L'importanza dei metodi diagnostici di laboratorio per alcune infezioni da elminti. Metodi di ricerca elmintologici. Requisiti di ricerca
Pubblicato: 4 aprile 2016 alle 13:57Per prevenire un'epidemia infestazione da elminti, medici sanitari nelle istituzioni e nelle imprese per l'infanzia Industria alimentare O RistorazioneÈ necessario effettuare lavaggi per gli elminti. Per selezionarli, utilizzare spazzole di scoiattolo imbevute di una soluzione al 10% di detersivo o glicerina. A questo scopo è possibile utilizzare anche dei bastoncini di cotone spessi. I tamponi per le uova di elminti provenienti da diversi oggetti omogenei vengono raccolti in una provetta. Infine, dopo che tutti gli oggetti domestici dello stabilimento ispezionato sono stati trattati, devono essere prelevati dalle mani del personale. Se viene rilevato un risultato positivo, ciò aiuterà a identificare quali dipendenti stanno violando le norme di igiene personale e sono infetti da vermi.
Quando si prelevano i campioni è necessario seguire un certo ordine. Usando l'esempio delle istituzioni per l'infanzia, sembra nel seguente modo: il primo lavaggio per elminti, considerato il principale, viene effettuato nel reparto ristorazione. Seguono nell'ordine la sala da pranzo, la sala giochi e la camera da letto. Infine, nel lavandino e nella toilette è necessario prelevare tamponi per individuare le uova di verme. Questo studio nelle istituzioni per bambini dovrebbe essere condotto almeno una volta ogni sei mesi. Tempo ottimale per l'esecuzione di tamponi per elminti, estivi e periodi invernali. Nei centri di trattamento, questo studio viene effettuato molto più spesso, solitamente 1-3 volte a trimestre. Per studiare i campioni ottenuti viene utilizzata una tecnica speciale.
Le spazzole o i tamponi con il campione di lavaggio risultante vengono posti in provette da centrifuga, dove vengono lavati in una soluzione al 10% di glicerina o idrossido di sodio all'1%. Successivamente, il liquido risultante viene fatto passare attraverso una centrifuga. Una goccia del sedimento risultante viene applicata su un vetrino ed esaminata al microscopio per determinare la presenza o l'assenza di elminti.
La tricomoniasi è molto comune infezione trasmessa sessualmente, ma confermalo sicuramente senza test di laboratorio impossibile. Già negli anni '80, gli studi hanno dimostrato che se ci si limita solo a intervistare ed esaminare il paziente, è possibile diagnosticare correttamente la tricomoniasi solo nel 12% dei casi. Pertanto, la diagnosi di laboratorio della tricomoniasi negli uomini e nelle donne significa molto.
Per identificare l'agente patogeno (Trichomonas vaginalis), i medici utilizzano diversi metodi di ricerca. Alcune analisi sono più accurate, mentre altre sono spesso errate; alcuni hanno un prezzo moderato e altri sono piuttosto costosi.
Diamo un'occhiata a quali test esistono per la tricomoniasi negli uomini e nelle donne: accuratezza dei metodi, costi, pro e contro.
Brevemente su ciascun metodo: microscopia, coltura, PCR, ELISA, RIF
Se si sospetta una malattia infettiva, al paziente vengono prescritti esami generali del sangue e delle urine. I loro risultati possono segnalare un’infiammazione, ma non indicano quale agente patogeno ne sia la causa.
Ad esempio, in caso di infiammazione dovuta a Trichomonas, il livello dei leucociti nel sangue può aumentare, ma lo sarà anche in caso di infiammazione dovuta ad altre infezioni. Pertanto, questa analisi non dice nulla di concreto.
Per determinare con precisione l'agente patogeno, sono necessari altri metodi diagnostici. Ce ne sono diversi importanti diversi modi rilevare Trichomonas. Differiscono per complessità di implementazione, tempistica e affidabilità. In un modo o nell'altro, tutti hanno trovato il loro posto nella diagnosi della malattia.
Diamo uno sguardo più da vicino a queste tecniche e al ruolo che svolgono nel fare la diagnosi corretta.
Microscopia di uno striscio nativo
Il termine "nativo" in medicina e biologia si riferisce a un oggetto o materiale che si trova nel suo stato naturale, ovvero non è stato modificato o elaborato in alcun modo. Di conseguenza, uno striscio nativo è uno striscio normale prelevato dagli organi genitali o escretori umani, che non viene colorato o alterato in alcun modo per la ricerca.
Studiare un tale striscio al microscopio è il metodo più comune per diagnosticare la tricomoniasi. Puoi vedere come appare il Trichomonas in uno striscio nativo nella foto qui sotto.
Per questa analisi sono necessari estratti e alcune celle:
- dall'uretra
- vagina
- canale cervicale del paziente.
A rigor di termini, la procedura non dovrebbe essere chiamata "striscio", ma "raschiatura", perché non solo le secrezioni, ma anche le cellule della mucosa stessa vengono prese come materiale. Dare una raschiatura non è molto piacevole, ma non fa male.
Il materiale raccolto viene posto in una provetta e inviato al laboratorio.
In laboratorio, le cellule del raschiamento vengono esaminate al microscopio. Se tra loro c'è Trichomonas nel tampone, verrà dato:
- grandi dimensioni (rispetto ai buchi umani)
- presenza di flagelli
- mobilità caratteristica.
Utilizzando questo metodo è possibile distinguere Trichomonas da altri microbi con una probabilità dell'80-100%.
Ma il tampone nativo presenta anche degli svantaggi.
Sfortunatamente, il lungo trasporto del materiale al laboratorio può ridurre significativamente l’accuratezza del metodo. Il fatto è che dal momento in cui viene prelevato il materiale, i Trichomonas perdono mobilità ogni minuto e diventa più difficile riconoscerli. Idealmente, le cellule ottenute dal raschiamento dovrebbero essere immediatamente poste al microscopio. Secondo le regole, si consiglia di studiare materiale nativo entro e non oltre 10 minuti dopo aver raschiato. Ma in condizioni normali Ospedale russo o in laboratorio questo è quasi impossibile.
Questo è il motivo per cui l'accuratezza dello striscio microscopico nativo non è molto elevata e varia dal 40% all'80%. Cioè, il Trichomonas non verrà comunque confuso con altri agenti patogeni se è mobile, ma potrebbero non rilevarlo affatto se non si muove.
Nonostante gli svantaggi, questo metodo può essere utile durante gli esami medici o le prime visite dal venereologo. Non richiede attrezzature complesse e allo stesso tempo permette di identificare altri microrganismi (ma non tutti) in caso di infezione mista. Inoltre, tale analisi può essere effettuata in modo assolutamente gratuito presso lo Stato istituto medico. Nelle cliniche private il prezzo del servizio è di 150-200 rubli.
Microscopia di uno striscio colorato
L'esame degli strisci colorati aumenta le possibilità di rilevare Trichomonas. Il materiale viene prelevato allo stesso modo di uno striscio nativo (cioè, in effetti, anche questo è un raschiamento). Ma per questo studio il materiale è già appositamente preparato: prima di essere esaminato al microscopio, vengono aggiunte sostanze speciali. Questi sono coloranti che danno colore al Trichomonas, se, ovviamente, è nello striscio. Ciò rende più semplice per un tecnico di laboratorio distinguere il trichomonas vaginalis da altre cellule e particelle. L'intera procedura non supera un'ora.
Ma anche questa analisi non è perfetta. Il fatto è che non tutti i coloranti consentono di distinguere l'agente infettivo dalle cellule umane.
Molto spesso, colorante blu di metilene o Colorazione di Gram (metodo complesso tintura con più coloranti). Sfortunatamente, questi metodi non consentono di distinguere chiaramente il Trichomonas tra cellule epiteliali e cellule immunitarie. È difficile riconoscere il microbo perché somiglia a Trichomonas cellule umane ed è dipinto quasi in modo identico a loro.
Molto più efficace colorazione utilizzando il metodo Romanovsky-Giemsa. La vernice Romanovsky ha composizione complessa, che comprende blu di metilene, eosina e azzurro, e consente di isolare chiaramente il Trichomonas dalle cellule circostanti. La colorazione con questo metodo non viene utilizzata in tutti i laboratori: preparare questa soluzione colorante è piuttosto difficile, il che aumenta il costo dell'analisi.
A seconda della sostanza colorante, il prezzo dell'analisi è in media tra 400 e 600 rubli. In alcune regioni, l'analisi è disponibile gratuitamente nell'ambito del programma Assicurazione medica obbligatoria.
In media, l'affidabilità del metodo è dell'80%.
Viene anche chiamato l'esame di uno striscio al microscopio, sia esso uno striscio nativo o colorato esame batterioscopico.
Esame culturale (cultura)
Esame culturale (cultura) Rispetto alla microscopia di strisci nativi e colorati, il metodo diagnostico colturale è molto più efficace. Ad esempio, nel 1990, durante uno studio comparativo, Trichomonas è stato rilevato con precisione nell'80% dei pazienti mediante coltura.
L'essenza del metodo è che il materiale prelevato dal paziente viene posto su un mezzo nutritivo (se si sospetta la tricomoniasi, si tratta di uno striscio dai genitali). Una volta nel "paradiso del cibo", i Trichomonas, che vengono imbrattati, si moltiplicano intensamente e dopo 3-4 giorni sono facili da rilevare al microscopio. Se i microbi non si sono moltiplicati, con alta probabilità non erano nello striscio, il che significa che la persona è sana.
