. coli, che codificano per gli amminoacidi corrispondenti, con triplette che si trovano spesso in E. coli, che codificano per gli stessi amminoacidi. La mutagenesi del DNA del gene dell'interferone viene effettuata utilizzando il metodo PCR.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX43

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX43, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX41 come modello e primer IFN3 e IFN4:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX43 con una dimensione di 3218 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX45

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX45, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX43 come modello e primer IFN5 e IFN6:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX45 con una dimensione di 3218 bp.

Costruzione del plasmide ricombinante pSX50.

Per ottenere il plasmide ricombinante pSX50, viene effettuato un ciclo di amplificazione del DNA mediante PCR utilizzando il DNA del plasmide pSX45 come modello e primer IFN7 e IFN8:

La PCR viene eseguita alle seguenti condizioni: riscaldamento a 95°C per 5 minuti, 20 cicli PCR (30 secondi a 95°C, 30 secondi a 56°C, 10 minuti a 72°C) e incubazione per 20 minuti a 72°C. Il DNA ottenuto dopo la PCR viene trasformato direttamente in cellule di E. coli ceppo DH5 e piastrato su terreno LA contenente 20 μg/ml di kanamicina. Dopo incubazione per 12 ore a 37°C, i cloni vengono eliminati, il DNA plasmidico viene isolato, viene eseguita l'analisi di restrizione e viene determinata la struttura primaria del DNA. Come risultato, si ottiene il plasmide pSX50 con una dimensione di 3218 bp.

Esempio 2. Preparazione del ceppo di E. coli SX50 - produttore di interferone

Il ceppo produttore di interferone di E. coli SX50 viene ottenuto trasformando cellule del ceppo di E. coli BL21 con il plasmide ricombinante pSX50. Il ceppo produttore di interferone viene coltivato in un fermentatore da 30 litri fino ad una densità ottica di 25,0-30,0 p.u. in terreno M9 contenente 1% idrolizzato acido di caseina (Difco), 1% glucosio, 40 µg/ml kanamicina, ad una temperatura di 38-39°C. Durante il processo di fermentazione viene effettuata un'aggiunta continua di substrato nutritivo utilizzando un controller gravimetrico.

Esempio 3. Metodo per isolare l'interferone dal ceppo SX50 di E. coli

L'interferone è stato ottenuto in 4 fasi:

Fase 1. Coltivazione di E. coli ceppo SX50.

Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone.

Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone.

Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone.

Fase 1. Coltivazione di E. coli ceppo SX50

L'inoculo coltivato di E. coli ceppo SX50 in un volume di 3 litri di terreno ricco LB per 12 ore a 26°C viene introdotto asetticamente in un fermentatore contenente 27 litri di terreno sterile contenente M9, 1% idrolizzato acido di caseina, 1% glucosio, 1 mM MgCl 2, 0,1 mM CaCl 2, 40 mg/ml kanamicina. La coltivazione in fermentatore viene effettuata ad una temperatura di 38-39°C, mantenendo un pH di 7±0,15 mediante titolazione automatica con una soluzione di idrossido di sodio al 40%. La concentrazione di ossigeno disciolto nell'intervallo (50±10)% della saturazione viene mantenuta modificando la velocità dell'agitatore da 100 a 800 giri/min e l'alimentazione d'aria da 1 a 15 l/min. La concentrazione dei substrati, in particolare glucosio ed estratto di lievito, viene misurata durante la fermentazione e la loro concentrazione viene mantenuta variando la velocità di erogazione delle soluzioni concentrate attraverso pompe peristaltiche utilizzando un controller gravimetrico.

L'accumulo di interferone nella forma insolubile viene monitorato utilizzando la microscopia a contrasto di fase, l'elettroforesi su gel di poliacrilammide al 15% (SDS-PAAG) e la cromatografia ad alta prestazione in fase inversa (RF HPLC). La fermentazione viene interrotta quando viene raggiunta la massima densità ottica (~ 25-30 p.u.) e la sintesi dell'interferone si arresta. Al termine della fermentazione, il liquido colturale viene separato mediante centrifugazione in un rotore a flusso con una velocità di rotazione di 5000-10000 giri/min. La biomassa viene confezionata in sacchetti di plastica e congelata a meno 70°C.

Fase 2. Isolamento e purificazione della forma insolubile dell'interferone

300-400 g di biomassa congelata di E. coli ceppo SX50 vengono sospesi in 3000 ml di tampone 1 (Tris-HCl 20 mM, pH 8,0, EDTA 10 mM, Triton X100 0,1%). La sospensione viene fatta passare attraverso un omogeneizzatore a flusso di tipo Gaulin, mantenuta ad una pressione di 900 bar e centrifugata in un rotore a flusso a 15.000 giri al minuto. Il precipitato risultante viene lavato in condizioni simili in sequenza con il tampone 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 1 mM EDTA, 3 M urea) e il tampone 3 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 1 mM EDTA) e infine l'interferone il precipitato viene sospeso in 200 ml di tampone 3. In questo caso, il tempo per l'isolamento e la purificazione della forma insolubile dell'interferone non è superiore a 5 ore.

