Микроскопическое исследование испражнений. Качественные методы без обогащения. Качественные гельминтокопрологические исследования

Ершова И.Б. , Осычнюк Л.М. , Мочалова А.А. , ГУ «Луганский государственный медицинский университет», кафедра педиатрии с детскими инфекциями.
Статья опубликована в журнале «Актуальная инфектология», №2 (3), 2014 год.
Информационный ресурс «Издательский дом Заславский» www.mif-ua.com

В статье изложены методы диагностики гельминтных инвазий: микроскопические, иммуноферментный анализ, серологические, полимеразной цепной реакции, биорезонансная диагностика, гемосканирование, а также инструментальные (ультразвуковое и рентгенологическое исследование, компьютерная томография) и лабораторные, имеющие косвенное значение (клинический анализ крови, анализ крови на печеночные пробы, анализ кала на дисбактериоз). Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами. Описаны достоинства методов, их недостатки, достоверность полученных данных. Предложены анкеты-опросники для пациентов для выявления риска инфицирования гельминтами.

Гельминты оказывают отрицательное воздействие на организм человека. Они приводят к аллергизации, развитию полигиповитаминоза, макро- и микроэлементозов, нарушению кроветворения и проницаемости сосудов, гормональному дисбалансу. Гельминтозы способствуют формированию хронических заболеваний (холецистит, желчнокаменная болезнь, панкреатит, колит, сахарный диабет, бронхиальная астма, атопический дерматит), психоэмоциональных нарушений (хроническая усталость, раздражительность, тревожность, гиперактивность у детей), анемии и др. При длительной гельминтной инвазии может развиваться вторичный иммунодефицит .

Настороженность врачей в отношении гельминтозов у населения в настоящее время недостаточная, а профилактика сводится к лечению выявленных инвазированных пациентов.

Диагностика гельминтозов основывается на клинико-эпидемических и лабораторных данных. Такие признаки, как астенический синдром, рецидивирующая крапивница, нарушение регенерации кожи и слизистых оболочек, трудно поддающиеся лечению атопический дерматит и бронхообструктивный синдром, полилимфаденопатия и гепатоспленомегалия неясного генеза, аденоидные вегетации II–III степени, «географический» язык, сниженный или избирательный аппетит, неустойчивый стул, могут говорить о наличии гельминтов .

При серологическом исследовании определяют наличие антител к гельминтам (достоверность - около 60 %): при подозрении на эхинококкоз, цистицеркоз, трихинеллез, токсокароз широко используют реакции непрямой гемагглютинации, агглютинации латекса, связывания комплемента, иммунофлюоресценции .
Не во всех случаях методы определения специфических антител обладают достаточной специфичностью и достоверностью. Антигенный состав гельминта зависит не только от вида, но и от стадии; проходя сложный цикл развития от яйца до взрослой особи, гельминты меняют антигенный состав. Кроме того, в иммунодиагностических реакциях используются соматические антитела, а в организме хозяина антитела вырабатываются в основном на экскреты и секреты гельминта. Неспецифическая сенсибилизация организма, общность некоторых антигенов трематод, простейших и человека создают высокий удельный вес ложноположительных реакций в титрах ниже достоверно диагностических .

Метод определения гельминтов с помощью полимеразной цепной реакции является высокоспецифичным и высокочувствительным, но из-за дороговизны и сложности не может быть скрининговым, когда, например, нужно обследовать группу детей из детского учреждения .

Иммунная система не всегда реагирует (распознает и уничтожает) на наличие гельминтов в организме. Это объясняется тем, что некоторые гельминты имеют прочную и химически устойчивую капсулу или покрыты веществом, которое не распознается иммунной системой; локализуются в тканях, наиболее защищенных от воспалительных реакций, например в спинном мозге; многие виды из них в пищеварительном тракте выделяют антиэнзимы, что спасает их от гибели; имеют большую продолжительность жизни (годами, а иногда до смерти самого человека); питаются за счет гликолиза чистых углеводов; имеют такие приспособления, как присоски, крючки и др., что способствует фиксации внутри организма; у многих видов существует половое размножение, при котором происходит обмен генной информацией, что приводит к усилению гетерогенной популяции, уменьшению уязвимости; обладают высоким уровнем плодовитости.

При ультразвуковом , рентгенологическом исследовании органов брюшной полости , компьютерной томографии можно выявить косвенные признаки гельминтозов: гепатоспленомегалию, неравномерность паренхимы печени и селезенки за счет мелких гиперэхогенных сигналов, увеличенные лимфатические узлы в воротах селезенки и сами гельминты (эхинококки, клубки кишечных гельминтов и т.д.).