Un mezzo nutritivo è una sostanza o una miscela di sostanze adatta alla coltivazione di microrganismi. Ogni agente patogeno richiede la propria composizione del mezzo nutritivo: su alcuni terreni si riproducono bene, ma su altri potrebbero non riprodursi affatto.
Trichomonas cresce molto bene sui terreni nutritivi produzione importata, ad esempio, InpouchTV e Diamond. Ma nel nostro Paese questi mezzi vengono utilizzati molto raramente, di solito nelle cliniche private, perché sono miscele costose.
Ma anche tenendo conto delle condizioni russe, il test batterico per Trichomonas è uno dei test più affidabili. La sua precisione su terreni nutritivi di alta qualità raggiunge il 90%. Tuttavia, la ricerca culturale non è sempre prescritta, poiché richiede tempo e costi finanziari.
Il prezzo per lo studio varia da 500 a 5000 rubli, che dipende in gran parte dal mezzo di coltura utilizzato e dalla politica finanziaria dell'istituto.
Metodo PCR
I test di laboratorio possono diagnosticare quasi accuratamente la tricomoniasi. I più affidabili sono PCR e studi culturali. Se i test ottenuti con questi metodi sono negativi, quasi al 100% indica l'assenza della malattia, che non sarebbe indicata da altri metodi.
Ricorda che qualunque siano i risultati del test, non è successo nulla di terribile o irreparabile e liberarsi di questa spiacevole infezione non è affatto difficile.
DIAGNOSI DI LABORATORIO DELLE ELMINTOSI
La struttura dei segmenti della tenia viene studiata posizionandoli tra due vetrini. I segmenti della tenia bovina sono più grandi di quelli della tenia suina e della tenia larga; hanno più rami uterini laterali di quelli della tenia suina - circa 30 (contro 7-10) (Fig. 14, 15).
I segmenti della tenia larga sono corti, larghi e hanno una sporgenza a forma di rosetta al centro: l'utero (Fig. 16).
Solo i segmenti della tenia bovina sono mobili.
La testa di ciascun cestodo differisce in alcune caratteristiche. Testa tenia di maiale dotato di quattro ventose e di una proboscide con due file di uncini (tenia armata). Non ci sono uncini sulla testa della tenia bovina (tenia disarmata). La testa dell'ampia tenia ha due Bothria sui lati: fessure con l'aiuto delle quali l'ampia tenia è attaccata alla mucosa intestinale (Fig. 17, 18, 19).
Per identificare gli elminti, vengono esaminate le feci, il muco perianale e rettale, il contenuto duodenale, l'espettorato, il sangue e le particelle di tessuto. Importante negli studi microelmintologici viene utilizzata l'ovoscopia, che consente di fare una diagnosi basata sulla forma delle uova durante la microscopia dei preparati di feci e bile. Alcuni elminti sono localizzati al di fuori dell'intestino (cisticerco, trichinella, echinococco). In questi casi viene utilizzata la diagnostica metodi immunologici ricerca, biopsia, ecc.
Durante l'esame microscopico è necessario prelevare feci fresche o conservarle in una soluzione di formaldeide al 5% per evitare che le feci si secchino, modificando la forma delle uova e rendendo difficile una diagnosi corretta.
Vengono esaminati al microscopio su uno striscio nativo, dopo l'arricchimento - con il metodo di Fulleborn, Telemann, ecc.
Per preparare il farmaco nativo, una piccola parte di feci viene prelevata da diverse parti della porzione erogata e macinata accuratamente su un vetrino in una goccia di soluzione fisiologica di cloruro di sodio o di soluzione di glicerolo al 50%. La preparazione viene coperta con un vetrino coprioggetto e osservata al microscopio (almeno 2 preparazioni).
Metodo Shulman(farmaco nativo) presenta alcuni vantaggi. Usando questo metodo, puoi determinare le uova e le larve di alcuni elminti. Per fare ciò, 3 g di feci vengono immersi in un recipiente di vetro con acqua o soluzione fisiologica di cloruro di sodio (150 ml). Il contenuto del recipiente viene agitato con un'asta di vetro, a seguito della quale al centro, vicino all'asta, si forma una depressione a forma di imbuto. Il bastoncino viene rapidamente rimosso e la goccia di liquido rimasta in esso viene applicata su un vetrino, coperto con un vetrino coprioggetto ed esaminato al microscopio, identificando uova e larve di elminti.
Metodo di raschiatura utilizzato per la diagnosi di enterobiasi, taeniasi e taeniarincosi. Utilizzare un fiammifero affilato a forma di spatola, la cui estremità appuntita è inumidita in una soluzione di soda all'1%. Il contenuto della spatola viene trasferito su un vetrino in una goccia di soluzione di bicarbonato di sodio all'1%. La goccia viene coperta con un vetrino ed esaminata al microscopio.
Metodo Fulleborn consente di concentrare le uova di elminti per la ricerca e quindi aumenta la probabilità di rilevarle in questo modo. Preparare una soluzione di cloruro di sodio - 350 g per 1 litro d'acqua, scaldare a ebollizione e filtrare attraverso uno strato di cotone idrofilo o garza. In una tazza di porcellana da 100 ml vengono aggiunti 5-10 g di feci e diluiti gradualmente con una soluzione satura di cloruro di sodio. Qualsiasi fibra che galleggia in superficie viene immediatamente rimossa con carta da filtro. Il bicchiere con il suo contenuto viene lasciato in una cappa aspirante per 30 minuti -1 ora, sulla superficie si forma una pellicola in cui sono presenti uova di elminti che galleggiano in superficie. soluzione ipertonica. La pellicola viene rimossa con un filo o un'ansa di platino, applicata su un vetrino, coperta con un coprioggetto ed esaminata. Il metodo Fulleborn è utile per identificare le uova di tutti gli elminti rotondi, ad eccezione delle uova non fecondate dei nematodi e della tenia nana. Le uova di trematodi e grandi tenie galleggiano male, quindi è consigliabile osservare 2-4 preparati dal fondo della nave.
Accumulare le uova secondo il metodo Telemann sono necessari etere e acido cloridrico. In una provetta si versano 1-1,5 ml di etere e 5-6 ml di etere diluito di acido cloridrico, alla soluzione. aggiungere una piccola parte degli escrementi (1-2 g), agitare, filtrare con un colino spesso in una tazza di porcellana, versare in una provetta da centrifuga e centrifugare per 1 minuto. Nella provetta si formano tre strati: la parte superiore contiene i grassi estratti, la parte centrale contiene acido cloridrico in cui sono disciolti sostanze proteiche e il fondo: particelle non disciolte e uova di elminti. Si scolano i due strati superiori e dal sedimento si preparano 1-2 preparati che vengono esaminati al microscopio. Lo svantaggio del metodo è effetto dannoso acido cloridrico sul sistema ottico del microscopio e il suo effetto deformante sulle uova di elminti.
Secondo il metodo Kalantar 5 g di feci vengono mescolati in 10 volte il volume di una soluzione satura di nitrato di sodio. L'emulsione risultante viene filtrata attraverso una garza sottile. Dopo 10 minuti, dalla pellicola dalla superficie del liquido vengono preparati 5-6 preparati ed esaminati al microscopio.
Per l'opisthorchiasis, il metodo viene utilizzato per determinare l'intensità dell'invasione e l'efficacia della terapia. quantificazione uova nelle feci secondo Stoll. A tale scopo, in uno speciale pallone di vetro vengono versati 56 ml di soluzione decinormale di idrossido di sodio. Aggiungere 4 g di feci (fino ad un livello di liquido di 60 ml nel pallone) e agitare con sfere di vetro. Per lo studio, pipettare 0,075 ml (0,005 g) della miscela, trasferirla su un vetrino, coprire con un vetrino coprioggetto (22 x 23 mm) e contare il numero di uova (contenute in 0,075 cm3 della miscela) sotto un microscopio. Il numero risultante viene moltiplicato per 200, ottenendo il numero di uova per 1 g di feci. Di seguito è riportata una breve descrizione delle uova di elminto.
L'uovo fecondato del nematode è di forma ovale con uno spesso guscio multistrato. Il guscio proteico esterno è grossolanamente tuberoso, colorato colore giallo scuro. All'interno dell'uovo c'è un blastomero sferico. Le dimensioni dell'uovo sono 50-70x40-50 micron. Uovo di nematode non fecondato di forma allungata, il guscio albume è sottile, finemente grumoso, di colore giallo. All'interno dell'uovo ci sono grandi cellule gialle poligonali. Dimensioni 50-100x40-50 micron. A volte le uova possono essere senza guscio proteico: trasparenti, incolori e ricoperte da un guscio uniforme e spesso (Fig. 20, 1, 2, 3).
Uova di tricocefali di forma ovale con uno spesso guscio multistrato di colore giallo dorato o Marrone. Ai poli si trovano formazioni simili a sugheri. All'interno dell'uovo c'è un contenuto a grana fine. Dimensioni 50-54x22-23 micron (Fig. 20, 4).
Uova di ossiuri forma ovale irregolare con guscio multistrato sottile, liscio, incolore. Un lato è appiattito, l'altro è convesso. All'interno dell'uovo c'è un embrione vari gradi sviluppo fino alla larva. Dimensioni 50-60x20-30 micron (Fig. 20, 5).