Fase 3. Dissoluzione e rinaturazione dell'interferone

Alla sospensione della forma insolubile di interferone ottenuta nella fase precedente, aggiungere guanidina cloridrato secca a una concentrazione di 6 M, aggiungere ditiotreitolo a una concentrazione di 50 mM, Tris-HCl pH 8,0 a una concentrazione di 50 mM, NaCl a una concentrazione di 50 mM concentrazione di 150 mM e Triton X100 ad una concentrazione di 0,1%, incubare a temperatura ambiente per 2 ore. Il materiale non disciolto viene separato mediante filtrazione sterilizzante attraverso membrane con diametro dei pori di 0,22 micron.

La rinaturazione dell'interferone viene effettuata diluendo lentamente la soluzione risultante 100-200 volte con tampone 4 (20 mM Tris-HCl pH 8,0, 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA). Dopodiché la miscela di rinaturazione viene incubata sotto costante agitazione per 12-15 ore ad una temperatura di 4-8°C. Viene quindi aggiunto solfato di magnesio ad una concentrazione di 1 mM e il materiale aggregato viene rimosso mediante filtrazione sterilizzante attraverso un filtro a membrana con un diametro dei pori di 0,22 micron.

Fase 4. Purificazione cromatografica dell'interferone

La purificazione cromatografica dell'interferone viene effettuata in tre fasi.

1. L'interferone rinaturato risultante viene prima purificato mediante cromatografia di affinità su una resina chelante Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) immobilizzata con ioni Cu+2. Per fare ciò, la soluzione di interferone viene applicata ad una colonna con Cu +2 Chelating Sepharose Fast Flow e l'interferone viene eluito con un tampone di acido citrico 0,1 M a pH 2,2.

2. Nella seconda fase della purificazione cromatografica, la soluzione di interferone viene applicata a una resina a scambio cationico di tipo CM Sepharose Fast Flow (Amersham Biosciences) e l'interferone viene eluito con un gradiente di soluzioni (0,0-0,5 M NaCl) in una soluzione da 50 mM. Tampone Na(CH3COO), pH 5,5.

3. La purificazione della forma monomerica dell'interferone dai resti delle forme polimeriche dell'interferone viene effettuata nella terza fase della purificazione dell'interferone mediante filtrazione su gel su resina Superdex 75 (Amersham Biosciences). La cromatografia viene eseguita in un tampone di Na(CH 3 COO) 50 mM, pH 5,0, contenente NaCl 0,15 M.

Il metodo descritto per isolare e purificare l'interferone consente di ottenere 4-8 g di interferone altamente purificato in un ciclo di isolamento nell'arco di 7-10 giorni dalla biomassa ottenuta da 10 litri di terreno di coltura. La qualità dell'interferone risultante è pienamente conforme ai requisiti della "Farmacopea Europea" per la sostanza interferone alfa-2b, vale a dire:

La concentrazione di interferone non è inferiore a 2×10 8 UI/ml;

L'attività specifica dell'interferone non è inferiore a 2,0×10 8 UI/mg;

La purezza elettroforetica del farmaco è almeno del 99% in condizioni riducenti e non riducenti quando si colorano i gel con argento;

Il punto isoelettrico dell'interferone isolato è nell'ordine del pH 5,8-6,3;

La mappa peptidica dell'interferone isolato non è fondamentalmente diversa dalla mappa peptidica dell'interferone alfa 2b CRS standard europeo;

Come risulta dagli esempi forniti, il gruppo di invenzioni rivendicato consente di ottenere interferone alfa-2b con elevata resa utilizzando una tecnologia relativamente semplice ed affidabile.

RECLAMO

1. DNA plasmidico ricombinante pSX50, codificante per la sintesi dell'interferone alfa-2b umano ricombinante, caratterizzato dal fatto di avere una dimensione di 3218 paia di basi (bp) e di essere costituito dai seguenti frammenti: la sequenza da 1 a 176 nucleotidi (bp) comprende un frammento di DNA di 176 bp contenente il promotore del triptofano (P trp), sequenza da 177 a 194 nt. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp di dimensione contenente la sequenza Shine Delgarno, responsabile dell'inizio della traduzione, sequenza da 195 a 695 nt. comprende un frammento di DNA di 501 bp contenente il gene dell'interferone alfa-2b con sostituzioni nucleotidiche: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A> C), 69 (Sol>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (Sol>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A >С ), 120 (C>G), 126 (Sol>A), 129 (Sol>A), 330 (C>G), 339 (Sol>A), 342 (Sol>A), 487 (A>C) , 489 (A>T), 495 (G>A), sequenza da 696 a 713 nt. include un frammento di DNA sintetico di 18 bp contenente un polylinker sintetico, sequenza da 714 a 1138 nt. include un frammento di DNA del plasmide pKK223-3 da 4129 a 4553 nt. 425 bp, contenente la sequenza del terminatore stretto di trascrizione rrnBT 1 T 2, sequenza da 1139 a 1229 nt. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 2487 a 2577 nt. 91 bp, contenente il promotore del gene -lattomasi (gene di resistenza all'ampicillina -Amp R), sequenza da 1230 a 2045 nt. include un frammento di DNA del plasmide pUC4K con 720 nt. al 1535 d.C 816 bp di dimensione, contenente la regione strutturale del gene kan, sequenza con 2046 bp. al 3218 n. include un frammento di DNA del plasmide pUC19 da 1625 a 453 nt. 1173 bp, contenente la sequenza responsabile della replicazione del plasmide (ori) e del promotore lac (P lac).

2. Il ceppo batterico Eschcerichia coli SX50 trasformato con il plasmide ricombinante secondo la rivendicazione 1 è produttore di interferone alfa-2b leucocitario umano ricombinante.