Гемосканирование - качественное исследование крови с помощью мощного темнопольного микроскопа, можно увидеть состояние клеток крови (форму, размер, активность, цвет и т.д.), наличие неспецифических элементов и веществ - все это напрямую или опосредованно говорит о наличии в организме гельминтов. Изображение выводится на экран монитора с помощью встроенной видеокамеры в микроскопе. Этот метод диагностики обладает высокой достоверностью .

Косвенными лабораторными признаками гельминтозов могут быть анемия, базофилия, эозинофилия, увеличение уровня аспартатаминотрансферазы. Так, при токсокарозе выявляется лейкемоидная реакция эозинофилов (более 20 %) на фоне стойкого аллергического синдрома (атопический дерматит с выраженным зудом и резистентностью к традиционной терапии, тяжелая бронхиальная астма). Угнетение нормальной кишечной палочки в анализе кала на дисбактериоз также может говорить о возможном гельминтозе.

С учетом распространенности гельминтозов мы предлагаем анкету для определения риска инфицирования гельминтами.

• Купаетесь в пресноводных водоемах.
• Не моете руки перед едой с мылом в горячей воде.
• Употребляете воду из непроверенных источников.
• Употребляете в пищу домашнее сало с прожилками мяса.
• Употребляете в пищу малосольную рыбу.
• Употребляете в пищу слабопрожаренное мясо (с кровью).
• Употребляете в пищу малосольную икру незаводского приготовления.
• Не моете куриные яйца с мылом.
• Не моете бананы, апельсины, мандарины перед употреблением.
• Удобряете огород навозом.
• Употребляете овощи прямо с грядки.
• Употребляете фрукты и ягоды прямо с грядки.
• Употребляете упавшие фрукты.
• Не обдаете всю зелень кипятком для приготовления салатов.
• Храните морковь в песке, взятом в дворе.
• Ходите босыми ногами по траве.
• У членов семьи были глистные инвазии.
• В семье имеется собака или кошка.

За каждый ответ «да » - 2 балла, «иногда » - 1, «нет » - 0. При сумме баллов 0–5 вероятность инфицирования ничтожно мала, 6–12 - возможно инфицирование, 13–25 - высокая вероятность, более 25 баллов - очень высокая. При двух последних результатах необходимы регулярное обследование и, возможно, профилактическое лечение.

Поскольку клинические проявления гельминтозов не всегда специфичны, а в начальних стадиях - неспецифичны, мы предлагаем анкету для пациентов для самодиагностики гельминтозов .

• Бывает зуд в области ануса по утрам.
• Тошнота по утрам при чистке зубов.
• Шелушение пальцев рук или ног со слущиванием пластов кожи.
• Аллергическая сыпь на коже, кожный зуд.
• Шелушение и отечность в области век.
• Повышенная утомляемость, вялость, сонливость.
• Повышенное чувство голода.
• Чувство дискомфорта в животе.
• Снижение массы тела.
• Наличие нескольких хронических заболеваний органов желудочно-кишечного тракта, суставов, бронхолегочной системы.
• Плохое самочувствие, отсутствие официального диагноза, длительное неэффективное лечение.
• Периодический подъем температуры, сопровождающийся мышечными и суставными болями.

Ответ «да » по крайней мере на 2–3 вопроса говорит о высокой вероятности заражения гельминтами.

ВЫВОДЫ

1. На современном этапе нет лабораторных методов исследования на гельминтозы, которые обладают 100% надежностью.

2. Наибольшей достоверностью в диагностике гельминтозов обладают полимеразная цепная реакция и биорезонансная диагностика.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Исследование фекалий

Микроскопирование вначале проводят при слабом увеличении (Х80). Простейших можно заменить по более сильной преломляемости света, а некоторые виды - по их движению или изменению формы. Объект, замеченный при малом увеличении, рассматривают при увеличении 400 или 600. При отсутствии опыта просмотр мазков следует производить сразу при большом увеличении, что, однако, значительно увеличивает время на изучение препарата. Просмотр мазков при большом увеличении следует производить при более сильном освещении, регулируя его с помощью конденсора.

Дифференциальными признаками отдельных видов амеб в нативном мазке являются форма и размер тела, видимость ядра, характер образования псевдоподий, движение, деление цитоплазмы на экто- и эндоплазму, характер включений (фагоцитированные эритроциты и др.). При дифференцировке видов жгутиконосцев - размер и форма тела, количество жгутиков, характер передвижения, наличие или отсутствие ундулирующей мембраны. Специфическими признаками балантидиев являются размер, форма тела, движение, реснички, цитостом и др.