Uova di anchilostomi forma ovale regolare con guscio sottile trasparente incolore. All'interno delle uova appena divise sono presenti 4 blastomeri. Dimensioni 54-70x36-40 micron (Fig. 20.6).
Uova di tenia bovina e suina struttura identica, forma sferica; guaina con 1-2 fili. All'interno dell'uovo c'è un'oncosfera (embrione) con uno spesso guscio striato radialmente Marrone scuro, con all'interno sei uncini embrionali. Le dimensioni dell'oncosfera sono 31x40 micron. Nelle feci umane non sono presenti uova, ma oncosfere (Fig. 20, 7).
Uova di tenia nana di forma ovale, hanno un sottile guscio incolore con all'interno un'oncosfera simile a un limone, dai poli della quale si estendono lunghe appendici filiformi (filamenti). Dimensioni 40x50 micron. Nell'oncosfera sono presenti 6 uncini germinali (Fig. 20.8).
Uova larghe di tenia a forma di uovo con spessore liscio grigio conchiglia. All'interno dell'uovo c'è un contenuto a grana grossa, sul polo superiore c'è un cappuccio, sul polo opposto c'è un tubercolo. Dimensioni 68-71x45 micron (Fig. 20, 9).
Uova di passera di gatto Hanno una conchiglia sottile, liscia, di colore giallo pallido con un opercolo sul polo superiore e una spina sul polo opposto. La metà inferiore dell'uovo è espansa, il contenuto interno dell'uovo è a grana fine. Dimensioni 26-32X11-15 micron.
Per rilevare le larve di anchilostoma e acne, viene utilizzato il metodo Berman. 5 g di feci su un colino metallico vengono posti sopra un imbuto di vetro fissato a un treppiede. Sul beccuccio dell'imbuto è posizionato un tubo di gomma con una fascetta. Nell'imbuto viene versata l'acqua riscaldata a 50° C Parte inferiore il colino con le feci era vicino all'acqua. Le larve si spostano attivamente dalle feci all'acqua, accumulandosi nella parte inferiore del tubo di gomma. Dopo 2 ore, aprire lentamente la pinza, scaricare l'acqua con le larve in provette da centrifuga, centrifugare e preparare i preparati dal sedimento su un vetrino, che vengono esaminati sotto un vetrino coprioggetto.
Per determinare le larve di Trichinella nel sangue, il sangue prelevato da una vena viene emolizzato con acqua distillata, centrifugato e dal sedimento vengono preparati preparati che vengono esaminati al microscopio.
Lo studio del contenuto duodenale si effettua come segue: la bile viene miscelata con un uguale volume di etere etilico e centrifugata; Il sedimento viene esaminato al microscopio. Oltre ai sedimenti, vengono esaminati i fiocchi galleggianti nel liquido, che possono contenere uova di elminti.
Per la cisticercosi e la trichinosi vengono esaminati anche i tessuti. Un pezzo di tessuto bioptico - muscoli del tessuto sottocutaneo, pelle - viene prima esaminato ad occhio nudo per identificare una vescicola di cisticerco, la cui lunghezza è 6-20 mm, larghezza - 5-10 mm. Se si sospetta il cisticerco, la vescicola viene schiacciata tra due vetrini ed esaminata al microscopio. La cisticercosi è caratterizzata dalla presenza di uno scolice con quattro ventose e un cerchio di uncini.
Per rilevare la Trichinella, un pezzo di muscolo asportato asetticamente (gastrocnemio, ecc.) viene frantumato in una soluzione di glicerina al 50% in fibre sottili utilizzando aghi da dissezione. Queste fibre vengono schiacciate tra due vetrini ed esaminate al microscopio a basso ingrandimento in un campo visivo scuro. Le larve di Trichinella sono avvolte nei muscoli sotto forma di spirale e si trovano in capsule (Fig. 21).
Il metodo di esame a raggi X viene utilizzato per l'echinococcosi, la cieticercosi, la trichinosi (dopo la calcificazione delle larve) e l'ascariasi.
In alcuni casi vengono utilizzati metodi diagnostici immunologici.
Gli elminti, così come i loro prodotti metabolici, hanno proprietà antigeniche per il corpo umano. Come risultato della presenza di elminti nel corpo umano, si verificano cambiamenti allergici, che possono essere rilevati mediante speciali agenti intradermici test allergici. Inoltre, nel corpo delle persone infette si formano vari anticorpi: precipitine che fissano il complemento. Le metodiche immunodiagnostiche acquistano particolare valore nei casi in cui l'ovoscopia non può essere utilizzata, in particolare con trichinosi, echinococcosi, cisticercosi, ascariasi in fase migratoria e con invasione di soli maschi.
Per l'echinococcosi e la trichinosi, viene eseguito un test di agglutinazione al lattice, un test di Kalus e per la cisticercosi, un test con un antigene preparato da Bobrov e Vozna. Per alcune elmintiasi è possibile utilizzare test sierologici: la reazione di precipitazione delle larve di ascaris con il siero sanguigno di un paziente nella fase migratoria dell'ascariasis, la reazione di precipitazione del siero sanguigno di un paziente affetto da trichinosi con un antigene delle larve di trichinella , RSC in echinococcosi, trichinosi, opistorchiasi, cisticercosi.
Prima di effettuare trattamenti e misure preventive per alcune elmintiasi di animali agricoli e commerciali, è necessario effettuare una diagnosi tempestiva e accurata della malattia. Esistono due gruppi di metodi per diagnosticare l'elmintiasi: intravitale e postmortem. Inoltre, bisogna essere in grado di distinguere tra elmintiasi e altre malattie invasive e infettive.
Diagnosi intravitale delle elmintiasi
La diagnosi di elmintiasi durante la vita degli animali viene effettuata sulla base dei risultati dei metodi di ricerca di laboratorio e della sverminazione diagnostica (metodi diretti), nonché delle reazioni immunobiologiche (metodi indiretti). I dati della ricerca svolgono un ruolo di supporto nella diagnosi delle elmintiasi ospiti intermedi(per le bioelmintiasi), osservazioni cliniche ed epizootologiche. Metodi diagnostici di base - ricerca di laboratorio, che consentono di rilevare frequentemente gli agenti patogeni dell'elmintiasi o le loro uova e larve negli escrementi (feci, urina, espettorato), secrezioni (bile), tessuti (sangue, muscoli), organi (pezzi di pelle) e nel contenuto dei punti e ascessi.
I metodi di laboratorio per diagnosticare le infezioni da elminti negli animali sono facili da implementare e abbastanza accurati, quindi sono ampiamente utilizzati nelle condizioni di produzione (nei laboratori veterinari e in altre istituzioni veterinarie). A seconda dello scopo previsto, la ricerca di laboratorio è suddivisa in metodi di ricerca elmintooscopica, elmintolarvoscopica ed elmintoscopica.
Metodi elmintolarvoscopici la ricerca viene utilizzata per rilevare larve di elminti (dictyocaulus, mulleria, ecc.). Da questo gruppo viene spesso utilizzato lo studio delle feci utilizzando i metodi Berman-Orlov e Vaid.
Elmintoscopico o macroelmintoscopico gli studi vengono utilizzati a fini diagnostici per rilevare elminti o loro frammenti (segmenti di nidi) rilasciati all'esterno. In condizioni pratiche, questo metodo viene utilizzato per stabilire una diagnosi di ascariasi nei suini, drepanidoteniasi nelle oche e altre elmintiasi.
Tra i metodi di laboratorio per diagnosticare le infezioni da elminti negli animali, di grande importanza pratica sono i seguenti: a) studi elmintocoprologici (esame delle feci); b) studio delle secrezioni di altri organi; c) esame dei tessuti.
Studi elmintocoprologici
Per gli stessi scopi è stato proposto uno speciale dispositivo costituito da ganasce in acciaio, rami di transizione e due superfici emisferiche fissate ai rami. Il prelievo delle feci dal retto degli animali mediante questo dispositivo facilita il lavoro degli operatori veterinari e migliora lo standard di produzione di questa manipolazione.
Nei conigli, le feci in quantità di diverse palline vengono rimosse premendo sulla parete addominale nella zona rettale. A volte è accettabile prelevare campioni di feci dal pavimento se sono fresche e si sa da quale animale provengono. Da un animale vengono prelevati almeno 10-20 g di feci. Da uccelli, animali da pelliccia, cani, gatti e predatori selvaggi(negli zoo) le feci vengono raccolte dal pavimento pulito delle gabbie (campioni di gruppo).
Tutti i campioni fecali sono etichettati: lungo il bordo del sacchetto o del foglio di carta (dove non entrerà in contatto con gli escrementi) è scritto a matita il numero del campione (a volte il nome delle mucche). I campioni fecali sono accompagnati da un inventario che indica il nome dell'allevamento, della squadra, della specie, del sesso e dell'età degli animali (per gli adulti - nome o numero di inventario) e la data del campionamento. Si consiglia di indicare nel documento accompagnatorio lo scopo della ricerca fecale (ad esempio per monitorare la sverminazione eseguita). È necessario cercare di consegnare rapidamente i campioni fecali al laboratorio veterinario ed esaminarli senza indugio, perché a temperatura ambiente, dopo 16-20 ore, le larve emergono dalle uova degli strongili intestinali, il che complica la diagnosi di dittocauulosi e protostrongilidosi, poiché così come altre infezioni da elminti.