3. Metodo per produrre interferone alfa-2b umano, comprendente la coltivazione del ceppo di Escherichia coli SX5 secondo la rivendicazione 2 in un mezzo nutritivo con l'aggiunta costante di substrati nutritivi durante il processo di biosintesi, distruzione meccanica di cellule di microrganismi ad una pressione di 700- 900 bar, dissoluzione dell'interferone in una soluzione tampone di guanidina cloridrato, rinaturazione dell'interferone in soluzioni tampone fisiologiche in presenza di agenti caotropici, purificazione cromatografica a tre stadi dell'interferone su resine chelanti tipo Sepharose Fast Flow immobilizzate con ioni Cu+2, scambio ionico cromatografia su resine a scambio ionico tipo CM Sepharose Fast Flow e cromatografia con filtrazione su gel su resine tipo Superdex 75 .

4. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui la coltura viene effettuata su un mezzo nutritivo a ridotto contenuto di triptofano con l'aggiunta continua di substrati nutritivi, preferibilmente glucosio ed estratto di lievito.

5. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui prima di sciogliere l'interferone, esso viene purificato rimuovendo componenti cellulari solubili, tra cui DNA, RNA, proteine, lipopolisaccaridi, lavaggio con soluzioni tampone contenenti detergenti quali Triton XI 00, urea.

6. Metodo secondo la rivendicazione 3, in cui dopo ciascuna purificazione cromatografica viene effettuata una filtrazione sterilizzante attraverso filtri con dimensioni dei pori di 0,22 micron.

LOCANDA: Interferone alfa 2b

Produttore: Sikor Biotech CJSC

Classificazione anatomo-terapeutica-chimica: Interferone alfa-2b

Numero di registrazione nella Repubblica del Kazakistan: N. RK-BP-5 N. 012842

Periodo di registrazione: 18.06.2014 - 18.06.2019

KNF (medicinale incluso nel Formulario nazionale dei medicinali del Kazakistan)

ALO (Incluso nell'Elenco farmaci ambulatoriali gratuiti)

ED (Incluso nell'Elenco dei farmaci nell'ambito del volume garantito di cure mediche gratuite, previo acquisto presso il Distributore Unico)

Limite del prezzo di acquisto nella Repubblica del Kazakistan: 33 116,64 KZT

Istruzioni

Nome depositato

Realdiron

Nome comune internazionale

Interferone alfa

Forma di dosaggio

Polvere liofilizzata per soluzione iniettabile, 1.000.000 UI, 3.000.000 UI, 6.000.000 UI, 9.000.000 UI e 18.000.000 UI

Composto

Una bottiglia contiene

sostanza attiva: interferone alfa-2b umano ricombinante

nantnogo 1 milione UI, 3 milioni UI, 6 milioni UI, 18 milioni UI

Eccipienti: destrano 60, sodio cloruro, sodio idrogeno fosfato dodecaidrato, sodio diidrogeno fosfato diidrato

Descrizione

Polvere bianca o massa porosa

Fgruppo di armacoterapia

Immunomodulatori. Interferoni. Interferone alfa

Codice ATX L03АВ05

Proprietà farmacologiche

Farmacocinetica

Il tempo di insorgenza della concentrazione massima di interferone alfa 2b dopo somministrazione intramuscolare è di 2 ore e dura fino a 12 ore, dopo somministrazione sottocutanea è di 7,3 ore, dopo 20 ore il farmaco non viene rilevato.

T1/2 (emivita) quando somministrato per via intramuscolare è di circa 2-3 ore. Biodisponibilità - 80%.

Il farmaco è distribuito uniformemente negli organi e nei tessuti. Biotrasformato nei reni e in piccola misura nel fegato. Parzialmente escreto immodificato, principalmente attraverso i reni.

Farmacodinamica

L'interferone alfa-2b è una proteina altamente purificata ottenuta attraverso il DNA ricombinante. La struttura polipeptidica della molecola, l'attività biologica e le proprietà farmacologiche sono identiche all'interferone alfa-2b dei leucociti umani. Ha effetti antivirali, antiproliferativi, antitumorali e immunomodulatori.

Il farmaco, interagendo con i recettori correlati sulla superficie cellulare, avvia una complessa catena di cambiamenti all'interno della cellula. Si presume che questi processi siano associati alla prevenzione della replicazione virale nella cellula, all'inibizione della proliferazione cellulare e all'effetto immunomodulatore dell'interferone. L'interferone alfa-2b ha la capacità di stimolare l'attività fagocitaria dei macrofagi, nonché l'attività citotossica delle cellule T e delle cellule NK (Natural Killers). Queste proprietà dell'interferone determinano l'effetto terapeutico del farmaco.

Indicazioni per l'uso

Come parte della terapia di combinazione negli adulti. Malattie virali

- epatite B cronica attiva se è impossibile da usare

interferoni pegilati

— epatite cronica C se è impossibile usare

interferoni pegilati

Malattie oncologiche - leucemia a cellule capellute - leucemia mieloide cronica - cancro del rene - melanoma maligno.

Istruzioni per l'uso e dosi

La soluzione di Realdiron viene somministrata per via intramuscolare o sottocutanea. Prima dell'uso, il contenuto del flacone viene sciolto in 1 ml di acqua per preparazioni iniettabili. La soluzione farmacologica dovrebbe essere trasparente, senza inclusioni estranee. Per l'epatite B cronica attiva, Realdiron viene somministrato alla dose di 3 milioni UI tre volte alla settimana per 6 mesi. Se dopo la terapia non si riscontra alcun miglioramento clinico, biochimico e/o scomparsa dell'HBsAg entro 3 mesi, il farmaco viene sospeso.