Основным отличительным признаком вегетативных форм простейших в живом состоянии служит движение. В мазках встречаются различного рода неподвижные образования - растительная клетчатка, мышечные волокна, споры, грибки и т.д. Они не должны приниматься во внимание при протозоологической диагностике.

Метод нативного мазка прост и доступен для любой лаборатории. Он позволяет при нахождении тканевых форм дизентерийных амеб с фагоцитированными эритроцитами поставить совершенно точный диагноз амебной дизентерии, а при обнаружении балантидиев и лямблий - диагноз балантидиаза и лямблиоза.

Окраска мазков раствором Люголя . Эта окраска применяется для диагностики простейших по цистам. Ею пользуются при исследовании оформленного, полуоформленного и кашицеобразного кала.

Для приготовления мазка конец деревянной палочки пачкается в фекалиях и обмывается в капле йодного раствора (J - 1,0 г, KJ - 2 г, дистиллированная вода - 100 мл), нанесенного на предметное стекло, до получения равномерной эмульсии. Препарат накрывают покровным стеклом и через 3 – 5 мин. микроскопируют. Мазок должен быть достаточно прозрачным для изучения его в проходящем свете.

Среди остатков непереваренной пищи, спор, грибков, йодофильных бактерий цисты простейших, окрашенные в коричневый или зеленовато-желтый цвет, выделяются строго определенной, характерной для каждого вида формой, размером, отчетливыми очертаниями краев, наличием гладкой, прозрачной, двухконтурной оболочки, содержимым цитоплазмы, а также наличием ядер с нечетко выраженной структурой. В цистах амеб заметны окрашенные в коричневый (темно-бурый) цвет гликогеновые вакуоли. Степень окраски этих вакуолей и очертания их границ варьируют в цистах простейших одного и того же вида в зависимости от их зрелости.

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и косвенные. Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте, носовой и влагалищной слизи, содержимом подногтевых пространств, биопсированных кусочках ткани. Косвенные методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, серологическими реакциями, общим исследованием крови, мочи. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтоовоскопические и протозооскопические. При диагностике нельзя каким-либо одним методом выявить яйца или личинки всех видов гельминтов, обитающих в пищеварительной системе человека. Так, при использовании метода флотации в поверхностную пленку не всплывают (из-за высокого удельного веса) яйца трематод, в некоторых случаях неоплодотворенные яйца аскарид. В кале очень редко можно обнаружить яйца остриц, онкосферы тениид, которые выявляются специальными методами исследований: соскоб с перианальных складок для остриц и тениид, методы осаждения для трематод (яйца описторха и др.). Поэтому для целенаправленного обследования больного на гельминтозы врач в направлении должен указать, на какие гельминты следует обратить основное внимание (диагноз), что позволит лаборанту выбрать соответствующую методику для выявления данного вида гельминта. Фекалии, взятые из разных мест испражнений в количестве не менее 50 граммов (чайная ложка) в чистую стеклянную посуду, должны быть отправлены в лабораторию не позднее чем через сутки после дефекации и исследованы в день поступления. В случае необходимости сохранения кала до следующего дня его помещают в холодное место (0-4°С) или заливают одним из консервантов. Перед исследованием кал перемешивают палочкой, чтобы яйца гельминтов оказались равномерно распределенными в общей массе. При обнаружении в препарате яиц какого-либо гельминта просмотр не прекращают, т.к. может быть двойная или тройная инвазия. Контроль за эффективностью лечения гельминтозов осуществляется путем исследования фекалий на яйца гельминтов через 2-3 недели или через 2-3 месяца после лечения в зависимости от обнаруженного гельминта. Макроскопические методы служат для обнаружения в кале целых половозрелых гельминтов или их фрагментов невооруженным глазом или с помощью ручной лупы. Часто на поверхности кала после дефекации можно видеть активно ползающих остриц; выделяются с калом аскариды; иногда люди сами замечают отхождение гельминтов. У больных дифиллоботриозом могут выделяться обрывки стробилы лентеца (в виде "лапши"), а у инвазированных тениидами (свиной или бычий цепень) с калом часто отходят членики гельминтов (в виде "белых обсечек") или они активно выползают из анального отверстия. Макроскопический метод является основным для дифференциальной диагностики тениидоза и тениаринхоза (в сочетании с опросом). Из специальных макроскопических методов применяется метод последовательного промывания фекалий. Фекалии размешиваются в воде для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении их тщательно просматривают отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы, крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, и рассматривают их под лупой между двумя предметными стеклами. Мелких гельминтов или головки цестод рассматривают под лупой в капле глицерина или под микроскопом. При использовании этого метода для диагностики члеников свиного, бычьего цепней, широкого лентеца отмытые членики помещают между двумя стеклами и, просматривая на свет под лупой или малым увеличением микроскопа, определяют видовую принадлежность по строению матки (у зрелого членика свиного цепня от центрального ствола отходят 8-12 боковых ответвлений, а у бычьего цепня 18-32, чаще 28-32, у широкого лентеца членики больше в ширину и матка в центре в виде "розетки"). Если матку плохо видно, то ее предварительно можно подержать некоторое время в 50% растворе глицерина, после чего даже запустевшие стволы матки просматриваются хорошо. При определении этих цестод по строению отошедших головок их с шейкой осторожно кладут в каплю глицерина между предметными стеклами (или покрывают покровным стеклом) и, не передавливая, рассматривают под микроскопом при малом увеличении.