Se i campioni fecali non vengono esaminati il giorno della raccolta, vengono posti in frigorifero o in cantina a una temperatura non superiore a 10°. Disinfettanti non fermare lo sviluppo delle larve all'interno delle uova di elminti. I risultati dell'esame fecale sono registrati in un diario speciale.
Attrezzature per la ricerca elmintocoprologica. L'affidabilità degli studi coprologici sugli elminti dipende in gran parte dalla qualità delle attrezzature di laboratorio. Nel 1968, in Ucraina fu sviluppata una serie di apparecchiature standard per i test di massa sulle feci per le infezioni da elminti. Si compone di articoli realizzati principalmente in polistirolo antiurto bicolore, facile da lavare e neutralizzare (resiste all'ebollizione), comodo anche per il trasporto. Il set comprende tazze di varie capacità, imbuti, provette coniche, colini di varie dimensioni, un supporto con cinque stecche (ciascuna per sei imbuti), cuvette (a seconda delle dimensioni del supporto), scatole per riporre i piatti, nonché bulbi di gomma, bacchette di vetro e anelli metallici (Fig. 1).
A differenza delle apparecchiature eterogenee utilizzate in precedenza, il nuovo set aumenta l'efficienza dei test di laboratorio sulle feci e la produttività del lavoro dei veterinari, consente una gamma più ampia di studi elmintocoprologici quantitativi utilizzando metodi standardizzati (controllo della sverminazione) e migliora anche l'aspetto estetico di questo lavoro.
Esistono metodi qualitativi e quantitativi per lo studio delle feci.
Studi elmintocoprologici qualitativi
I metodi di ricerca qualitativa consentono di determinare da quali animali da elminti sono infetti.
Metodi elmintoovoscopici. Per la diagnosi intravitale delle infezioni da elminti sono stati proposti un gran numero di metodi di ovoscopia elmintica, di cui considereremo solo quelli più spesso utilizzati nella pratica veterinaria.
La maggior parte dei metodi diagnostici elmintocoprologici si basano sulla differenza nel peso specifico delle uova, delle larve di elminti o dei loro frammenti, da un lato, e del liquido in cui sono sospese le feci in esame, dall'altro. A seconda del rapporto tra il peso specifico di questi componenti, si distinguono la flottazione, la sedimentazione e i metodi combinati.
Metodi di flottazione. Nei metodi di flottazione (galleggiante) vengono utilizzati liquidi (soluzioni saline sature), il cui peso specifico più peso uova di elminti. Nella pratica di laboratorio, la soluzione più utilizzata è satura. sale da tavola(peso specifico 1,18). Per preparare tale soluzione, il cloruro di sodio viene aggiunto gradualmente in una pentola con acqua bollente mescolando fino a formare un piccolo sedimento sul fondo (circa 400 g di sale da cucina per 1 litro di acqua). La soluzione calda viene filtrata in una bottiglia attraverso diversi strati di garza o cotone idrofilo e utilizzata dopo il raffreddamento (sul fondo della bottiglia dovrebbe formarsi un precipitato cristallino).
Meno comunemente, i laboratori veterinari utilizzano soluzioni sature di solfato di magnesio con un peso specifico di 1,35 (920 g per 1 litro di acqua calda), iposolfito di sodio con un peso specifico compreso tra 1,37 e 1,41, a seconda della temperatura ambiente(1750 g per 1 litro di acqua calda) e nitrato di sodio con un peso specifico di 1,4 (rapporto nitrato/acqua calda 1:1).
Metodo Fulleborn caratterizzato da facilità di implementazione e alta efficienza per la maggior parte dei nematodi e delle cestodiasi degli animali, quindi è al primo posto tra gli altri metodi diagnostici elmintocoprologici. Mettere 3-5 g di feci in un bicchiere di vetro, polistirolo o plastica con una capacità di 50-100 ml e, mescolando con una bacchetta di vetro, aggiungere gradualmente una soluzione satura di sale da cucina (cloruro di sodio) in ragione di 15- 20 parti di liquido di galleggiamento per una parte di feci. Le feci dense di pecora possono essere prima macinate una piccola quantità soluzione salina in un mortaio di porcellana, dopo di che la sospensione viene versata in un bicchiere, aggiungendo importo richiesto soluzione di cloruro di sodio. Apparire particelle di grandi dimensioni rimuovere immediatamente con un bastoncino, ed è consigliabile filtrare la sospensione fecale in un altro bicchiere attraverso un colino (a volte si utilizzano colini per il latte). Dopo aver fatto riposare il campione caricato per 45-60 minuti, tre gocce della pellicola superficiale vengono rimosse con un ansa metallica, poste su un vetrino ed esaminate al microscopio senza vetrino coprioggetto. Dopo ogni test, le anse vengono lavate in un bicchiere d'acqua (invece di bruciarle in una lampada ad alcool come raccomandato in alcuni manuali).
Metodo Kalantarian- un metodo Fulleborn modificato. Come liquido di flottazione viene utilizzata una soluzione satura di nitrato di sodio. Il tempo di assestamento della sospensione è di 15-30 minuti. Utilizzato per la diagnosi di acantocefalosi.
Metodi di precipitazione. I metodi di sedimentazione utilizzano liquidi con un peso specifico inferiore a quello delle uova.
Metodo di lavaggio sequenziale. Una piccola quantità di feci (5 g) viene mescolata in un bicchiere con 10 volte la quantità di acqua. Si filtra la miscela in un bicchiere capiente e si aggiunge acqua, dopodiché il filtrato viene lasciato riposare per 5 minuti. Quindi lo strato superiore di liquido viene drenato o aspirato con una siringa fino alla formazione di un sedimento; aggiungere la stessa quantità di acqua al precipitato, mescolare e lasciare riposare per 5 minuti. Queste manipolazioni vengono ripetute finché lo strato superiore di liquido nel vetro non diventa trasparente. Liquido ultima volta drenato e il precipitato viene applicato su vetro o in una piastra batteriologica ed esaminato al microscopio. Questo metodo viene spesso utilizzato per diagnosticare la maggior parte dei trematodi e dell'acantocefalosi.
Metodo Gorshkov si basa sul principio della sedimentazione seguita dalla concentrazione delle uova di elminti. 150-300 g di feci di cavallo vengono posti su un setaccio metallico o una garza in un grande imbuto di vetro con un diametro di 15-20 cm nella parte superiore, sul quale viene posto un tubo di gomma lungo 10-15 cm con un morsetto all'estremità estremità inferiore dell'imbuto. Le feci vengono allentate e versate in cima acqua calda. Le feci vengono conservate nell'imbuto da 4 ore a un giorno, dopodiché la pinza viene aperta con cura, parte del liquido viene rilasciata in provette da centrifuga e centrifugata per 3 minuti. Il liquido viene quindi drenato e il sedimento viene esaminato al microscopio. Questo metodo viene utilizzato per diagnosticare la drageiosi e l'abronematosi nei cavalli.
Metodi combinati. Si basano sul principio della sedimentazione e flottazione delle uova di elminti, quindi sono più efficaci rispetto ai metodi di ricerca precedenti. A causa della loro complessità, questi metodi hanno un’applicazione relativamente limitata in ambienti industriali.
Metodo caro. Una piccola quantità di feci (3-5 g) viene mescolata in un bicchiere con 20-30 ml di acqua, la miscela viene filtrata in provette da centrifuga e centrifugata per 1-2 minuti, dopodiché lo strato superiore di liquido viene drenato e al sedimento viene aggiunta una miscela di parti uguali di glicerina e sale da cucina. La miscela nelle provette viene agitata e centrifugata una seconda volta. Le uova che galleggiano in superficie vengono rimosse insieme alla pellicola di sospensione mediante un'ansa metallica, spostate su un vetrino ed esaminate al microscopio. In assenza di glicerina, le feci possono essere miscelate con una soluzione satura di cloruro di sodio prima della centrifugazione secondaria.
Metodo Shcherbovich. La tecnica per esaminare le feci è simile al metodo precedente. Si differenzia da esso in quanto prima della centrifugazione secondaria, al sedimento viene aggiunta una soluzione satura di iposolfito di sodio (per la macracantorincosi dei suini) o solfato di magnesio (). Rispetto al metodo Darling, questo metodo è più efficace.
Metodo di flottazione-sedimentazione di Demidov raccomandato per la diagnosi della fascioliasi e di altri trematodi dei ruminanti. Un campione fecale (3 g di pecora e 5 g di bovino) viene posto in un bicchiere da 200 ml e vi viene versata fino in cima una soluzione satura di sale da cucina e mescolata accuratamente con una bacchetta di vetro, dopodiché la sospensione viene lasciata a riposare per 15-20 minuti. Le particelle grossolane che galleggiano in superficie vengono rimosse con una paletta di carta e il liquido surnatante viene aspirato con una siringa (durante l'esame grande quantità il liquido campione può essere scaricato), lasciando sul fondo 20-30 ml di sedimento. Aggiungere acqua al sedimento fino all'intero volume del bicchiere e mescolare accuratamente. La miscela viene filtrata in un bicchiere normale attraverso una garza o un setaccio metallico e lasciata per 5 minuti. Si aspira il liquido surnatante lasciando sul fondo 15-20 ml di sedimento, che si trasferiscono in un bicchiere conico, si sciacqua in un bicchiere normale e si versa in uno piccolo. Si lascia decantare la sospensione in una tazza conica per 3-5 minuti e successivamente si aspira il liquido (si ripete l'operazione). Il sedimento eliminato viene trasferito su un vetrino ed esaminato al microscopio. Questo metodo è più efficace del metodo di lavaggio sequenziale.