Per l'epatite cronica C, Realdiron viene prescritto alla dose di 3 milioni UI 3 volte a settimana per 6 mesi. Se dopo la somministrazione del farmaco durante un mese di terapia non si osserva una diminuzione dell'attività ALT nel plasma sanguigno del 50%, la dose del farmaco viene aumentata a 6 milioni UI 3 volte a settimana. Se dopo 3 mesi di terapia non si riscontra alcun miglioramento clinico o biochimico, il farmaco deve essere sospeso.

Per la leucemia a cellule capellute si somministrano 3 milioni UI al giorno per 2 mesi; al raggiungimento della remissione ematologica - 3 milioni UI 3 volte a settimana.

Per la leucemia mieloide cronica, la dose iniziale del farmaco è di 3 milioni UI al giorno, somministrata per via intramuscolare o sottocutanea. Se ben tollerato, la dose del farmaco viene aumentata ogni settimana fino a una dose massima di 9 milioni UI al giorno. Una volta che la conta dei globuli bianchi si è stabilizzata, questa dose può essere somministrata tre volte alla settimana. Il corso del trattamento viene effettuato a tempo indeterminato, tranne nei casi in cui la terapia deve essere interrotta (ad esempio, con rapida progressione della malattia o intolleranza al farmaco).

Per il cancro del rene, Realdiron viene utilizzato alla dose di 3 milioni UI al giorno per 10 giorni. Se ben tollerato, la dose del farmaco viene aumentata ogni settimana fino a una dose massima di 18 milioni UI al giorno. Dopo 3 mesi di trattamento si inizia la terapia di mantenimento, somministrando 18 milioni UI tre volte a settimana per 6 mesi.

Per il melanoma maligno, la dose iniziale del farmaco è di 3 milioni UI al giorno, somministrata per via intramuscolare o sottocutanea. Se ben tollerato, la dose del farmaco viene aumentata ogni settimana fino a una dose massima di 9-18 milioni UI al giorno. Dopo aver raggiunto l'effetto clinico, si passa alla terapia di mantenimento da 9-18 milioni UI 3 volte a settimana. La terapia adiuvante con Realdiron dopo la rimozione chirurgica del melanoma maligno allo stadio I-II può allungare il tempo di recidiva.

Effetti collaterali

Spesso

Febbre, stanchezza, malessere, mal di testa, mialgie, brividi, tremori, sintomi simil-influenzali

Anoressia, nausea

meno spesso

Alterazioni del gusto, stomatite, secchezza delle fauci, danni alla superficie dei denti e alla mucosa orale, vomito, diarrea, stitichezza, feci molli, dolore addominale

Alopecia, prurito, pelle secca, eruzione cutanea

Mal di schiena, dolore muscoloscheletrico, dolore toracico, miosite, artralgia

Depressione, pensieri e azioni suicide, suicidio

Aumento della sudorazione, soprattutto di notte

Irritabilità, insonnia, sonnolenza, ansia, diminuzione della concentrazione, labilità emotiva, vertigini

Ipotensione arteriosa, ipertensione

raramente

Infiammazione, arrossamento, irritazione nel sito di iniezione

Eccitazione, nervosismo, psicosi, comprese allucinazioni, comportamento aggressivo, agitazione, disturbi della coscienza, neuropatie, polineuropatia, neuropatie periferiche, parestesia, ipoestesia, convulsioni, perdita di coscienza

Infezione virale, compreso l'herpes simplex

Eritema

Congiuntivite, dolore oculare, visione offuscata, emorragie retiniche, retinopatia, alterazioni focali della retina, ostruzione delle arterie o delle vene retiniche, diminuzione dell'acuità visiva o campi visivi limitati, neurite ottica, papilledema

Disfunzione delle ghiandole lacrimali

Sangue dal naso, congestione nasale, sinusite, rinite

Emicrania

Tosse, faringite, infiltrati polmonari, polmonite, dispnea, disturbi respiratori

Perdita di peso

Tachicardia, palpitazioni

Diminuzione della libido, irregolarità mestruali (amenorrea, menorragia)

Aumento dell'appetito, glossite, gengive sanguinanti

Rabdomiolisi (a volte grave)

Compromissione o perdita dell'udito

Edema facciale, disfunzione renale, sindrome nefrosica, renale

carenza, iperuricemia

Iper- e ipotiroidismo, epatotossicità (inclusa la morte)

Leucopenia

Disturbi dentali e parodontali (compresi quelli che portano alla perdita dei denti)

molto raramente

Aumento dell'appetito, diabete mellito, iperglicemia, ipertrigliceridemia, colite, epatomegalia, pancreatite

Ischemia cerebrovascolare, emorragie cerebrovascolari

Sarcoidosi o esacerbazione della sarcoidosi

Reazioni allergiche, eritema multiforme, sindrome di Stevens-Johnson, necrolisi epidermica tossica

Trombocitopenia, linfocitopenia, anemia aplastica

Linfoadenopatia

Sonnolenza

Necrosi nel sito di iniezione

Disturbi autoimmuni e immunomediati, incl. porpora trombocitopenica idiopatica, artrite reumatoide, lupus eritematoso sistemico, vasculite e sindrome di Vogt-Kayanagi-Harada