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся методы нативного мазка, нативный мазок раствором Люголя, методы толстого мазка под целлофаном по Като, закручивания (по Шульману) и перианального соскоба.

Сложные методы являются более эффективными и основаны на концентрации яиц в препаратах. Они включают в себя предварительную обработку фекалий жидкими реактивами, в результате чего яйца гельминтов или выпадают в осадок, или всплывают на поверхность жидкости.

К сложным методам относятся методы обогащения:

а) флотационные (когда удельный вес яиц меньше удельного веса солевого раствора и яйца всплывают в поверхностную пленку);

б) седиментационные (когда удльный вес яиц больше удельного веса солевых растворов и яйца оседают в осадок).

Специальными методами обнаружения яиц и личинок гельминтов, цист и вегетативных форм простейших являются методы соскоба, флотации, седиментации, ларвоскопии, протозооскопии, исследование желчи и методы окраски мазков кала, мокроты и др.

Чаще всего заражение гельминтами происходит через зараженную пищу, воду, а также через немытые руки.

Прямые и косвенные методы диагностики гельминтозов

На сегодняшний день разработано множество методов диагностики гельминтозов, однако всех их можно разделить на две большие группы: прямые и косвенные. К прямым методам диагностики относятся те исследования, которые позволяют непосредственно выявить гельминты, их фрагменты, личинки или яйца. Косвенные методы диагностики гельминтозов основываются на выявлении вторичных изменений, характерных для той или иной разновидности гельминтоза.

Самыми популярными прямыми методами диагностики гельминтозов являются макро- и микрогельминтоскопические методы исследований.

Макрогельминтоскопические методы исследования

Вопросы читателей

18 October 2013, 17:25 Добрый день. Уже около почти год ощущаю зуд вокруг анального отверстия. Никаких болевых ощущений. Подскажите к кому обратится и что это может быть? Спасибо

Микрогельминтоскопические методы исследования

Иммунологические методы исследования

Диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.

Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов.

Анализ желчи и дуоденального содержимого

Биопсия

Электропунктурная диагностика

Электропунктурная диагностика основана на анализе сопротивления кожи при раздражении ее слабым электрическим током. Электропунктурная диагностика при подозрении на гельминтоз может проводиться двумя способами: по методу Фолля или с помощью резонансного тестирования.

Инструментальные методы исследования

При гельминтозах также проводится ультразвуковое исследование, ФЭДГС, и компьютерная диагностика. Эти методы позволяют определить степень вреда, нанесенного гельминтами, а также определить состояние отдельных органов.

Материал для исследования: фекалии, моча, дуоденальное содержимое, мокрота, кровь, кожа, перианальный дендрит, мышечная ткань.

Микроскопические методы исследования основаны на обнаружении яиц и личинок гельминтов. В зависимости от целей исследования они делятся качественные и количественные.

1. Метод толстого мазка по Като. Принцип метода состоит в том, что яйца гельминтов обнаруживается в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью. Метод более всего эффективен при аскаридозе, трихоцефалезе, дифиллоботриозе , тениидозах и в меньшей степени- при анкилостомидозах и карликовом цепне.

3. Метод обогащения (Кофоида - Барбера) основан на принципе всплывания яиц в насыщенном растворе поваренной соли. Можно обнаружить яйца трематод, широкого лентеца, онкосферы, тениды, неоплодотворенные яйца аскарид.

4. Метод Калантарян - принцип тот же, что и при предыдущем, но в качестве флотационного раствора используют насыщенный раствор азотистой селитры.

5. Существуют специальные методы исследования фекалий на наличие фасцилеза, стронгилоидоза, анкилостомидоза.

6. Прианальный и перианально-ректальный метод диагностики энтеробиоза. Соскоб делают утром (до туалета и дефекации) или вечером во время сна.

Очень важно знать