Metodi elmintolarvoscopici. Metodo di Berman-Orlov. Per esaminare le feci, utilizzare un apparecchio costituito da un imbuto medio (plastica, polistirolo o vetro), un tubo di gomma (lungo 10-15 cm), collegato estremità superiore con un imbuto, una fascetta fissata all'estremità inferiore di un tubo di gomma, un setaccio metallico o un pezzo di garza e un treppiede (per uno o più dispositivi). L'apparecchio montato è riempito con acqua calda (35-38°). 10-15 g di feci fresche vengono poste su un setaccio o avvolte in una garza e abbassate con cura in un imbuto. Le feci delle pecore vengono conservate nell'apparecchio per 2-4 ore e quelle dei vitelli per almeno 6-7 ore. Quindi il morsetto sulla provetta viene allentato e il liquido che scorre viene raccolto in una provetta e centrifugato per 2-3 minuti. Successivamente, lo strato superiore di liquido viene drenato capovolgendo rapidamente la provetta e il liquido rimasto sul fondo viene trasferito su un vetrino ed esaminato al microscopio. L'uso di morsetti su un tubo di gomma nell'apparato Baermann è associato a disagi, pertanto in molti laboratori veterinari le estremità inferiori dei tubi di gomma sono direttamente collegate a piccole provette. Prima di esaminare il sedimento al microscopio, il liquido non viene centrifugato.
Le feci dei ruminanti possono essere esaminate per i nematodi polmonari (specialmente in condizioni di spedizione) utilizzando il metodo semplificato della larvoscopia elmintica (senza l'uso di imbuti). A questo scopo vengono utilizzate piccole tazze semiconiche (50 ml). I campioni fecali vengono posti in filtri o avvolti in garze e posti in tazze d'acqua. Dopo alcune ore, le feci vengono rimosse, il liquido dalla tazza viene aspirato o drenato e il sedimento viene esaminato al microscopio.
Il metodo di Vaid. Diversi pellet di feci di piccoli ruminanti vengono posti in una piastra batteriologica o su di essa occhiali da vista e inumidirli con una piccola quantità di acqua tiepida. Dopo 10-20 minuti, le feci vengono rimosse e il liquido rimanente viene esaminato al microscopio a basso ingrandimento. L'efficacia di questo metodo è significativamente inferiore rispetto al metodo precedente, quindi viene utilizzato meno spesso per diagnosticare la dittocauulosi e la protostrongilidosi nelle pecore.
Metodo diagnosi differenziale strongilatosi da larve infettive. Gli agenti causali della maggior parte della strongilatosi intestinale hanno quasi la stessa struttura dell'uovo, pertanto con l'elmintoovoscopia è possibile fare solo una diagnosi di gruppo (ad esempio, strongilatosi).
Per stabilirne di più diagnosi accurata I laboratori veterinari (generici) talvolta ottengono una coltura di larve invasive di strongilato. Circa 5 g di feci vengono posti in una piastra batteriologica, chiusa con un coperchio e posta in termostato ad una temperatura di 25-30° per una settimana. Quindi le feci con le larve vengono esaminate utilizzando il metodo Berman-Orlov (per isolare le larve infettive dalle feci).
Larve infettive diversi tipi Gli strongili intestinali differiscono per dimensioni corporee, struttura dell'estremità caudale del cappuccio e numero di cellule intestinali. Ad esempio, le larve di esofagostoma sono più grandi (fino a 1 mm di lunghezza), l'estremità della coda filiforme del cappuccio è lunga e l'intestino ha 20-32 cellule; Larve di Haemonchus media lunghezza(circa 0,8 mm), con l'estremità della coda del cappuccio filiforme, l'intestino ha 16 cellule.
Il lavaggio periodico e la sedimentazione delle feci vengono ripetuti fino a quando lo strato superiore non si schiarisce. Strato superiore si scarica il liquido un'ultima volta e si esamina il sedimento in piccole porzioni in cuvette a fondo bianco e nero. Gli elminti rilevati vengono raccolti utilizzando pinzette, aghi da dissezione e spazzole, esaminati al microscopio e quindi trasferiti in un liquido conservante. Per identificare piccoli nematodi, il sedimento viene ulteriormente esaminato in sezioni utilizzando una lente d'ingrandimento binoculare o treppiede con ingrandimento 10-20x.
Studi quantitativi elminto-coprologici
Metodo Fulleborn standardizzato meno accurato rispetto al metodo Stoll, ma grazie alla facilità di implementazione è ampiamente utilizzato nella pratica veterinaria per monitorare l'efficacia della sverminazione degli animali. In termini di tecnica, il metodo standardizzato assomiglia ad altri metodi di studi qualitativi sull'elminto-ovoscopia. Presenta però una serie di caratteristiche, le principali delle quali sono le seguenti: 1) la quantità di feci deve essere uguale; 2) piatti dello stesso volume; 3) il tempo di sedimentazione delle sospensioni acquose delle feci è lo stesso; 4) anse dello stesso diametro, studio di un numero uguale di gocce.
Per approssimare l'intensità dell'invasione della dittocauulosi e della progostrongilidosi nei ruminanti, è possibile utilizzare il metodo standardizzato di Berman-Orlov. L’attendibilità dei risultati aumenta con l’aumentare del numero e della frequenza degli studi.
Studio delle secrezioni di altri organi
L'esame del contenuto delle cavità congiuntivali viene utilizzato per diagnosticare la thelaziosi nei bovini (agente patogeno: Thelazia rhodesi). Le cavità congiuntivali vengono irrigate da una siringa soluzione acquosa iodio; il liquido fuoriuscito viene raccolto in una cuvetta o bacinella a forma di rene e ispezionato per la presenza di teli. In questo caso, anche una soluzione acquosa di iodio ha un effetto curativo.
Lo studio della secrezione dalla cloaca viene effettuato per la diagnosi intravitale. Il muco che fuoriesce viene posto su un vetrino ed esaminato al microscopio per rilevare le uova dell'agente patogeno.
L'esame dei raschiati delle pieghe perianali è il principale metodo diagnostico. Utilizzando un bastoncino a forma di spatola o un fiammifero inumidito con una miscela di parti uguali di glicerina e acqua, si effettua una raschiatura delle pieghe perianali del perineo e della superficie interna della radice della coda. Il raschiamento viene trasferito su un vetrino in una goccia di glicerolo con acqua, coperto con un vetrino coprioggetto ed esaminato al microscopio. Il rilevamento delle uova di oxyur conferma la diagnosi clinica.
Per la diagnosi si raccomanda l'esame dei raschiati cutanei delle “ulcere estive”. forma cutanea Drasheiosi e abronematosi. Si preleva un raschietto dalla superficie cutanea appena ulcerata e lo si immerge in una goccia di acido cloridrico diluito (1:1000). La preparazione viene quindi divisa con aghi da dissezione, coperta con un coprioggetto ed esaminata al microscopio per rilevare larve di drashi o gabronema.
Ricerca sui tessuti
L'esame della pelle dei bovini (secondo Gnedina) viene utilizzato per diagnosticare l'oncocercosi. Sul fondo parete addominale Dopo aver preparato il campo chirurgico, dall'animale viene tagliato un piccolo pezzo di pelle spesso 2 mm (circa la dimensione di un piccolo chicco d'avena) e la ferita viene lubrificata con tintura di iodio. In un laboratorio veterinario questo pezzo di pelle viene posto su un vetrino in una soluzione fisiologica, diviso con aghi da dissezione, quindi il tutto viene versato in una provetta da centrifuga e posto in termostato per diverse ore alla temperatura di 37-38° . Quindi le fibre cutanee vengono rimosse, il liquido viene centrifugato e il sedimento viene analizzato al microscopio per rilevare i microoncocerchi mobili.
Esame dei pezzi muscolari spesso eseguito postumo. A volte viene utilizzato un metodo di biopsia per la diagnosi intravitale della trichinosi. Attraverso un intervento chirurgico, viene tagliato un pezzo di muscolo (ad esempio, dai muscoli esterni dell'orecchio), da cui vengono preparate piccole sezioni (delle dimensioni di un chicco d'avena). Questi ultimi vengono posti sul vetro inferiore del compressore, ricoperti con il vetro superiore e uniti con viti fino al completo appiattimento. Le sezioni vengono visualizzate con un trichinelloscopio, un microscopio a basso ingrandimento, utilizzando un trichinoscopio a proiezione o una telecamera a proiezione KT-3.
Sverminazione diagnostica
Per la sverminazione diagnostica vengono selezionati diversi animali, isolati dal resto del bestiame e trattati con un antielmintico dose terapeutica. Le feci escrete da questi animali entro uno o due giorni vengono raccolte e sottoposte a elmintoscopia per individuare l'agente eziologico della malattia. In condizioni di produzione, vengono spesso effettuate sverminazioni diagnostiche per la diagnosi intravitale di moniesiosi nei ruminanti, drepanidoteniasi nelle oche, cestodosi nei carnivori, ascariasis nei suini e ascariasis nei polli.
Reazioni immunologiche
Le reazioni allergiche cutanee sono proposte per la diagnosi intravitale della fascioliasi delle pecore, dell'opisthorchiasi carnivora e della moniesiosi delle pecore, dell'emonchiasi e della dittoocaulosi delle pecore, dell'oncocercosi dei bovini e dei cavalli e della trichinosi dei suini.