Rumore nelle orecchie

Infarto miocardico, aritmia (di solito in pazienti con una storia di malattia cardiovascolare o precedente terapia con farmaci cardiotossici), cardiomiopatia transitoria reversibile (osservata in pazienti senza una storia significativa di malattia cardiovascolare)

Polmonite

molto raramente(in monoterapia o in associazione con ribavirina)

Aplasia completa del midollo osseo rosso

Cambiamenti nei parametri di laboratorio (più spesso rilevati al momento della prescrizione

farmaco in dosi superiori a 10 milioni UI al giorno): diminuzione del numero di granulociti,

diminuzione dei livelli di emoglobina, aumento dell'attività di ALT, AST (osservato quando utilizzato per tutte le indicazioni tranne l'epatite virale cronica), fosfatasi alcalina, LDH, creatinina e livelli sierici di azoto ureico

Nei bambini, inclusa la terapia di associazione con ribavirina (≥ 1% del numero di pazienti trattati con terapia di associazione con ribavirina)

Spesso

Anemia, neutropenia

Ipotiroidismo

Depressione, labilità emotiva, insonnia, irritabilità, mal di testa, vertigini

Anoressia, nausea, vomito, dolore addominale, diarrea

Alopecia, eruzione cutanea

Artralgia, mialgia

Reazioni infiammatorie nel sito di iniezione: dolore, iperemia

Debolezza, febbre, brividi, sintomi simil-influenzali, malessere, infezione virale, faringite

Ritardo nello sviluppo fisico (ritardo nella crescita e/o nel peso rispetto all’età)

Spesso

Pallore

Sanguinamento dal naso

Infezione batterica, polmonite, infezione fungina, herpes simplex

Neoplasie, non classificate

Trombocitopenia, linfoadenopatia

Ipertiroidismo, virilismo

Ipertrigliceridemia, iperuricemia

Agitazione, tremore, sonnolenza, reazione aggressiva, ansia, apatia, nervosismo, disturbi comportamentali, sonnambulismo, pensieri suicidi, confusione, sogni anomali, difficoltà ad addormentarsi, ipercinesia, disfonia, parestesia, iperestesia, ipoestesia, diminuzione della concentrazione

Congiuntivite, dolore oculare, visione offuscata, disfunzione delle ghiandole lacrimali

La malattia di Raynaud

Tosse, dispnea, otite media, congestione nasale, irritazione della mucosa nasale, rinorrea, starnuti, tachipnea

Disturbi gastrointestinali, aumento dell'appetito, stitichezza, feci molli, disturbi rettali, dispepsia, reflusso gastroesofageo, gastroenterite, glossite, stomatite, ecc. ulcerativa, mal di denti, disfunzione epatica

Dolore al petto, nel quadrante superiore destro dell'addome

Acne, eczema, alterazioni delle unghie, pelle secca, screpolature cutanee, reazioni di fotosensibilità, eruzione maculopapulare, alterazioni della pigmentazione cutanea, eritema, sudorazione, ematoma, prurito

Infezioni del tratto urinario, disturbi urinari, enuresi

Irregolarità mestruali, amenorrea, menorragia, disturbi vaginali, vaginiti, dolore testicolare (nei ragazzi)

Controindicazioni

Ipersensibilità al principio attivo o ad uno qualsiasi degli eccipienti

Gravi malattie cardiache, inclusa una storia (disfunzione cardiaca non controllata, recente infarto miocardico, gravi disturbi del ritmo cardiaco)

Gravi malattie renali o epatiche, comprese metastasi di tumori al loro interno, insufficienza renale con clearance della creatinina inferiore a 50 ml/min, quando prescritto in combinazione con ribavirina

Cirrosi epatica scompensata

Epatite cronica in combinazione con forme gravi di cirrosi o insufficienza epatica

Epatite cronica trattata in passato con immunosoppressori o glucocorticosteroidi

Malattie autoimmuni, incl. epatite autoimmune attuale o pregressa

Malattie della tiroide non controllate dai trattamenti standard

Disturbi mentali esistenti o preesistenti nei bambini e negli adolescenti

Bambini sotto i 3 anni con epatite cronica C

Gravidanza e allattamento quando prescritti in associazione con ribavirina

Quando prescritto in combinazione con ribavirina, devono essere prese in considerazione anche le controindicazioni elencate nelle istruzioni per l'uso della ribavirina.

Interazioni farmacologiche

L'interferone alfa inibisce gli enzimi epatici microsomiali (citocromo P-450) e quindi può interrompere il metabolismo di molti farmaci (teofillina, ecc.), Aumentandone la concentrazione nel sangue.

A causa del rischio di reazioni avverse da parte del sistema nervoso centrale, i farmaci narcotici, ipnotici e sedativi devono essere utilizzati contemporaneamente all'interferone alfa.

Le interazioni farmacologiche tra Realdiron e altri farmaci non sono state completamente studiate. Realdiron deve essere usato con cautela in combinazione con farmaci che potenzialmente hanno un effetto mielosoppressivo.

Con l'uso simultaneo di Realdiron e zidovudina si può osservare un effetto sinergico sulla riduzione del numero dei leucociti. Nei pazienti trattati con questa terapia, sono stati osservati casi di neutropenia dose-correlati più frequenti del previsto con la monoterapia con zidovudina. I pazienti che ricevono Realdiron come parte di una terapia di combinazione con ribavirina o zidovudina hanno un rischio maggiore di sviluppare anemia.