Tra i metodi sierologici va menzionata la reazione di scolexoprecipitazione, che consente la diagnosi fasi iniziali echinococcosi e reazione di precipitazione utilizzando larve vive di nematodi e trichinella per identificare le corrispondenti infezioni da elminti.
Studio degli ospiti intermedi di elminti
I risultati dell'esame elmintologico degli animali dovrebbero sempre essere integrati da dati provenienti da studi sulle infezioni da elminti di ospiti intermedi. Permettono di chiarire la situazione elmintologica e prevedere l'insorgenza di elmintiasi. Gli ospiti intermedi degli elminti possono essere molluschi (d'acqua dolce e terrestre), crostacei (ciclopi, dafnie, anfipodi, asini d'acqua), lombrichi, insetti (mosche, moscerini, moscerini, libellule, formiche, scarafaggi), acari del suolo.
La densità (composizione quantitativa) ha un significato epidemiologico. singole specie ospiti intermedi. Più è alto, maggiori sono le possibilità che gli animali vengano infettati da infezioni da elminti. Gli ospiti intermedi terrestri si trovano in luoghi differenti(nei cumuli di letame, sui paddock, nelle aree di pascolo, ecc.). Gli ospiti acquatici intermedi vivono in gran numero lungo le rive di corpi idrici poco profondi e in boschetti di piante. In questi luoghi, gli animali (soprattutto) vengono spesso infettati dall'elmintiasi.
Gli ospiti intermedi dovrebbero essere esaminati per la presenza di larve di elminti allo stato fresco (preferibilmente vive) con una lente binoculare o un microscopio a basso ingrandimento. Gli stadi larvali degli elminti nel corpo degli ospiti intermedi sono a diverse fasi sviluppo, ma le più evidenti sono le larve infettive. Come risultato della ricerca viene determinata l'entità (percentuale) e l'intensità (quantità) dell'infestazione degli ospiti intermedi da parte delle larve di alcuni tipi di elminti.
Acari oribatidi o corazzati (fino a 1 mm di lunghezza). Vivono negli strati superiori del terreno. Questi sono ospiti intermedi di moniesia ruminante e altri elminti. Per rilevare le larve di tenia (cisticerroidi), il guscio di un acaro oribatide viene prima diviso in pezzi in una goccia d'acqua su un vetrino (sotto il controllo di una lente d'ingrandimento), quindi il campione viene coperto con un vetrino ed esaminato al microscopio . Cisticercoidi della moniesia forma rotonda(0,15-0,19 mm di diametro), dotato di quattro ventose e di un'appendice caudale. Sono molto delicati, quindi non va utilizzato il test del compressore per gli acari.
I lombrichi di altri generi (Criodrilus, Eophila) vivono in specchi d'acqua con sponde paludose e fangose. Sono registrati come ospiti intermedi degli agenti causali dell'istericosi e della porrocecosi nelle anatre. La larva di Histrichis è molto grande (fino a 3 cm di lunghezza), di colore biancastro, visibile attraverso la pelle del verme sotto forma di una striscia ondulata. Le larve del Porrocecum sono dieci volte più piccole della larva precedente (2,5-3 mm); si trovano dentro vasi sanguigni durante l'esame del compressore dei lombrichi al microscopio.
Ricerca sugli anfipodi. Gli anfipodi raggiungono una lunghezza fino a 2 cm e vivono in corpi d'acqua marini e d'acqua dolce. Sono registrati come ospiti intermedi di agenti patogeni della polimorfosi. streptocariasi e tetramerosi degli uccelli. Le larve vengono scoperte durante l'esame del compressore di questi crostacei. Le larve (acanthellae) di polymorphus sono di forma ovale, di colore arancione, lunghe fino a 1 mm, visibili macroscopicamente.
Ricerca sui burros acquatici. Gli asini d'acqua sono lunghi da 1 a 1,5 cm, vivono in corpi d'acqua d'acqua dolce e sono ospiti intermedi dell'agente eziologico della filicolosi aviaria. L'esame del compressore può rivelare la larva (acanthella) bianco, ovale, lungo 0,7 mm.
Puoi anche esaminare altri ospiti intermedi (moscerini, moscerini, mosche, libellule, scarafaggi, formiche).
Microscopia a fluorescenza
Il metodo della microscopia a fluorescenza (secondo V. G. Evranova) è un nuovo metodo per diagnosticare l'elmintiasi. Permette di differenziare le uova dello stesso tipo tipi diversi elminti, oltre a distinguere le uova e le larve vitali da quelle morte. In precedenza, le uova di trematodi, cestodi e nematodi venivano trattate con soluzioni di arancio di acridina e altri fluorocromi. Le uova vitali e le larve dei nematodi non si illuminano o si illuminano debolmente, mentre quelle morte brillano intensamente e sono arancioni, giallo-verdi o gialle.
Con la microscopia a fluorescenza è possibile differenziare le uova dei principali cestodi carnivori, le uova di agenti patogeni e l'eteracidosi dei polli, che notoriamente presentano struttura simile per dimensione, forma e colore, nonché distinguere tra oocisti di coccidi vitali e morte.
I preparati vengono visualizzati al microscopio MUF-3 o ML-2. La tecnica della microscopia a fluorescenza è relativamente semplice e può essere utilizzata in ambienti industriali (laboratori veterinari).
Da altri studi di secondaria importanza per stabilire una diagnosi di elmintiasi. Puoi indicare metodi come chiarire la composizione morfologica del sangue (tenendo conto dell'eosinofilia), un metodo per determinare la frazione proteica.
Brevi caratteristiche delle uova di elminti
Le uova di rappresentanti di diverse classi differiscono per dimensioni, colore, forma, struttura del guscio e contenuto interno.
Uova di trematodi. Molto spesso di forma ovale con un cappuccio su un polo. Il guscio è liscio. In alcune specie la conchiglia è dotata di filamenti (processi) e tubercoli. Il colore delle uova varia dal grigio chiaro al marrone (solitamente giallo).
Uova cestodi. Esistono due tipi: tenie e tenie. Nei lenteni assomigliano alle uova di trematodi (ovali con cappuccio). Le uova di tenia differiscono nettamente nella struttura dalle uova di elminti di altre classi: sono spesso di media grandezza, di forma rotonda, di colore grigio, mature (all'interno dell'embrione c'è un'oncosfera con tre paia di ganci embrionali).
Uova di nematodi. Differiscono dalle uova dei trematodi per l'assenza del coperchio; dalle uova di cestodi - l'assenza di un'oncosfera.
Le dimensioni, la forma, la struttura e il colore dei gusci delle uova dei nematodi sono molto diversi. Guscio esterno Può essere liscio, tuberoso, cellulare: lo spessore delle membrane varia da sottile (nello strongilato) a spesso (nel tricocefalo). La maggior parte dei nematodi ha uova ovali e simmetriche, alcuni hanno uova semicilindriche (in draghi). La maggior parte dei nematodi rilascia uova immature nella fase di pre-segmentazione o in numerose palline di frantumazione; una minoranza rilascia uova mature (all'interno dell'uovo si forma una larva).
Uova di acantocefalo. Hanno forma ovale, ellissoidale e fusiforme: la loro dimensione è medio-grande. Le uova rilasciate nell'ambiente esterno contengono al loro interno una larva - un acantore con dieci uncini embrionali (maturi).
Osservazioni cliniche
Dati epizootologici
Nella diagnosi di molte elmintiasi degli animali da allevamento, i dati epidemiologici (condizioni sfavorevoli dell'allevamento per malattie specifiche, stagione dell'anno, età degli animali malati, natura dei pascoli e delle fonti d'acqua, condizioni meteorologiche, ecc.) forniscono un aiuto significativo. Ad esempio, una malattia di massa con segni idropisia addominale e la morte delle pecore in autunno dopo un'estate piovosa e l'uso delle zone umide nei pascoli per il pascolo danno motivo di sospettare forma acuta fascioliasi. Malattia delle papere in estate con segni di indigestione (diarrea) e sistema nervoso(paresi) dopo averli pascolati su uno specchio d'acqua poco profondo e stagnante, abbondantemente popolato da Ciclopi, costituisce la base per stabilire una diagnosi presuntiva di drepanidoteniasi. La morte degli agnelli in primavera (3-4 settimane dopo l'inizio del pascolo) dovrebbe far sospettare la malattia delle giovani pecore con monieziosi. È inoltre necessario tenere conto delle caratteristiche zonali delle elmintiasi negli animali domestici, preferibilmente in combinazione con osservazioni cliniche.
Metodi intravitali diagnostica di laboratorio elmintiasi:
— studi elmintocoprologici;
— esami elminto-ovoscopici;
— studi elmintolarvoscopici;
— diagnostica immunobiologica;
— sverminazione diagnostica e altri metodi;
Metodi diagnostici post mortem:
— studi patologici;
— dissezioni elmintologiche complete e incomplete di organi e tessuti (PGV e NGV).
Prima di passare alle questioni sopra elencate su questo argomento, ritengo opportuno definire il concetto di “invasione” e di “malattie invasive”.
Le malattie invasive possono manifestarsi sia in forma clinicamente espressa con mortalità significativa, sia in forma nascosta (latente).
Nella diagnosi delle malattie invasive cruciale sottoporsi a test di laboratorio, a seguito dei quali viene identificato l'agente patogeno.