Gli effetti dell'uso di Realdiron in combinazione con farmaci antiretrovirali non sono noti.

Gli interferoni possono influenzare i processi metabolici ossidativi. Ciò deve essere tenuto in considerazione quando viene utilizzato contemporaneamente a farmaci che vengono metabolizzati mediante ossidazione (compresi i derivati ​​xantinici - aminofillina e teofillina). Quando si utilizza Realdiron con teofillina contemporaneamente, è necessario monitorare la concentrazione di quest'ultimo nel siero del sangue e, se necessario, aggiustare il regime posologico.

Interazioni farmaceutiche

Realdiron non può essere miscelato con altre sostanze medicinali ad eccezione della soluzione di cloruro di sodio allo 0,9%.

istruzioni speciali

Epatite B

Prima di iniziare il trattamento per i pazienti con epatite B, si raccomanda di eseguire una biopsia epatica per confermare l'epatite cronica e determinare l'entità del danno, nonché per assicurarsi che non vi siano encefalopatia attuale o pregressa, sanguinamento da varici esofagee, ascite o altri segni clinici di scompenso.

Prima di iniziare la terapia con Realdiron, è necessario concentrarsi sui seguenti indicatori:

bilirubina normale

Tempo di protrombina adulti - prolungamento non superiore a 3 secondi

bambini - estensione non più di 2 secondi

leucociti ≥ 4.000/mm3

piastrine adulte ≥ 100.000/mm3

bambini ≥ 150.000/mm3

Epatite C

Il percorso terapeutico ottimale è la terapia di combinazione con ribavirina. La monoterapia con Realdiron viene effettuata principalmente nei casi di intolleranza o in presenza di controindicazioni all'uso della ribavirina.

Quando si utilizza Realdiron come parte della terapia di combinazione con ribavirina per l'epatite cronica C, leggere anche le istruzioni per l'uso medico della ribavirina.

Si raccomanda a tutti i pazienti con epatite C cronica di sottoporsi a una biopsia epatica, ma in alcuni casi (ad esempio, pazienti con genotipo virale 2 e 3), il trattamento è possibile senza conferma istologica.

Adulti. Prima di iniziare la terapia con Realdiron, è necessario assicurarsi che non vi sia alcuna encefalopatia attuale o pregressa, sanguinamento da varici esofagee, ascite o altri segni clinici di scompenso, concentrandosi sui seguenti indicatori:

bilirubina ≤ 2 mg/dl

l'albumina è stabile e entro limiti normali

il tempo di protrombina è prolungato di non più di 3 secondi negli adulti, di 2 secondi nei bambini

leucociti ≥ 3.000/mm3

piastrine ≥ 70.000/mm3

la creatinina sierica è normale o vicino alla norma

Quando si utilizza Realdiron in combinazione con ribavirina in pazienti con funzionalità renale compromessa (clearance della creatinina > 50 ml/min), è necessario monitorare un emocromo completo, il livello di creatinina nel sangue e nelle urine, tenendo in considerazione la possibilità di anemia. Nei pazienti di età superiore ai 50 anni questo monitoraggio deve essere effettuato una volta alla settimana.

Monoterapia.

Durante il trattamento con Realdiron è possibile la disfunzione della ghiandola tiroidea: ipotiroidismo o ipertiroidismo. Prima di iniziare a usare Realdiron, è necessario determinare il livello dell'ormone stimolante la tiroide (TSH) nel siero del sangue ed eseguire un'ecografia della ghiandola tiroidea. Se vengono rilevate anomalie, è necessario eseguire una terapia appropriata.

Utilizzare per la coinfezione con il virus dell'HIV e dell'epatite C

I pazienti che sono inoltre infetti da HIV e ricevono una terapia antiretrovirale altamente attiva (HAART) possono avere un rischio maggiore di acidosi lattica. È necessario prestare attenzione quando si aggiungono Realdiron e ribavirina alla HAART.

I pazienti con cirrosi infettati inoltre dal virus dell'HIV e dell'epatite C che ricevono la HAART possono avere un rischio maggiore di scompenso epatico e di morte.

L'uso aggiuntivo di interferoni alfa da soli o in combinazione con ribavirina aumenta il rischio sopra menzionato in questa categoria di pazienti.

Patologie dentali e parodontali

Ricerca di laboratorio

Prima di iniziare il trattamento con Realdiron e periodicamente durante la terapia, tutti i pazienti vengono sottoposti a monitoraggio del quadro ematico periferico (con determinazione della formula leucocitaria e conta piastrinica), dei parametri biochimici del sangue (determinazione del livello degli elettroliti, degli enzimi epatici, compresa ALT, bilirubina, proteine ​​totali e frazioni, comprese albumina e creatinina). Prima e durante il trattamento con Realdiron, i livelli ematici devono rientrare nei limiti normali.

Durante la terapia per i pazienti con epatite cronica, si raccomanda il seguente schema per il monitoraggio dei parametri di laboratorio: 1, 2, 4, 8, 12, 16 settimane e poi una volta al mese durante l'intero ciclo di trattamento. Se l'ALT aumenta ad un valore pari o superiore al doppio del valore precedente all'inizio della terapia, il trattamento con Realdiron può essere continuato a meno che non compaiano segni di insufficienza epatica. In questo caso la determinazione dell'ALT, del tempo di protrombina, della fosfatasi alcalina, dell'albumina e della bilirubina deve essere effettuata ogni 2 settimane.

Nei pazienti con melanoma maligno, la funzionalità epatica e la conta dei globuli bianchi (con formula) devono essere monitorate settimanalmente durante l'induzione della remissione e mensilmente durante la terapia di mantenimento.

Ipersensibilità immediata

La comparsa di un rash cutaneo transitorio non richiede l'interruzione del trattamento.

Malattie concomitanti

Realdiron è prescritto con cautela a pazienti con una storia di gravi malattie croniche: malattia polmonare cronica ostruttiva, diabete mellito con tendenza alla chetoacidosi. È necessaria particolare cautela nell'uso del farmaco in pazienti con disturbi emorragici

(tromboflebiti, embolia polmonare) o con grave mielosoppressione.

Chemioterapia simultanea

L'uso di Realdiron in combinazione con altri farmaci chemioterapici (ad esempio citarabina, ciclofosfamide, doxorubicina, teniposide) aumenta il rischio di sviluppare effetti tossici (gravità e durata) che, a causa dell'uso congiunto, possono essere pericolosi per la vita o causare morte. A causa del rischio di aumento della tossicità, le dosi di Realdiron e degli agenti chemioterapici concomitanti devono essere selezionate con attenzione.

Autoanticorpi e malattie autoimmuni

Il trattamento con Realdiron può portare alla comparsa di autoanticorpi e allo sviluppo di malattie autoimmuni. I pazienti con predisposizione ereditaria o con sospetto di sviluppare sintomi di malattie autoimmuni dovrebbero essere costantemente monitorati per una diagnosi precoce. Se si sospetta la sindrome di Vogt-Koyanagi-Harada in pazienti con epatite cronica C, la terapia antivirale deve essere interrotta e deve essere discussa la necessità di una terapia con corticosteroidi.

Febbre

La febbre può essere una manifestazione di una sindrome simil-influenzale, che spesso si verifica durante la terapia con interferone, ma dovrebbero essere escluse altre cause della sua insorgenza.

Per ridurre la temperatura corporea e ridurre il mal di testa durante la sindrome simil-influenzale, che può verificarsi durante la terapia con Realdiron, si raccomanda l'uso della terapia antipiretica.

Utilizzare per la disfunzione epatica

Raramente sono stati osservati decessi dovuti a epatite tossica. Se durante l'uso di Realdiron compaiono segni di disfunzione epatica, il paziente necessita di un attento monitoraggio e, se i sintomi progrediscono, della sospensione del farmaco.

I pazienti con epatite cronica B che hanno una ridotta funzione sintetica epatica (ad esempio, diminuzione dell'albumina o tempo di protrombina prolungato) ma che soddisfano i criteri di ammissibilità per il trattamento possono essere a maggior rischio di sviluppare scompenso clinico se i livelli di aminotransferasi aumentano durante il trattamento. Prima di trattare tali pazienti, è necessario valutare i benefici dell'uso di Realdiron rispetto ai possibili rischi.

Rifiuto dell'allotrapianto

Prove preliminari suggeriscono che la terapia con interferone alfa può aumentare il rischio di rigetto del trapianto renale. È stato segnalato anche rigetto di trapianto di fegato, sebbene non sia stata stabilita una relazione causale con la terapia con interferone alfa.

Idratazione

Durante il trattamento con Realdiron è necessario garantire un'adeguata idratazione del corpo, poiché in alcuni casi è stata osservata ipotensione arteriosa causata dalla disidratazione (che può richiedere una somministrazione aggiuntiva di liquidi).

Il sistema cardiovascolare

I pazienti con una storia di malattie cardiovascolari (insufficienza cardiaca cronica, infarto del miocardio e/o aritmie) richiedono un attento controllo medico quando prescrivono Realdiron. Sono stati segnalati casi isolati di cardiomiopatia, talvolta con sviluppo reversibile dopo l'interruzione del trattamento con Realdiron. Nei pazienti con una storia di malattie cardiache, si raccomanda di farlo

ECG prima e durante la terapia con Realdiron. Aritmie, soprattutto sopraventricolari, si sono verificate raramente e prevalentemente in pazienti con anamnesi di malattie cardiovascolari o con precedente trattamento con farmaci cardiotossici. Tali disturbi del ritmo solitamente rispondono alla terapia standard, ma possono richiedere una modifica della dose o l’interruzione di Realdiron.

Sistema respiratorio

Qualsiasi paziente con febbre, tosse, respiro corto o altri sintomi respiratori dovrebbe sottoporsi a una radiografia del torace. Se vengono rilevati infiltrati o è presente una compromissione della funzionalità polmonare, è necessario un attento monitoraggio del paziente e, se necessario, l'interruzione della terapia con Realdiron. Tali cambiamenti si sono verificati più frequentemente nei pazienti con epatite cronica C che stavano ricevendo una terapia con interferone alfa, ma sono stati segnalati casi di loro sviluppo in pazienti affetti da cancro che stavano ricevendo anche una terapia con interferone alfa. La sospensione tempestiva della terapia con interferone alfa e l'uso di corticosteroidi porta alla scomparsa delle reazioni polmonari avverse. Inoltre, è stato segnalato che questi sintomi si verificano più frequentemente quando Shosaikoto (un medicinale erboristico cinese) è stato utilizzato in concomitanza con l'interferone alfa.