Consideriamo i metodi per la diagnosi intravitale delle elmintiasi. A questo scopo, sia macro che studi microscopici, principalmente feci, urina, sangue, derma, contenuto delle cavità corporee, ecc. Questi metodi di elmintiasi studi diagnostici, volti a trovare e studiare gli elminti stessi, i loro frammenti o uova e larve, sono i più conclusivi e ampiamente utilizzati per la diagnosi delle infezioni da elminti.
Il materiale per gli studi diagnostici deve essere esente da impurità e contaminanti estranei, si consiglia di prelevare le feci dal retto dell'animale, devono essere fresche, devono essere conservate al freddo (non > 5 o C), si possono anche conservare con una soluzione di formalina al 5-10% o acido carbolico.
Elmintoscopia– utilizzato per rilevare esemplari interi di elminti o loro frammenti nelle feci, soprattutto durante l’esame delle cestodosi intestinali. Questo metodo viene utilizzato anche per monitorare l'efficacia della sverminazione e per registrare il numero di elminti espulsi. Per questi studi, è necessario prelevare l'intera porzione una tantum di feci e, per tenere conto dell'efficacia della sverminazione, raccogliere tutti gli escrementi espulsi dall'animale entro 2-4 giorni dal trattamento. Le feci raccolte vengono prima esaminate ad occhio nudo. Quindi vengono posti in un recipiente di metallo, diluiti con 5-10 volte la quantità di acqua, mescolati e lasciati riposare per un po' di tempo, quindi lo strato superiore viene drenato (per sedimentare) e viene aggiunta nuovamente acqua. Queste manipolazioni di lavaggio e sedimentazione sequenziali vengono eseguite più volte. Il precipitato risultante in piccole porzioni esaminato in cuvette (piastre Petri) su fondo bianco e nero. Tutti gli elminti visibili vengono selezionati con un ago ed esaminati al microscopio, stabilendo la specie.
L'elmintoovoscopia è un metodo per diagnosticare le elmintiasi in seguito al rilevamento delle uova di elminti nel materiale. Per effettuare tali studi si utilizzano le seguenti attrezzature e mezzi: microscopio biologico, vetrini, piastre Petri, bicchieri di vetro o plastica (diametro non > 4-5 cm), bicchieri con un volume di 50 ml, filtri di filtrazione (con un rete di nylon, calza), bacchette di vetro, anse metalliche con diametro dell'anello di 8-10 mm.
Le soluzioni di flottazione vengono utilizzate per studi diagnostici. La migliore capacità di galleggiamento è data dalle soluzioni a una temperatura di 20-22 o C. Controlliamo la densità della soluzione con un densimetro. Una soluzione satura di nitrato tecnico o nitrato di ammonio con una densità di 1,32 (1500 g per 1 litro di acqua bollente); nitrato di sodio o nitrato di sodio con densità 1,38 (rapporto sale/acqua calda 1:1); solfato di magnesio (solfato di magnesio) con una densità di 1,26-1,28 (920 g per 1 litro di acqua calda); tiosolfato di sodio o iposolfito di sodio, densità 1,38-1,40 (1750 g per 1 litro di acqua bollente); solfato di zinco con una densità di 1,24 (400 g per 1 litro di acqua); sale da cucina, densità 1,2 (400 g di sale in 1 litro d'acqua vengono portati all'ebollizione), viene utilizzato freddo.
Il metodo più semplice per l'esame elmintico-ovoscopico delle feci è il metodo dello striscio nativo. Un piccolo pezzo di feci viene posto su un vetrino, vengono aggiunte 2-3 gocce di una miscela di parti uguali di glicerina e acqua, mescolate accuratamente, coperte con un coprioggetto e osservate al microscopio. Questo metodo è inaffidabile, poiché con un'invasione debole dà un risultato negativo.
Metodo di risciacquo sequenziale(metodo di sedimentazione) viene utilizzato per diagnosticare i trematodi negli animali, le cui uova di agenti patogeni hanno un peso specifico elevato e non vengono catturate con il metodo galleggiante. Prendere 5 g di feci, mescolare con 10 volte la quantità di acqua, filtrare attraverso un setaccio o una garza e lasciare filtrare per 5 minuti. Successivamente, il liquido viene drenato e al precipitato viene aggiunta acqua pulita e nuovamente depositata per 5 minuti. Fino a quando il liquido diventa limpido. Il liquido viene drenato e il sedimento viene esaminato al microscopio per la presenza di trematodi.
I metodi di flottazione sono spesso utilizzati per diagnosticare nematodi e cestodi. Il metodo più comune e più utilizzato è il metodo Fulleborn. Per fare questo, prendi 10-20 g di feci, mettilo in un barattolo o un bicchiere con una capacità di 100-200 ml, strofinalo accuratamente con un bicchiere o un bastoncino di legno in una soluzione satura di sale da cucina. La quantità totale di soluzione aggiunta dovrebbe essere di circa 20 volte più quantità feci. Quindi filtrare e lasciare agire per 30 minuti. Rimuoviamo la pellicola dalla superficie del liquido sedimentato con un anello metallico e la trasferiamo su un vetrino, lo copriamo con un coprioggetto ed lo esaminiamo al microscopio. Il metodo Shcherbovich viene utilizzato per rilevare le uova con una densità maggiore (ad esempio uova di metastrongilidi), per le quali viene utilizzata una soluzione satura di solfato di magnesio. Un campione fecale (3-5 g) viene agitato in acqua fino ad ottenere una sospensione uniforme. Filtrare attraverso un colino in una provetta da centrifuga e centrifugare per 1-2 minuti. Lo strato superiore viene drenato e una soluzione satura di solfato di magnesio viene aggiunta al sedimento, mescolare bene e centrifugare nuovamente per 1-2 minuti. Quindi la pellicola superiore viene rimossa con un anello metallico, posta su un vetrino, coperta con un vetrino coprioggetto ed esaminata al microscopio.
Metodo di Kotelnikov e Khrenov. Un campione fecale (3 g) viene posto in un bicchiere e riempito con una piccola quantità di soluzione satura di nitrato di ammonio, agitato con una bacchetta di vetro (legno) e la soluzione viene aggiunta a 50 ml. Filtrare la sospensione in un altro bicchiere e lasciare agire per 10-15 minuti. Utilizzando un'ansa, rimuovere 3-4 gocce dalla superficie, trasferirle su un vetrino ed esaminarle al microscopio a basso ingrandimento. Troviamo uova di nematodi, trichocephalus, esofagostoma, strongyloides, metastrongilidi, neoascaridi, strongilati degli organi digestivi, moniesia e tizaniezia, parascaridae, toxocaris, ecc.
Metodo N.V. Demidov per la diagnosi di fascioliasi. Mettere un campione di feci (3 g di pecora, 5 g di bovino) in un bicchiere, versarvi una soluzione satura di cloruro di sodio, mescolare bene con una bacchetta di vetro e lasciare agire per 15-20 minuti. Le particelle di grandi dimensioni vengono rimosse dalla superficie; si aspira il liquido con una siringa, oppure si scola accuratamente, lasciando circa 20-30 ml, si aggiunge acqua al sedimento fino a riempire il bicchiere, si agita bene, si filtra al setaccio o 1 strato di garza; aspirare nuovamente il liquido lasciando 15-20 ml di sedimento; si versa il sedimento in piccoli bicchieri conici, si lascia per 3-5 minuti, si aspira il liquido e si trasferisce il sedimento su un vetrino, esaminandolo al microscopio a basso ingrandimento.
Metodo caro combina procedure di sedimentazione e flottazione. Le feci vengono mescolate con acqua e centrifugate per 3-5 minuti. Il liquido surnatante viene drenato e il fluido di Darling (glicerolo con una soluzione satura di cloruro di sodio, 1:1) viene aggiunto al precipitato, agitato accuratamente e centrifugato una seconda volta per 3-5 minuti. Utilizzare un anello metallico per rimuovere la pellicola da un vetrino, coprirlo con un vetrino coprioggetto ed esaminarlo.
Esistono molti altri metodi di ricerca modificati per rilevare le uova di elminti. Esistono metodi standardizzati di Fulleborn, Shcherbovich e altri: per tutti gli studi vengono prelevate le stesse piastre, i campioni vengono depositati e centrifugati per lo stesso tempo, vengono utilizzate anse dello stesso diametro e il numero di uova nel campo visivo del microscopio o in una goccia della pellicola superficiale viene confrontato prima e dopo il trattamento degli animali, per giudicare l'efficacia della sverminazione effettuata. Il metodo più semplice e accurato è quello proposto da M.Sh Akbaev utilizzando una rete realizzata con pellicola fotografica dopo raggi X. Inoltre, vengono utilizzati studi elminto-ovoscopici quantitativi.
Metodo della tabella. Innanzitutto si versano 56 ml di acqua in un cono da 100 ml e si segna all'esterno a livello del suo menisco. Quindi versare altri 4 ml di acqua e fare un nuovo segno. Si versa l'acqua e si versano 56 ml di soluzione di idrossido di sodio 0,1 N in un pallone tarato e si aggiungono feci sufficienti affinché il livello del liquido raggiunga 60 ml. (4 cm 3 feci), aggiungere 10-15 perle, agitare bene. Subito dopo l'agitazione, prelevare 0,075 ml o 0,1 ml della miscela con una pipetta graduata, applicarla su un vetrino ed esaminarla al microscopio, contando il numero di uova di elminti. Il numero di uova in 1 cm 3 (1 g) di feci, il numero di uova trovato viene moltiplicato per 200 (se sono stati esaminati 0,075 ml della miscela) o per 150 (se 0,1 ml della miscela).