Disturbi mentali e sistema nervoso centrale (SNC). Gravi disturbi del sistema nervoso centrale, in particolare depressione, pensieri suicidari e tentativi di suicidio, sono stati osservati in alcuni pazienti durante il trattamento con Realdiron e anche dopo il trattamento, principalmente entro 6 mesi. Tra i bambini e gli adolescenti che assumevano Realdiron in associazione con ribavirina, pensieri suicidari e tentativi di suicidio sono stati osservati più spesso rispetto ai pazienti adulti (2,4% contro 1%). Altri disturbi mentali, come depressione, labilità emotiva e sonnolenza, sono stati osservati anche in pazienti adulti, bambini e adolescenti. Se si verificano tali sintomi, si deve considerare la potenziale gravità di tali eventi avversi. Se i sintomi persistono o aumentano, o se vengono rilevati pensieri suicidi o comportamenti aggressivi, si raccomanda di interrompere il trattamento e fornire al paziente un’adeguata assistenza psichiatrica.

Pazienti con disturbi mentali esistenti o pregressi. L'uso dell'interferone alfa-2b nei bambini e negli adolescenti con disturbi psichiatrici esistenti o con anamnesi è controindicato (vedere paragrafo "Controindicazioni").

Se si decide che la terapia con Realdiron è necessaria per pazienti adulti con disturbi mentali esistenti o con una storia di disturbi mentali, nonché con dipendenza da alcol e droghe, essa deve essere iniziata solo dopo un'adeguata diagnosi individuale e sotto costante monitoraggio dello stato mentale.

Il trattamento con interferone può esacerbare i sintomi dei disturbi mentali nei pazienti infetti dal virus dell'epatite C, con disturbi mentali esistenti o preesistenti, nonché con dipendenza da alcol e droghe. Se il trattamento con interferone è necessario per pazienti affetti da tali disturbi, viene fornito un trattamento appropriato dei sintomi psichiatrici per ottenere il successo del trattamento con interferone. Inoltre, è obbligatorio lo screening individuale del comportamento dei pazienti e della frequenza dei sintomi di salute mentale. Per questi pazienti si raccomanda il pretrattamento prima della comparsa o dello sviluppo dei sintomi psichiatrici.

Disturbi oftalmologici

Tutti i pazienti devono sottoporsi ad una visita oftalmologica prima di iniziare la terapia. La terapia con Realdiron deve essere interrotta se compaiono disturbi oftalmologici nuovi o in peggioramento.

Cambiamenti nella tiroide

In caso di disfunzione della ghiandola tiroidea, il trattamento con Realdiron può essere iniziato o continuato se il livello di TSH può essere mantenuto a un livello normale con la terapia farmacologica. L'interruzione dell'uso di Realdiron non porta alla normalizzazione della funzione tiroidea compromessa durante il trattamento.

Disturbi metabolici

In connessione con i casi di sviluppo o progressione dell'ipertrigliceridemia in forme gravi, si raccomanda di monitorare i livelli di lipidi nel sangue.

Altro

Considerando i casi descritti di esacerbazione della psoriasi e della sarcoidosi durante il trattamento con interferone alfa, Realdiron deve essere usato in tali pazienti solo se il beneficio atteso supera il possibile rischio.

Utilizzo in pediatria

La decisione di iniziare una terapia di combinazione nei bambini deve essere presa individualmente, tenendo conto sia dei segni di progressione della malattia (attività infiammatoria nel fegato e fibrosi) sia dei fattori prognostici per lo sviluppo della risposta virologica, del genotipo dell'HCV e della carica virale. È importante tenere presente che la terapia di combinazione può causare ritardo della crescita e aumento di peso in alcuni bambini trattati per un anno, la cui reversibilità non è completamente chiara. A questo proposito, si raccomanda di monitorare lo sviluppo fisico dei bambini durante la terapia e per 6 mesi dopo il completamento del trattamento.

Per ridurre il rischio di ritardo della crescita, il bambino deve essere trattato, se possibile, dopo una rapida crescita durante la pubertà. Non sono disponibili dati sull’effetto del trattamento a lungo termine sulla pubertà.

Effetto sulla funzione riproduttiva

Sono state segnalate diminuzioni delle concentrazioni sieriche di estradiolo e progesterone nelle donne che assumevano Realdiron. Pertanto, Realdiron può essere utilizzato nelle donne in età riproduttiva se usano un metodo contraccettivo efficace durante l'intero periodo di trattamento. Realdiron viene utilizzato con cautela anche negli uomini in età riproduttiva.

Gravidanza e allattamento

Non ci sono dati sufficienti sull’uso di Realdiron durante la gravidanza. Realdiron deve essere usato durante la gravidanza se il potenziale beneficio per la madre supera la potenziale minaccia per il feto.

A causa dei potenziali effetti avversi sul lattante, la decisione di interrompere l'allattamento al seno o di sospendere il farmaco deve essere presa tenendo in considerazione il grado di necessità di questa terapia per la madre.

Caratteristiche dell'effetto del farmaco sulla capacità di guidare un veicolo o meccanismi potenzialmente pericolosi.

È necessario avvertire il paziente del possibile sviluppo di debolezza, sonnolenza e disturbi della coscienza durante la terapia e raccomandare di evitare di guidare un'auto o di utilizzare attrezzature complesse.

Overdose

Attualmente non sono stati segnalati casi di overdose da farmaci.

In caso di sovradosaggio è indicato il trattamento sintomatico.