Gli esami elmintolarvoscopici vengono utilizzati per la diagnosi della dittocauulosi, della mulleriosi e di altre protostrongiliasi, nonché della strongilatosi tratto digerente ruminanti e strongiloidosi di vari animali.
Metodo di Berman e Orlov. 10 g di feci vengono posti negli imbuti dell'apparato Baermann su una rete metallica o avvolti in pezzi di garza. Riempire con acqua a temperatura ambiente e lasciare agire per 3-6 ore. Durante questo periodo, le larve escono dal campione nel liquido e scendono attraverso il tubo fino al fondo della provetta. Il liquido dalla provetta viene drenato e aspirato. Dopo l'agitazione, il sedimento viene versato su un vetrino ed esaminato al microscopio a basso ingrandimento. Le larve dei nematodi sono mobili e facilmente rilevabili.
Una modifica semplificata del metodo Berman (secondo Shilnikov). I campioni fecali vengono posti in un bicchiere d'acqua e avvolti in tovaglioli di garza. Dopo 3-6 ore si prelevano i campioni, si lascia sedimentare il liquido per 10-15 minuti, quindi si aspira con una pipetta lo strato limpido di acqua. Una goccia di sedimento viene quindi pipettata su un vetrino per la microscopia.
Metodo di sedimentazione con centrifugazione.(metodo espresso secondo Kotelnikov e altri). 3-5 g di feci vengono posti in provette con acqua (20-25 oC) e centrifugati (1000-1500 giri/min) per 2 minuti. Quindi l'acqua viene drenata e il sedimento, agitato, viene versato su un vetrino ed esaminato per la presenza di larve.
Il metodo di Vaid. Diverse palline di feci di pecore e capre vengono poste su un vetrino o un vetro da orologio e viene aggiunta acqua alla temperatura di 40 o C. Dopo 4 minuti, le palline vengono rimosse e il liquido rimasto sul vetro viene esaminato al microscopio per l'analisi. presenza di larve di nematodi. Scoperto metodi diversi le larve devono essere differenziate.
Analisi del sangue secondo Kulikov. Si prelevano 20 ml di sangue dalla vena giugulare e si aggiungono 2 ml di una soluzione acquosa al 3,8% di citrato di sodio e si lascia agire per 20-25 minuti. Si formano 3 strati: lo strato inferiore è costituito da globuli rossi depositati, lo strato intermedio è costituito da leucociti e larve di nematodi e lo strato superiore è siero. Utilizzando una pipetta sottile, prelevare il contenuto dello strato intermedio, applicarlo a gocce su un vetrino, coprirlo con un vetrino coprioggetto e osservare al microscopio.
Analisi del sangue bovino (secondo Steward). Rimuoviamo i peli dalla pelle e disinfettiamo la zona. Usa una pinzetta per tirare indietro la pelle e taglia lo strato superficiale con le forbici curve. Posizionarlo su un vetrino in una goccia di soluzione salina e dividerlo con cura con aghi da dissezione. Il liquido viene esaminato al microscopio.
Studio della pelle del cavallo secondo R.S. Chebotarev. Sul garrese, sulla spalla e in altri punti, selezionare un'area di pelle di 5 cm 2 e disinfettarla con alcool. Afferriamo la pelle in una piega, tagliamo un pezzo di 3-4 mm di spessore e 2-3 cm 2 di area. Le sezioni vengono poste in una provetta riempita con 2-3 ml di soluzione salina e lasciate per alcune ore in termostato a 36-37°C oa temperatura ambiente. Quindi il contenuto della provetta viene versato su un vetro da orologio ed esaminato al microscopio per rilevare larve di onchocercus.
Diagnostica immunobiologica. In pratica usano reazioni allergiche per la diagnosi dell'elmintiasi tissutale o delle cosiddette cestodiasi larvali, come l'echinococcosi, la cenurosi, la cisticercosi, nonché i nematodi come la trichinosi. A questo scopo viene utilizzato un test intradermico. Come antigene si consiglia il liquido delle larve (vescicole) o gli estratti di Trichinella e delle loro larve.
Attualmente viene prestata molta attenzione allo sviluppo e all'utilizzo reazioni sierologiche utilizzando larve di elminti vive come antigeni. Secondo questo principio, le reazioni di microprecipitazione vengono eseguite sulle larve di nematodi vive nei nematodi, sulle cercarie nei trematodi, sulle oncosfere e sugli scoletti nelle cestodi larvali. Un altro principio delle reazioni sierologiche è associato all'uso di antigeni somatici. Vengono utilizzate reazioni di emoagglutinazione e flocculazione (agglutinazione) con antigeni adsorbiti. Come adsorbenti vengono utilizzati carminio, bentonite e resina sintetica di lattice.
Un tipo di reazione sierologica è: la reazione di scolexoprecipitazione (RSkP), sviluppata da R.S. Schultz e R.G. Ismagilova per la diagnosi di echinococcosi negli ovini. Altre reazioni: RNGA, RZGA, ecc.
La sverminazione diagnostica è un metodo di esame macroelmintoscopico. Si usa in caso di sospetto di moniesiosi, tisanieziosi, avitellinosi dei ruminanti, anoplocefalidosi dei cavalli, taeniasi dei carnivori, drepanidoteniosi degli uccelli acquatici, ascariasis dei maiali, ascariasis dei polli, ecc. ad un piccolo gruppo di animali; Nei casi più sospetti della malattia, viene somministrato un antielmintico appropriato in dose terapeutica o ridotta. Gli animali vengono osservati e tutti gli escrementi vengono controllati per individuare elminti o loro frammenti, che vengono ulteriormente esaminati.
E infine, metodi per studiare altri organi.
Esame delle urine: per dioctofimosi dei reni, capillariasi della vescica. L'urina deve essere prima esaminata macroscopicamente o con una lente d'ingrandimento per verificare la presenza di elminti o dei loro frammenti. L'urina viene diluita a metà con acqua distillata e centrifugata per 2-3 minuti, il liquido viene drenato e il sedimento viene applicato su vetrini ed esaminato.
Esame del contenuto della trachea degli uccelli: in esso sono chiaramente visibili syngamus o ciatostomi, che di solito hanno un colore rosso brillante.
Esame della camera oculare. La diagnosi intravitale della setaria negli occhi dei cavalli e dei bovini viene effettuata mediante esame macroscopico della camera anteriore dell'occhio affetto, dove è possibile vedere la setaria che nuota liberamente (5-10 cm) ed è chiaramente visibile anche attraverso una cornea annebbiata.
Esame di un raschiamento superficiale delle pieghe perianali: un bastoncino o un fiammifero inumidito con una soluzione acquosa di glicerina al 50% effettua un raschiamento delle pieghe perianali con dentro radice della coda e dalla zona perineale. Il materiale raschiato viene trasferito su un vetrino in 2-3 gocce di glicerolo (1:1 in acqua), coperto con un coprioggetto ed esaminato al microscopio per la presenza di uova di ossiurato.
Metodi per la diagnosi post mortem delle infezioni da elminti
- studi patologici. Diagnosi post mortem delle elmintiasi in vari stadi del loro sviluppo negli organi e nei tessuti degli animali. Il metodo più avanzato di dissezione elmintologica è stato sviluppato da K.I. Skryabi. Esistono autopsie elmintologiche complete e incomplete.
Un'autopsia elmintologica completa è la cosa migliore metodo affidabile, che consente la registrazione sia quantitativa che qualitativa di tutti gli elminti che infestano l'animale.
L'essenza questo metodo: dopo aver rimosso la pelle dal cadavere, esaminare attentamente tessuto sottocutaneo, quindi apri il baule e cavità addominale e rimuovere tutti i sistemi di organi: digestivo, respiratorio, circolatorio, genito-urinario, ecc.
Gli organi vengono separati ed esaminati separatamente, utilizzando il metodo dei lavaggi sequenziali. Organi parenchimali(fegato, polmoni, pancreas, reni, ecc.) vengono posti in un contenitore separato e trasformati in carne macinata, strappando con le mani o tagliando a pezzetti con un coltello o con le forbici. Successivamente, questi detriti vengono lavati con acqua o soluzione salina utilizzando il metodo dei lavaggi successivi. Il precipitato risultante viene studiato in piccole porzioni, prima in cuvette nere e poi bianche o in piastre Petri su fondo bianco e nero. Grandi elminti vengono selezionati visivamente e quelli piccoli - utilizzando una lente d'ingrandimento portatile con ingrandimento 8-10x. Gli elminti vengono raccolti solo con una spazzola o aghi da dissezione, ma non con una pinzetta o con le dita nepalesi.
L'NPGV è una dissezione elmintologica semplificata, durante la quale solo i singoli elminti con dimensioni distinte vengono rimossi da organi e tessuti. Viene utilizzato anche per ottenere materiale museale.
Ricerca elmintologica di oggetti ambiente esterno. Raccolta, conservazione e spedizione di elminti. Fissazione, colorazione degli elminti e preparazione di micropreparati permanenti da essi. Allestimento di macroallestimenti museali. Diagnosi di laboratorio dei trematodi. Diagnosi: fascioliasi, dicroceliosi, opisthorchiasis, paramphistomatosi, prostagonymosi degli uccelli, echinostomiasi delle anatre e delle oche.
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